Радиосинтез 1-(2-[^18F]Фторэтил)-L-триптофана с использованием одноступенчатого двухэтапного протокола

Общая цель этого протокола состоит в том, чтобы радиосинтезировать радиомаркированный триптофановый индикатор F18 с помощью двухэтапного подхода. Радиоиндикатор может найти широкое применение для визуализации метаболизма триптофана. В методе используется радиоизотоп с более длительным периодом полураспада, меньшим предшественником реакции и меньшим объемом реакции, а также экологически доброкачественной фазой для очистки.

Радиоиндикатор может использоваться для диагностики различных расстройств, влияющих на мозг, включая, но не ограничиваясь эпилепсией, нервно-психическими расстройствами и нейроонкологией. Этот метод может быть применен к другим коммерчески доступным модулям радиомаркировки. После получения раствора фторида F18 начните с осмотра свинцовой коробки на поверхности и с расстояния в один метр запишите максимальные показатели радиационного облучения.

После выполнения теста на салфетку, чтобы убедиться, что транспортная коробка не загрязнена, запишите дозу фтора F18 и время. Перенесите раствор фторида F18 в систему синтеза радиохимии. Соедините линию аргона короткой иглой, а линию переноса фтора F18 длинной иглой с флаконом фтора F18.

Затем закройте стеклянную дверь с горячими ячейками и свинцовую дверь. Включите линию подачи аргона, щелкнув Источник аргона. Увеличьте давление аргона и включите линию толкания фторида F18, чтобы протолкнуть водный фторид F18 через картридж QMA.

Как только вся радиоактивность будет захвачена в световом картридже QMA, а показания детектора радиоактивности будут устойчивыми, увеличьте давление аргона и продуйте аргон через картридж еще на пять минут, чтобы удалить лишнюю воду. После отключения линии толкания фторида F18 уменьшите давление аргона до нуля и переключите шестипортовый двухпозиционный клапан из положения улавливания фтора F18 в положение элюирования. Откройте реакционный флакон, включите входную позицию MVP на одну линию аргона и протолкните раствор K222 и карбоната калия во входное положение MVP одним флаконом через легкий картридж QMA, чтобы элюировать радиоактивность в реакционный флакон.

Переключите положение элюирования фторида F18 в положение улавливания. Нажмите кнопку «Тепло», чтобы нагреть реактор при 110 градусах Цельсия, включите выходную позицию MVP - четвертую аргоновую линию, которая соединяется с реактором, и испарите растворитель в выходную позицию MVP четыре флакона. Нажмите кнопку Cool, чтобы охладить реактор до комнатной температуры сжатым углекислым газом.

Выключите линию подметания, переключите входную позицию MVP с одной на вторую и добавьте безводный ацетонитрил во флакон два. Два поворота на подметально-уборочной линии и нагревателе на азеотропно сухой фторид F18 при 110 градусах Цельсия. Как только реактор достигнет комнатной температуры, выключите подметальную линию, переключите входное положение MVP со второго на третье и добавьте предшественник радиомаркировки тозилата в три флакона.

Закройте реактор и нагревайте реакционные смеси при 100 градусах Цельсия в течение 10 минут. Чтобы испарить реакционный растворитель, как только реактор остынет, включите подметальную линию и испарите реакционный растворитель при 100 градусах Цельсия. Как только реактор остынет, выключите подметальную линию и переключите входную позицию MVP с третьей на четвертую.

Когда добавляют смесь ацетонитрилов соляной кислоты, нагревают реакцию при 100 градусах Цельсия в течение 10 минут для дезащиты трет-бутиловых и трет-бутилоксикарбониловых защитных групп в предшественнике радиомаркировки. Чтобы нейтрализовать реакцию, когда реактор достигнет комнатной температуры, переключите входную позицию MVP с четвертой на пятую и добавьте два молярных гидроксида натрия в реакционную смесь и отключите входную линию аргона MVP. Затем начните передачу реакционной смеси в промежуточный файл, нажав кнопку F в выходном MVP, чтобы переключить выходной MVP из положения выпуска четыре в положение пять, а затем, нажав кнопку F на входном MVP, чтобы переключить входной MVP с позиции пять на позицию шесть.

После включения выходной линии аргона MVP протолкните реакционную смесь через сложенные нейтральные картриджи оксида алюминия и C8 в промежуточный флакон, установленный перед контуром образца ВЭЖХ. Для промывки реактора переключите выходную позицию MVP с пяти на шестую, протолкните раствор промывки во флаконе выходного положения MVP шесть через реакционный флакон, картриджи и промежуточный флакон последовательно. Далее начинают очистку смеси с переключения контура ВЭЖХ из положения впрыска в положение нагрузки и включения входной линии аргона MVP.

Когда смесь будет загружена в пятимиллилитровую петлю ВЭЖХ, переключите кнопку Load на Inject, щелкните Inject HPLC, чтобы запустить хроматограмму ВЭЖХ со скоростью потока три миллилитра в минуту, а затем нажмите кнопку МОНИТОРА ВЭЖХ для доступа к хроматограмме ВЭЖХ в режиме реального времени. Нажмите кнопку Diversion MVP, чтобы перенаправить целевую фракцию ВЭЖХ в короткий столбец C18 примерно через 12 минут. После того, как целевая радиоактивность собрана в колонне C18, переключите четырехпортовый двухпозиционный отводной клапан в положение сбора отходов и промывайте хиральную колонну со скоростью четыре миллилитра в минуту в течение шести минут для удаления незначительного энантиомера D F18 FETrp и других ультрафиолетовых примесей.

Нажмите кнопку Diversion MVP, чтобы перенаправить мобильную фазу ВЭЖХ обратно в положение MVP формулы один со скоростью три миллилитра в минуту. Обратите внимание, что подвижная фаза проходит через хиральную колонну и колонну C18 для очистки L-F18 FETrp, удерживаемого в колонне C18. Примерно через 32-34 минуты соберите целевую фракцию в состав MVP позиции двух флаконов.

Затем протолкните препарат MVP в положение двух флаконов через линию доставки и стерильный фильтр в конечную дозу флакона. Анализ активности и объема конечной дозы после удаления стерильного фильтра. Промывайте систему сверхчистой водой с последующим этанолом со скоростью потока четыре миллилитра в минуту в течение не менее 15 минут на одну промывку.

Выключите насос ВЭЖХ и блок ПЛК, закройте программу, отключите сжатую авиакомпанию, линию аргона, линию углекислого газа и основную мощность модуля. Выведите приблизительно 0,1 миллилитра конечной дозы в 0,2-миллилитрную вставку флакона СК. Запустите горячий образец, так как программа частичной последовательности описана в текстовой рукописи.

Анализ данных КК путем расчета химической и радиохимической чистоты в энантиомерных избыточных значениях и молярной активности. После определения значения рН высвобождают дозу, если все результаты испытаний проходят допустимый диапазон. Показаны репрезентативные ВЭЖХ-хроматограммы для КК.

Незначительные пики между объемами пустоты за 10 минут программы были обнаружены в пустой хроматограмме. Нерадиомаркированный стандартный эталон L-фторэтил-тритофан показал наличие одного изомера, хорошо отделенного от стандартного эталона его D-аналога. Окончательная доза триптофана L-F18 показала высокую химическую чистоту и радиохимическую чистоту.

Тестирование стабильности конечного продукта при самой высокой концентрации дозы в течение восьми часов показало, что триптофан L-F18 стабилен с точки зрения химической чистоты, радиохимической чистоты, энантиомерного избытка и значения рН. Химические и радиохимические чистоты, превышающие 95%, были достигнуты с использованием этого протокола. Две колонны используются для трассирующей очистки.

Не забудьте переключиться на колонку C18, чтобы удалить химические примеси. Мы можем быстро адаптировать этот метод к клиническому производству меченого фтором 18-меченого триптофана радиоиндикатора.