Выделение и культивирование первичных эпителиальных клеток области области человека с использованием Y-27632
6 ноября 2021 г.
Здесь мы представляем модифицированный метод выделения и культивирования эпителиальных клеток реснь человека путем добавления ингибитора Породы, Y-27632, к традиционному методу. Этот метод проще, менее трудоемкий, усиливает свойства стволовых клеток и производит большее количество высокофомотриальных эпителиальных клеток как для лабораторных, так и для клинических применений.
Таким образом, общая цель этого клеточного протокола состоит в том, чтобы изолировать и столкнуться с эпителиальными клетками области человека, чтобы улучшить недостатки метода прямых баклажанов. Из нового модифицированного эндотемического метода мы можем получить большее количество первичных эпителиальных клеток области за относительно короткое время, основываясь на наших материалах и оборудовании. Таким образом, человеческая ткань, используемая в этом протоколе, представляла собой свежие взрослые области ресниц, выброшенные из удалений ретинированных зубов в отделении челюстно-лицевой хирургии в соответствии с руководящими принципами Комитета по этике исследований человека института.Новый модифицированный ферментативный метод.Предварительная обработка ткани денивальной ткани.Промыть ткани 75% этанолом в течение 30 секунд. А затем, с моющее раствором дважды по пять минут каждый. Переваривание ткани реза.Разрезать ткани на крошечные кусочки двумя хирургическими лезвиями. Добавьте 2,5 мг/милилитр диспазы и раствор коллагеназы-1 в 1,5-мильлитровый центрифужный тюбик. Поместите кусочки ткани в 1,5-мильную центрифужную трубку. Инкубировать в течение 15-20 минут в 37
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье представлен модифицированный метод выделения и культивирования эпителиальных клеток десны человека с использованием ингибитора Rock Y-27632. Данный подход упрощает процесс, сокращает временные затраты и усиливает стволовые свойства культивируемых клеток.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Методы культивирования клеток
- Исследования стволовых клеток
- Регенеративная медицина
Обоснование
- Эпителиальные клетки десны человека имеют решающее значение для различных биомедицинских применений.
- Традиционные методы их выделения могут быть трудоемкими и неэффективными.
- Улучшение свойств этих клеток может повысить их полезность в исследовательских и клинических условиях.
- Ингибитор Rock, Y-27632, известен тем, что усиливает характеристики стволовых клеток.
Цель исследования
- Разработать более эффективный метод выделения и культивирования эпителиальных клеток десны человека.
- Оценить влияние Y-27632 на выход клеток и свойства стволовых клеток.
- Предоставить протокол, который может быть легко внедрен в лабораторную практику.
Используемые методы
- Модификация традиционных методов изоляции клеток.
- Введение ингибитора Rock, Y-27632, в процессе культивирования.
- Оценка выхода и качества клеток после культивирования.
- Сравнение со стандартными методами изоляции.
Основные результаты
- Модифицированный метод позволил получить большее количество эпителиальных клеток.
- Клетки продемонстрировали более выраженные свойства стволовых клеток по сравнению с традиционными методами.
- Было установлено, что данный процесс занимает меньше времени.
- Этот подход подходит как для лабораторного, так и для клинического применения.
Выводы
- Добавление Y-27632 значительно улучшает выделение и культивирование эпителиальных клеток десны человека.
- Данный метод может способствовать развитию исследований стволовых клеток и регенеративной медицины.
- В будущих исследованиях могут быть изучены другие варианты применения этого метода.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для отрасли
Выделение первичных эпителиальных клеток десны человека способствует валидации мишеней при восстановлении тканей полости рта и тестировании совместимости биоматериалов. Ферментативный метод с применением Y-27632 увеличивает выход клеток и сокращает время культивирования, устраняя трудности в получении клинически значимых образцов. Это позволяет создавать более надежные доклинические модели для изучения регенерации периодонта и эпителиального барьера.
Стратегические применения в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишеней
- Научная ценность: позволяет исследовать функции эпителиальных клеток в путях восстановления и регенерации тканей периодонта.
- Практическая ценность: обеспечивает масштабируемый источник первичных клеток человека для снижения рисков при разработке мишеней в анализах заживления ран в полости рта.
Скрининг и разработка анализа
- Научная ценность: Позволяет получать стандартизированные культуры эпителиальных клеток для количественной оценки взаимодействия с биоматериалами и цитотоксичности.
- Практическая ценность: Повышает пропускную способность и воспроизводимость скрининговых платформ на основе эпителиальных клеток благодаря более высокой выживаемости клеток и потенциалу к пассированию.
Трансляционные и доклинические исследования
- Научная ценность: Обеспечивает релевантное для изучения заболеваний моделирование функции барьера десневого эпителия при периодонтите и в исследованиях заживления ран.
- Практическая ценность: Способствует трансляционной преемственности от этапа открытия к доклинической валидации с использованием тканей, полученных из клинических источников.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный метод встраивается в рабочие процессы раннего этапа поиска лекарств, предоставляя валидированные эпителиальные клетки для последующего изучения взаимодействия с мишенями и фенотипического скрининга.
- Фундаментальная биология: позволяет проверять гипотезы о путях эпителиальной сигнализации, участвующих в восстановлении и регенерации тканей.
- Скрининг: обеспечивает воспроизводимые количественные результаты на основе клеточных моделей для оценки влияния соединений на пролиферацию и дифференцировку эпителия.
- Аналитика: дает измеряемые конечные точки, такие как выход клеток, жизнеспособность и экспрессия маркеров стволовых клеток для сравнительного анализа условий.
- Трансляционные исследования: обеспечивает связь с доклиническими моделями за счет использования клеток человека, отражающих биологию тканей десны.
- Корпоративное повторное использование: устанавливает воспроизводимый протокол изоляции для стабильного обеспечения эпителиальными клетками нескольких проектов.
Операционное и корпоративное влияние
- Научная ценность: Повышает достоверность прогнозов при валидации эпителиальных мишеней за счет улучшения качества клеток и их стволовых свойств.
- Операционная ценность: Сокращает время и сложность изоляции клеток, повышая эффективность работы лаборатории и воспроизводимость образцов.
- Стратегическая ценность: Способствует принятию более обоснованных решений о целесообразности дальнейшей разработки оральных биоматериалов за счет снижения биологической вариабельности.
- Влияние на портфель проектов: Позволяет проводить приоритизацию кандидатов с учетом рисков на основе профилей безопасности и совместимости с эпителием.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы с первичными культурами клеток и методами ферментативной диссоциации тканей.
- Зависимость от наличия свежей ткани десны человека и стандартного оборудования для культивирования клеток.
- Необходима стандартизация концентрации Y-27632 и времени инкубации для всех пользователей.
- Требуется учет особенностей адаптации при применении протокола к другим типам эпителиальных тканей.
- Ограничено конечным сроком жизни и пассажным потенциалом первичных дифференцированных эпителиальных клеток.
