Поведенческий экран для тепловых припадков в мышиных моделях эпилепсии

Целью метода является скрининг на гипертермию или вызванные теплом судороги в мышиных моделях. Протокол описывает использование специально построенной камеры с непрерывным мониторингом температуры тела, чтобы определить, приводит ли повышенная температура тела к судорогам.

Мутации GEFS+вызывают фебрильные судороги у пациентов. Возможность изучения судорог, вызванных гипотермией, у мышей GEFS+mice позволяет изучить взаимосвязь между специфическими мутациями и профилем судорог. Цифровой регулятор температуры помогает установить градиент температуры в нагревательной коробке воспроизводимым образом.

Таким образом, температура тела мыши может быть повышена с медленной и устойчивой скоростью. Этот протокол может быть использован для выявления потенциальных методов лечения, таких как лекарства или диетические ограничения, которые могут быть использованы для уменьшения или устранения фебрильных судорог. Чтобы вставить ректальный температурный зонд в мышь без травм, мы рекомендуем ненадолго обезболить мышь и смазать кончик ректального зонда.

Начните с включения тепловой камеры мыши с помощью кнопки включения питания, а затем нажмите кнопку включения тепла. С помощью клавиатуры на цифровом регуляторе температуры установите температуру тепловой камеры на уровне 50 градусов Цельсия. Выровняйте пол тепловой камеры початочными подстилками.

Установите видеорегистратор перед тепловой камерой. Выровняйте чашку Петри диаметром 140 миллиметров толстыми слоями папиросной бумаги и поместите ее на лед, чтобы она служила охлаждающей прокладкой. Для скринингового анализа убедитесь, что масса тела мыши составляет 15 граммов и более.

Перед началом процедуры убедитесь, что мышь полностью обезболена щипкой пальца ноги. Покройте металлический наконечник ректального температурного зонда смазкой и аккуратно вставьте его в мышь. Закрепите ректальный зонд на хвосте мыши скотчем.

Поместите мышь в новую клетку для восстановления, выстланную початковой подстилкой. Запустите таймер и наблюдайте за мышью в течение пяти минут, наблюдая за температурой тела, пока мышь полностью не оправится от анестезии и температура не стабилизируется на уровне от 35 до 36 градусов по Цельсию. В конце пяти минут отметьте температуру тела мыши как начальную температуру тела в нулевую минуту.

Быстро перенесите мышь на пол предварительно нагретой тепловой камеры мыши, чтобы начать экспериментальное испытание. После того, как мышь помещена в предварительно нагретую камеру мыши, запустите камеру и секундомер, увеличьте температуру тепловой камеры через равные промежутки времени, чтобы температура тела мыши увеличивалась со скоростью 25,2,5 градуса Цельсия в минуту. Начните записывать температуру тела мыши с интервалом в одну минуту в течение всего эксперимента.

Через 9,5 минут установите температуру тепловой камеры на 55 градусов Цельсия, чтобы стабилизировать температуру тепловой камеры на уровне 55 градусов Цельсия к 10-й минуте. Аналогично добиваются стабильной температуры тепловой камеры до 60 градусов Цельсия к 20-й минуте. Каждое испытание скрининга судорог длится в течение 30 минут.

Если мышь испытывает приступ, запишите температуру тела мыши во время припадка, как температуру порога припадка. Обратите внимание на характеристики судорожного поведения, отображаемые мышью, затем быстро поднимите мышь из камеры и поместите ее на охлаждающую подушку. Если мышь не испытывает приливов, вызванных теплом, в течение 30-минутного периода наблюдения, или температура тела мыши достигает 44 градусов по Цельсию, поместите мышь на охлаждающую подушку.

Когда температура тела мыши снизится до 36-37 градусов по Цельсию, переведите мышь в клетку восстановления. Чтобы удалить ректальный зонд из мыши, аккуратно обрежьте ленту между хвостом мыши и проводом ректального зонда. Протрите и очистите металлический наконечник ректального зонда 70% этанолом.

Наблюдайте за мышью, пока она не восстановится, прежде чем вернуть ее в домашнюю клетку. Продолжайте следить за состоянием мыши. Отметьте окончание экспериментального испытания.

Сбросьте температуру тепловой камеры мыши до 50 градусов по Цельсию и дайте ей уравновеситься перед следующим анализом. В анализе теплового захвата средняя температура тела мышей регистрировалась каждую минуту с использованием протокола нагрева, и оценивалась скорость изменения температуры тела с течением времени. Не было выявлено различий в скорости изменения температуры тела между гетерозиготными мутантными и дикими мышами в соответствующих генетических фонах.

Экспериментальная и контрольная группы мышей демонстрировали различное поведение при воздействии периодического повышения температуры тела. Все гетерозиготные мутантные мыши с генетического фона 129X1 или B6NJ демонстрировали тепловые судороги. Ни у одной из мышей дикого типа в обогащенном 129X1 фоне не наблюдались судороги, в то время как только у трети мышей из чувствительного к судорогам фона B6NJ наблюдались судороги.

Средняя пороговая температура захвата мутантных мышей 129X1 существенно не отличалась от средней пороговой температуры захвата, наблюдаемой у мышей B6NJ. Одна треть мышей дикого типа B6NJ, у которых были судороги, вызванные теплом, имели пороговую температуру захвата, которая была значительно выше, чем у гетерозиготных мышей-мутантов B6NJ. Тяжесть приступов измеряли с помощью модифицированной шкалы Расина.

Максимальный балл Расина гетерозиготных мутантных мышей на обогащенном 129X1 фоне существенно не отличался от гетерозиготных мутантных мышей в генетическом фоне B6NJ. Устанавливая протокол нагрева, следите за тем, чтобы температура тела мыши не повышалась со скоростью более 25 градусов цельсия в минуту, иначе это может быть вредно для здоровья животного. Было бы очень здорово объединить протокол нагрева с одновременными записями ЭЭГ, что позволило бы соотносить различные паттерны мозговой активности с разными типами судорожного поведения.