Пробоподготовка для трехмерной визуализации сосудов задних конечностей на основе компьютерной томографии

Здесь мы описываем метод визуализации и количественной оценки сосудов задних конечностей мышей с использованием микро-рентгеновской компьютерной томографии.

Можно сделать КТ-снимки кровеносных сосудов в нижних конечностях и органах брюшной полости с помощью пошагового протокола. Метод позволяет всесторонне оценить все кровеносные сосуды. Кроме того, можно оценить только артерии или одновременно артерии и вены.

Очень важно предотвратить сгустки крови, утечки крови или крови хорошо, и избегать пузырьков воздуха. Перед операцией вводят 1 единицу/грамм гепарина в PBS во внутрибрюшинную полость мыши. Через 30 минут сделайте разрез средней линии в грудине усыпленной мыши и зафиксируйте открытую грудную клетку булавками.

Отрежьте восходящую аорту перед удалением сердца, а затем удалите легкое, чтобы обнажить нисходящую аорту. Разрежьте нисходящую аорту по диагонали, чтобы выявить поперечное сечение сосуда. Затем вставьте катетер 22-го калибра в нисходящую аорту во время работы буфера вазодилатации.

Закрепите корень катетера и сделайте узел, чтобы предотвратить утечку из-за обратного потока. После этого начните перфузию с подогретого сосудорасширяющего раствора при фиксированном давлении от 13 до 15 килопаскалей. Через три минуты перфузить раствором 4%-го параформальдегида в ПБС в течение 3 мин.

Остановите перфузию и заполните удлинительную трубку, подключенную к катетеру, 2 мл свежеприготовленного контрастного вещества, разбавленного в соотношении 1:1 для перфузии при фиксированном расстоянии от 13 до 15 килопаскалей. Чтобы визуализировать артерии, проверьте ноготь рта, чтобы подтвердить, что контрастное вещество достигло артерии. Таким же образом проверьте нижнюю полую вену диафрагмы, чтобы подтвердить полную циркуляцию контрастного вещества и визуализировать все сосуды.

Если циркуляция контрастного вещества завершена, закройте трехсторонний запорный кран и снимите трубку. Инкубируйте образец в течение ночи при температуре 4 градуса Цельсия. В этом протоколе были визуализированы все сосуды в нижних конечностях мыши.

Результаты модели ишемии задних конечностей подтвердили, что нелигированная бедренная артерия проходит параллельно бедренной вене. Также прерывание контрастных веществ позволило легко увидеть перевязанную бедренную артерию и развитие коллатеральных сосудов. Можно было увидеть несколько сосудов, заполненных контрастным веществом.

С другой стороны, также было замечено нарушение контрастных сред из-за смешивания неконтрастных сред или недостаточной перфузии. Невозможно было рассмотреть артерии на поверхности тела путем микроскопического стереомикроскопического наблюдения контрастного вещества, что облегчило оценку дефектов сосудистой системы. Очень важно избегать пузырьков воздуха при введении катетера.

Поскольку их органы брюшной полости также расслаблены, можно вынуть из органов и сделать компьютерную томографию. Используя этот метод, мы смогли определить новый квартал насыщения.