Репортерский анализ для анализа созревания интронной микроРНК в клетках млекопитающих

Наш протокол рассматривает влияние регуляторных РНК-связывающих белков на биогенез и созревание микроРНК непосредственно из клеточных культур. Метод, который мы описываем, может быть выполнен с помощью обычных реагентов клеточной культуры и является относительно быстрым. Этот метод может быть важен для изучения фенотипических эффектов микроРНК и их мишеней в различных типах эукариотических клеток.

Могут быть использованы нормальные или похожие на болезнь клетки. Важно выбрать клеточные линии, поддающиеся трансфекции, выполнить адекватный трансфекционный и индукционный контроль, чтобы наблюдать изменения в целевом сродстве через активность люциферазы. Для начала поддерживайте клетки в DMEM, добавляйте высокий уровень глюкозы в 100-миллиметровые чашки Петри и инкубируйте клетки при 37 градусах Цельсия в увлажненном инкубаторе с контролируемой атмосферой с 5% углекислым газом.