Поддержание лабораторных культур Gryllus bimaculatus, универсальной ортоптерановой модели для сельского хозяйства насекомых и физиологии беспозвоночных

Эти методы отражают практические и проверенные методы выращивания Gryllus bimaculatus, ключевого мини-вида домашнего скота, выращиваемого для корма для животных и пищи человека, и все более важного альтернативного модельного организма. Эти лабораторные методы для культуры Gryllus bimaculatus получены из методов, распространенных во всей североамериканской индустрии крикетного земледелия, и представляют собой лабораторное факсимиле операций по выращиванию крикета. Для начала нанесите чистый контейнер на весы и взвесьте массу сухой кокосовой койры размером примерно с человеческий кулак.

Затем поместите койру в герметичный, чистый контейнер, который может вместить расширение до шести раз от первоначального объема. Чистыми руками аккуратно разбейте комочки койры с куска, извлеченного из более крупного блока. Затем, используя 250-миллилитровый градуированный цилиндр, измерьте правильный объем деионизированной воды, чтобы достичь соотношения пять к одному по массе пяти частей воды к одной части сухой койры, и медленно добавьте измеренную деионизированную воду, равномерно гидратируя все частицы койры.

После этого вручную мацерируют комочки, чтобы обеспечить равномерное увлажнение, и повторно загружают контейнер, в котором ранее взвешивалась койра. Взвесьте 75 граммов смоченной койры и переложите ее в чашку Петри размером 100 на 15 миллиметров, используя чистую пластиковую ложку, чтобы убедиться, что койра равномерно распределена по дну тарелки и что нет комков. Затем пометьте боковую часть чашки Петри лабораторной лентой с маркировкой, обозначающей натальную колонию и дату события сбора яиц.

Измерьте дополнительные 45 миллилитров деионизированной воды в градуированный цилиндр и равномерно добавьте воду на поверхность упакованной койры в чашку Петри, чтобы обеспечить равномерное увлажнение. После того, как чашка Петри будет упакована, запечатайте оставшуюся смачиваемую койру в герметичный сосуд для хранения при температуре минус 20 градусов по Цельсию. Поместите гидратированный субстрат яйцекладки в клетки, содержащие желаемые родительские запасы сверчков как можно дальше от корма, и задокументируйте дату и время.

Затем поместите небольшой автоклавируемый контейнер для мусора на рабочую поверхность. Затем поместите чистую, пустую пластиковую клетку объемом 29,3 литра на скамейку рядом с контейнером для мусора. Поместите еще одну клетку объемом 29,3 литра, содержащую родительский сверчок и субстрат яйцекладки, на противоположную сторону сосуда для мусора от пустой клетки.

Через 24 часа извлеките субстрат яйцекладки из родительской клетки для крикета и расположите его над автоклавируемым сосудом для отходов. Осмотрите верхнюю часть яйцекладущего субстрата на наличие любых частиц фрасса или корма, которые сверчки, возможно, ударили по поверхности койры. Затем удалите койровые загрязнения в сосуд для отходов с помощью чистой ложки Scoopula или пластиковой ложки и поместите пластиковую ложку в контейнер для отходов.

Затем поместите очищенный субстрат яйцекладки в чистую 29,3-литровую клетку. После этого поместите клетку в инкубатор, установленный на 27 градусов по Цельсию при относительной влажности 60% на 12-часовом темном 12-часовом светлом фотопериоде. Верните клетку, содержащую племенное поголовье, в исходное место и очистите все предметы от рабочей поверхности.

Затем поместите емкость для отходов в морозильную камеру, предназначенную для хранения предметов, потенциально загрязненных яйцами сверчка. Далее продезинфицируйте рабочую поверхность 10%-ным раствором отбеливателя, и оставьте на 60 секунд. Протрите рабочую поверхность насухо чистым бумажным полотенцем.

После открытия морозильной камеры утилизируйте бумажное полотенце в емкость для отходов. Выберите две неиспользуемые коммерческие картонные коробки размером 30,8 на 30,8 сантиметра. А с помощью ножа или прочных ножниц разрежьте их на шесть отдельных полосок шириной 10,1 сантиметра одинакового размера.

Затем смахните срезанные края руками, чтобы удалить свисающие частицы картона. Затем поместите шесть отдельных кусков картона размером 10,1 сантиметра на 30,8 сантиметра вертикально в нижнюю часть клетки, причем более длинная ось коробки охватывает более узкую горизонтальную ось 29,3-литровой клетки. Поместите седьмой кусок картонной коробки поперек верхней части шести вертикальных частей.

После выбора трех кусочков грубого, коричневого бумажного полотенца примерно 25 сантиметров на 25 сантиметров сложите каждый пополам. Затем поместите два так, чтобы они покрывали верхнюю часть проксимальной стороны структуры картона, и поместите один над картонной стопкой на дистальной стороне. На 11-й день после яйцекладки переместите субстрат яйцекладки в проксимальный правый угол клетки.

Когда наблюдается люк, запылите бумажные полотенца, помещенные поверх картонных коробок, до тех пор, пока они не смачиваются, но не активно проливают воду. Затем тщательно протрите обе стороны 100-миллиметровой крышки Петри 70% этанолом и дайте ей высохнуть. Затем зачерпните 50 граммов корма в 60-ваттный блендер на одну порцию и измельчите при 10 000 об/мин в течение одной минуты.

Отмерив один грамм корма, встряхните его на крышку чашки Петри в клетке. Используя чистый конец ложки или совок, распределите корм как можно более равномерно по дну блюда. После заменяйте корм каждые два дня.

Выбросьте старый корм в автоклавируемый контейнер для отходов. Следите за ростом плесени на корме. А если корм начинает казаться белым или зеленоватым, откажитесь от чашки Петри и сразу же покормите.

Через 14 дней после яйцекладки используйте 2,54-сантиметровую кисть, чтобы удалить сверчков, цепляющихся за субстрат натальной койры, смахнув всех сверчков с поверхности койры и боков чашки Петри в клетку. Затем поместите удаленный субстрат яйцекладки в автоклавируемый сосуд для отходов и храните его в морозильной камере до автоклавирования. Затем замените натальный субстрат свежей кокосовой посудой для гидратации.

Используя деионизированную бутылку для мытья воды, добавляйте воду до тех пор, пока поверхность койры не станет блестящей, но не будет объединена. Сверчки были зарыблены из популяции со средней массой 21 миллиграмм. В конце эксперимента средняя масса всех комбинированных ювенильных и взрослых сверчков составляла 0,724 грамма.

В возрасте 65 дней, когда эксперимент закончился, присутствовало 30 взрослых мужчин, а средняя масса составляла 0,721 грамма, тогда как для 58 взрослых женщин средняя масса составляла 0,841 грамма. Выживаемость между зарыблением и сбором урожая составляла 89% и измерялась еженедельно по общему количеству всех отдельных сверчков во всех клетках. На 65-й день примерно 68% всех сверчков достигли взрослой звезды.

Избегайте образования капель воды на дне корпуса при поливе или запотевании. Размещение бумажного полотенца над рефугией обеспечивает градиент влажности и поглощает капли воды от запотевания. Эта процедура служит шаблоном для исследователей во многих областях наук о жизни, чтобы вырастить Gryllus bimaculatus в качестве модельного организма.

На сегодняшний день было опубликовано несколько официальных протоколов выращивания Gryllus bimaculatus или любого другого паурометаболического модельного организма. Кодификация и стандартизация методов выращивания насекомых, используемых в сельском хозяйстве насекомых, позволит лучше сравнивать результаты между исследовательскими группами.