Методы рассечения и гистологический отбор проб сердца на крупных животных моделях сердечно-сосудистых заболеваний

Структурные различия в сердце между видами и особями, а также расхождения в литературе требуют глубокого понимания анатомии сердца и соблюдения строгой методологии. Этот метод может улучшить однородность наблюдателя и повысить сопоставимость и воспроизводимость экспериментальных исследований сердечно-сосудистых заболеваний. Человек, который не знаком с этой техникой, может испытывать трудности с идентификацией всех компонентов сердца.

Я рекомендую потратить некоторое время на знакомство с анатомией сердца. Поскольку сложную анатомию сердца трудно понять, требуется визуальное представление метода. Для начала взвесьте испытуемое животное, прежде чем положить его на стол для некропсии с левой стороны.

Затем проводят внешний осмотр предмета, осматривая и пальпируя кутис и слизистую оболочку, отмечая все изменения цвета, консистенции и объема. Далее с помощью ножа сделайте острый семисантиметровый разрез в правой подмышечной впадине. После обнаружения тазобедренного соединения откройте капсулу ножом и перережьте связку головки бедренной кости.

Удлините разрез кожи в подмышечной черепной кости до нижнечелюстного симфиза и каудально до малоберцовой кости. Удаляют кожу скальпелем, обнажая грудную и брюшную стенки от вентральной средней линии до уровня поперечных отростков позвонков. Далее, используя скальпель и щипцы, создайте лоскут через брюшную стенку, вентрокаудальный к правой реберной дуге.

Затем, следуя каудальному аспекту правого подреберья, открывают ножницами брюшную полость. Продолжайте вытягивать разрез каудально вдоль правой паралюмбальной области до наружного подвздошного гребня. После этого вытяните разрез до лобкового введения linea alba и кратко осмотрите органы брюшной полости in situ, чтобы отметить любое изменение их цвета, консистенции, объема и положения.

Далее, используя скальпель и щипцы, проколите диафрагму в самой высокой точке. Затем с помощью режущих кости щипцов удаляют правую грудную клетку, сначала разрезая парастернальный хрящевой сегмент, а затем спинной сегмент ребер проксимально к костовертебральным суставам. Осмотрите сердце in situ, чтобы отметить его размер, цвет, положение и связи с соседними тканями.

Кроме того, ищите любое изменение консистенции путем пальпации. Затем с помощью ножниц открыть полость перикарда продольным сечением от основания до верхушки сердца. Осмотрите полость перикарда и эпикард на предмет изменения цвета, консистенции и объема.

Затем, используя ножницы, освободите сердце, разрезав верхнюю полую вену по крайней мере на один сантиметр выше входа в правое предсердие, сохранив crista terminalis и получив поперечные участки аорты, легочного ствола и обеих вен. Исследуйте внешний контур органа, внешний вид эпикарда, миокарда по прозрачности эпикарда и внешний вид крупных сосудов. Для выполнения метода притока-оттока при рассечении сердца поместите сердце предсердным лицом вверх и с помощью ножниц и беззубых щипцов широко вырежьте из каудальной полой вены в правое предсердие.

После разрезания сердца к правому ушному придатку, чтобы обнажить crista terminalis или синоатриальный узел, осмотрите трикуспидальный клапан с дорсального вида. Затем, разрезав участок от правого предсердия до соединения между правым желудочком и внутрижелудочковой перегородкой, отобразите правый атриовентрикулярный клапан. Далее разрезаем стенку правого желудочка вдоль внутрижелудочковой перегородки до начала легочного ствола.

После тщательного осмотра правых атриовентрикулярных клапанов, включая хорды tendineae и сосочковые мышцы, разрезают chordae tendineae. Затем разместите щипцы вдоль легочного ствола и разрезайте ствол продольно, чтобы исследовать тракт легочного оттока, происхождение легочного ствола и полулунные клапаны. Чтобы осмотреть двустворчатый клапан с дорсального вида, отрежьте левое предсердие от легочных вен до кончика левой ушной раковины.

Затем поместите сердце с межжелудочковой перегородкой лицом вниз и сделайте большой разрез в свободной стенке желудочка от основания желудочка до сердечной вершины. Затем вырежьте chordae tendineae куспида левого атриовентрикулярного клапана. Наконец, откройте аорту, поместив щипцы через отток левого желудочка.

Используйте физиологический раствор, чтобы удалить все сгустки крови и взвесить сердце. Для взятия образцов для гистологии, во-первых, сделайте два продольных параллельных разреза, примерно на расстоянии пяти миллиметров друг от друга, со скальпелем, включающим правое предсердие, трикуспидальный клапан и свободную стенку правого желудочка. Затем сделайте два аналогичных параллельных разреза с участием левого предсердия, митрального клапана, дорсальной сосочковой мышцы и левого желудочка.

В дорсальной верхней трети сердца поперечное сечение основания сердца по линии, включая межжелудочковую перегородку, правое предсердие, аорту, аортальный клапан и трехстворчатый клапан. И сделать два параллельных продольных разреза с участием основания аорты и межжелудочковой перегородки. Затем обрежьте правое предсердие вокруг crista terminalis.

Чтобы получить шесть кусков синоатриального узла, сделайте несколько параллельных секций на расстоянии от трех до четырех миллиметров друг от друга, ориентированных поперечно по продольной оси кристы. Далее обрезают полученные ткани в гистологические кассеты и погружают ткани в 10%-ной нейтральный буферизованный формалин в течение не менее 48 часов. Чтобы взять образцы коронарных артерий, используйте щипцы и скальпель, чтобы рассечь коронарные артерии от паракональной бороздки и зафиксировать их в 10% нейтральном буферизованном формалине на ночь.

При необходимости декальцинируйте ткань в смесь один к одному из 8% муравьиной кислоты и соляной кислоты. Далее сделайте несколько поперечных разрезов на расстоянии около трех миллиметров друг от друга. Поместите секции в гистологическую кассету и поместите кассету в 10% нейтральный буферизованный формалин для встраивания.

После фиксации сердца в 10% нейтральном буферизованном формалине в течение не менее 48 часов поместите два беззубых прямых рассеченных щипца. Один через полую часть черепа, правое предсердие, трехстворчатый клапан и правый желудочек. А другой через легочную вену, левое предсердие, митральный клапан и левый желудочек.

Используя пространство между щипцами в качестве ориентира, используйте режущее лезвие, чтобы разрезать от основания до вершины сердца. Примерно на расстоянии пяти миллиметров друг от друга разрезают еще один продольный участок сердечного сегмента, который включает аорту. Затем полностью отделить сердечную базу от вершины.

После помещения каждого сегмента ткани в гистологическую кассету поместите кассеты в 10% нейтральный буферизованный формалин до встраивания. Этот протокол позволил успешно визуализировать внешние особенности и внутренние структуры сердца. Используя эту технику, образцы сердечной ткани могут быть успешно собраны для гистологических исследований у разных животных, таких как собаки и кошки.

Всегда будьте осторожны при освобождении сердца, потому что это может повредить некоторые структуры, представляющие интерес. А также, во время рассечения, сбора и встраивания синоатриального узла. Хотя этот метод был создан для диагностики моделирования аритмии, гипертрофической кардиомиопатии, инфаркта миокарда и сердечной интоксикации, его можно использовать для диагностики любого сердечного заболевания.