Разработка боковой проточной иммунохроматографической полосы для быстрого и количественного обнаружения маломолекулярных соединений

Процедура описывает получение коллоидного золота и сборку иммунохроматографических полосок. Во-первых, хлорауровая кислота и цитрат натрия использовались для синтеза коллоидного золота. Цитрат натрия добавляли в раствор хлорауроновой кислоты и кипятили для получения коллоидного золота с соответствующим размером частиц.

Синтез, коллоидное коллоидное антитело золота конъюгировано. После центрифугирования коллоидные частицы золота растворяли в соответствующем растворе, а затем повторно суспендировали для получения коллоидного раствора золота. Погрузьте стеклянную мембрану в сопряжение, чтобы подготовить сопряженную прокладку.

Капайте искусственный антиген и вторичные антитела на мембрану NC в виде линии Т и линии С. Прикрепите мембрану с ЧПУ, абсорбивную мембрану, прокладку для образцов и мембрану из стекловолокна к плите ПВХ соответственно. Нарежьте собранный картонный картонат на полоску шириной 3,5 миллиметра.

Кондитерский полнопроцентный раствор хлорида золота и 1%раствор цитрата натрия соответственно. Включите магнитную мешалку и поместите колбу на смеситель. Добавьте 120 миллилитров дистиллированной воды в колбу с круглым дном и нагрейте ее до кипения на термостатической магнитной мешалке.

Держите кипение и быстро добавьте 0,5 миллилитра полнопроцентной хлорауровой кислоты и пять миллилитров 1% цитрата натрия. Продолжайте нагревать в течение пяти-10 минут. Наблюдайте, как цвет раствора меняется от бледно-желтого до винно-красного.

Выключите питание термостатического магнитного смесителя, охладите до комнатной температуры и поместите смесь в чистую бутылку. Хранить при четырех градусах по Цельсию. Наночастицы золота показывают эффект Тиндалла.

Размер и морфологию наночастиц золота определяли с помощью ультрафиолетовой спектроскопии и визуализации просвечивающих электронных микроскопов. Добавьте 100 микролитров раствора натрия хлорида в восемь пробирок. Отрегулируйте растворы коллоидного золота до рН от 5 до 12, используя 0,1 моль на литр карбоната калия.

Добавьте 100 микролитров коллоидного раствора золота в восемь пробирок, содержащих хлорид натрия. Постоять на столбе через несколько минут после смешивания. Наблюдайте за изменением цвета каждого раствора трубки и записывайте трубку, которая остается красной.

Выберите значение pH с наименьшим количеством добавленного карбоната калия и стабильным цветом раствора в качестве оптимального значения pH для приготовления сопряжения. Адаптирован тот же подход. Наблюдается изменение цвета и запись трубки, которая остается красной.

Выберите количество антител с наименьшей концентрацией mAB и стабильным цветом раствора в качестве оптимального количества mAB. Возьмите 10 миллилитров раствора коллоидного золота и используйте 0,1 моль на литр карбоната калия, чтобы отрегулировать раствор до оптимального значения рН. Медленно добавьте SSd mABs с соответствующей концентрацией и встряхните при комнатной температуре в течение 30 минут.

Центрифугировать смесь при 2000 об/мин в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. Удалите осадок, содержащий примеси осажденного коллоидного золота. Центрифугировать смесь при 10 000 об/мин в течение 40 минут.

Выбросьте супернатант. Осадок представляет коллоидный mAB конъюгат mAB коллоидного золота. Добавьте соляную кислоту Tris, BSA, Tween 20 и PEG 20 000, затем хорошо перемешайте для приготовления буфера повторной суспензии.

Добавьте буфер повторного суспендения и отсоединит осадок. Полоса мембранного материала, включая стеклянную целлюлозную мембрану, полиэфирную целлюлозную мембрану и плиту ПВХ. Мембранный материал, нужно отслеживать и оценивать с помощью стерильного микроскопа, чтобы избавиться от неоднородности.

Во-первых, поместите мембрану NC на плиту ПВХ в двух сантиметрах от края секционного конца доски. Во-вторых, опустите два миллиграмма на миллилитр SSd-BSA на мембрану NC в двух сантиметрах от верхнего края в качестве тестовой линии и сбросьте 1,5 миллиграмма на миллилитр золотого антимышеского IgG на мембрану NC в двух сантиметрах от нижнего края в качестве контрольной линии. Прикрепите абсорбивную прокладку к листу ПВХ над мембраной NC и перекрывайте мембрану NC на два миллиметра.

Обрежьте стекловолокнистую мембрану до пяти сантиметров в длину и двух сантиметров в ширину и используйте в качестве сопряженной прокладки. Погрузите стеклянно-волоконную мембрану в конъюгированный раствор наночастиц золота mAB. Замочите на некоторое время, чтобы сделать поглощение наночастиц золота mAB.

Высушите широкую мембрану в инкубаторе при 37 градусах. Вставить предварительно обработанный сопряженный подушечек под мембрану НК и длина перекрытия с мембраной НК должна составлять 0,1 сантиметра. Обрежьте мембрану Fusion3 до 1,8 сантиметра в длину и 3,5 сантиметра в ширину и используйте в качестве образца.

Затем поместите прокладку для образцов на доску ПВХ и перекройте сопряженную прокладку на два миллиметра. Нарежьте, соберите картон на полосы шириной 3,5 миллиметра с помощью режущего станка и компактно используя систему периодического ламинирования. Наконец, поместите тест-полоски в оболочку.

Запечатайте их в пакет из алюминиевой фольги, содержащий адсорбционный материал, и храните вдали от света. В настоящее время ICS собрана. Опустите 50 микролитров раствора образца на отверстие для образца, чтобы наблюдать за процессом хроматографии.

Затем проанализируйте полоски с помощью портативного считывателя полос. Машина может обеспечить соотношение испытательной линии к управляю. Оцените специфичность, чувствительность, повторяемость и стабильность теста ICS.

Были прочитаны подготовленные растворы коллоидного золота. Анализы просвечивающих электронных микроскопов показали, что частицы были многогранной формы и равномерно распределены со средним диаметром 14 нанометров. Изображения просвечивающего электронного микроскопа с высоким разрешением показали непрерывную картину бахромы с интервалом 0,117 нанометра наночастиц золота.

Ультрафиолетовое видимое поглощение указывало на то, что различные размеры коллоидных частиц золота могут быть получены путем изменения пропорции цитрата натрия и хлораурисовой кислоты. В количественном эксперименте полоски с результатами теста сайкосапонина D сканировали с помощью портативного считывателя ICS. Мы рассчитали стандартную кривую, связав неконцентраты сайкосапонина D с соответствующей абсорбцией при каждой концентрации.

После методологического исследования метод может быть применен для количественного и полукачественный детектирования соединений малых молекул. Эта процедура включает в себя получение коллоидного золота, синтез конъюгата наночастиц золота mAB, сборку полосы и методологическое исследование. Данная работа содержит подробный протокол разработки иммунохроматографической полосы для использования в быстром и количественном обнаружении малых молекул.

После просмотра этого видео я надеюсь, что у вас есть хорошее понимание для приготовления иммунохроматографической полосы. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.