Сочетание отражательной конфокальной микроскопии с оптической когерентной томографией для неинвазивной диагностики рака кожи с помощью получения изображений

В этом протоколе подробно описаны этапы получения изображений для устройств RCM и RCM-OCT у постели больного. Крайне важно получать изображения хорошего качества для правильной диагностики и лечения поражений кожи. Эти устройства визуализируют кожу с гистопатологическим разрешением in vivo, экономя ненужные доброкачественные биопсии и выявляя ранний рак кожи.

Диагноз ставится у постели больного, что сокращает время ожидания и беспокойство пациентов. Визуализация с помощью этого микроскопа помогает нам неинвазивно направлять обнаружение и диагностику поражений кожи и рака кожи у пациентов у постели больного. Кроме того, визуализация помогает нам сортировать поражения кожи на те, которые могут быть поверхностными, и те, которые могут быть более глубокими, что помогает направлять лечение.

Таким образом, визуализация помогает нам интегрировать или объединить диагностику и лечение в одном посещении пациента, что сейчас называется парадигмой ухода за пациентами по принципу «одного окна». Помимо использования визуализации для обнаружения и диагностики поражений кожи и рака кожи, мы также используем визуализацию для выявления и диагностики поражений полости рта и рака полости рта у пациентов. Продемонстрирует процедуру г-жа Укален Харрис, гистотехник из моей лаборатории.

Для начала выберите устройство WP-RCM для поражений, расположенных на плоских поверхностях кожи, таких как туловище и конечности, и устройство HH-RCM для поражений на изогнутых поверхностях, таких как нос, мочки ушей, веки и гениталии. Для визуализации расположите пациента на полностью откидывающемся кресле или на плоском смотровом столе с опорой. Затем очистите очаг поражения и окружающую кожу спиртовой салфеткой.

Добавьте каплю минерального масла в центр пластикового окна и аккуратно распределите ее по ширине окна. Снимите мягкую обложку с клейкой стороны окна, аккуратно растяните кожу и прикрепите окно. Чтобы получить изображения с помощью устройства WP-RCM, расположите зонд перпендикулярно поражению.

Затем получите дерматоскопические изображения, наведя датчик WP-RCM на пластиковую крышку окна, и оцените наилучший угол введения датчика. Совместите маленькую белую стрелку, расположенную сбоку зонда, со стрелкой сбоку дерматоскопической камеры. Вставьте дерматоскопическую камеру в пластиковый колпак окна.

Убедитесь, что изображение дерматоскопа покрывает всю поверхность поражения, и нажмите спусковой крючок на камере, чтобы получить изображение. Затем извлеките дерматоскоп. Затем поместите количество ультразвукового геля размером с горошину внутрь одноразового пластикового оконного колпачка.

Вставьте щуп RCM в пластиковый одноразовый колпачок до тех пор, пока не раздастся резкий щелчок. Используя изображение дерматоскопии, полученное на предыдущем этапе, выберите центр поражения и определите самый верхний или самый яркий слой кожи, который является безъядерным слоем рогового слоя. Установите глубину изображения равной нулю на этом уровне.

Нажмите значок стека, чтобы получить стек в центре поражения. В раскрывающемся меню выберите анатомический участок, лицо или тело. Установите шаг 4,5 микрона и глубину 250 микрон.

Определите дермально-эпидермальное соединение или слой DEJ в стеке и выберите квадрат 8x8 миллиметров, чтобы покрыть все поражение. Затем нажмите значок мозаики, чтобы получить первую мозаику в DEJ. Чтобы получить последующие мозаики, нажмите на структуру мозаики DEJ, чтобы просмотреть ее в режиме реального времени.

Прокрутите вниз от DEJ, чтобы получить мозаику на дерме, а затем вверх от DEJ, чтобы взять мозаику в эпидермисе. Захватите по одному стеку в каждом квадранте и по одному в центре поражения с однородным рисунком при дерматоскопии или приобретите дополнительные стеки для гетерогенных поражений. После завершения сеанса съемки отсоедините защитный конус, окружающий линзу микроскопа.

Очистите наконечник линзы объектива спиртовым тампоном и высушите линзу. Снова прикрепите пластиковый конус к зонду микроскопа. Чтобы создать отчет о конфокальной диагностической оценке, нажмите «Новая оценка».

Введите диагноз из предварительно выбранных вариантов в выпадающем меню. Выберите функции, отображаемые во время создания образа, из контрольного списка отчета и выберите подходящее управление. Нажмите «Готово» и подпишите.

Сгенерируйте отчет в формате PDF и распечатайте его. чтобы получить изображения с помощью устройства HH-RCM, сначала расположите пациента, очистите место поражения и обведите поражение бумажным кольцом. Нанесите количество ультразвукового геля размером с горошину на линзу объектива HH-RCM и накройте ее пластиковым колпачком.

Добавьте щедрую каплю минерального масла в сторону пластикового колпачка, который будет касаться кожи. Прижмите зонд к стороне поражения на коже с сильным давлением. Используйте элементы управления Z-глубиной на устройстве HH-RCM, чтобы перемещаться вверх и вниз на разной глубине в пределах поражения.

Получение нескольких однокадровых изображений и стеков в интересующих областях. При больших поражениях снимайте непрерывное видео на разных слоях, перемещая зонд HH-RCM по всей поверхности поражения и нажимая на символ захвата видео. Записывайте движение клеток крови внутри сосудов.

После завершения сеанса визуализации нажмите кнопку Done Imaging. Очистите очаг поражения спиртовым тампоном, извлеките ультразвуковой гель из линзы объектива зонда и снова прикрепите пластиковый колпачок. Расположите пациента для визуализации и убедитесь, что граница поражения свободна от чрезмерных волос и местных загрязнений.

После подготовки зонда, как описано в предыдущем разделе, нажмите «Настройки изображения». Выберите режим «Линейная визуализация», чтобы получить изображение RCM. Установите размер шага на пять микрон, а количество шагов на 40.

Приобретайте стеки, как показано в предыдущем разделе, нажав «Захватить». Затем нажмите кнопку «Заморозить» после завершения. Нажмите «Настройки изображения» и выберите «Растровый режим», чтобы получить корреляционное ОКТ-видео для архитектуры поражения.

Перейдите на вкладку технического специалиста. После завершения нажмите кнопку «Захватить» и сразу же нажмите кнопку «Сохранить». С помощью этого протокола были получены высококачественные изображения RCM на соответствующей глубине кожи.

Следует избегать таких артефактов, как пузырьки воздуха, поверхностный мусор и артефакты движения, которые препятствуют диагностической оценке. На RCM наблюдались различные слои кожи, такие как роговой слой, состоящий из нуклеированных кератиноцитов, и шиповатый слой, состоящий из плотно упакованных ядерных клеток с яркой цитоплазмой, создающей типичный сотовый рисунок. Затем последовал базальный слой, идентифицированный по булыжнику, образованному меланиновым колпачком базальных кератиноцитов.

А для DEJ характерен яркий кольцевой рисунок. Сосочковида дермы состояла из ярких коллагеновых волокон и кровеносных сосудов. Изображения RCM для распространенных видов рака кожи, таких как базально-клеточная карцинома, показали опухолевые узелки с расщелиной и частоколом.

Плоскоклеточный рак показал атипичный сотовый рисунок и петлицевые сосуды. А меланома показала скопления ярких, больших круглых пажевидных клеток в эпидермисе. Для базально-клеточной карциномы изображение RCM не смогло показать окончательный опухолевый узел.

В то время как изображения RCM-OCT, интертированные как стеками, так и растром, показали отчетливый серый опухолевый узел, соединенный с эпидермисом, а также расщелины и утолщенные пучки коллагена. Диагноз был подтвержден с помощью H&E Stained Biopsy. Важно получить мозаику диагностического качества из пяти слоев кожи с помощью WP-RCM Imaging.

Снимайте гладкое видео и стеки с помощью HH-RCM, а также стек и растр в одной области с помощью устройства RCM-OCT.