Репортерный клеточный анализ для мониторинга эффективности сплайсинга

2.8K просмотров

Цитируется: 4

08:53 мин.

15 сентября 2021 г.

10.3791/63014-v

15 сентября 2021 г.

2.8K просмотров

Этот протокол описывает минигенный репортерный анализ для мониторинга влияния мутаций 5-образного сайта сращивания на сплайсинг и разрабатывает супрессор U1 snRNA для спасения ингибирования сплайсинга, вызванного мутациями. Конструкции репортера и супрессора U1 snRNA экспрессируются в клетках HeLa, а сплайсинг анализируется путем праймерного расширения или ОТ-ПЦР.

Больше видео

U1

Chapters in this video

0:04

Introduction

0:31

Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids

2:00

32P-Labeling of Oligonucleotides

2:52

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension

3:53

Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR

5:08

Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR

5:38

Setup and Running of Urea-PAGE Gels

6:27

Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs

8:09

Conclusion

Related Videos