Name: Интравитреальные инъекции в ячий глаз (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 37 s
Description: Узнайте протокол интравитреальных инъекций в глаз овцы для доставки генной терапии сетчатки. Этот метод позволяет исследователям изучать лечение дегенерации сетчатки менее инвазивным способом.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Стива Хипа (BVSc, CertVOphthal) за его помощь в установлении этого протокола и выполнении инъекций, описанных Murray et al.15. Авторы также признают финансирование со стороны CureKids New Zealand, Кентерберийского фонда медицинских исследований, Neurogene Inc и Ассоциации поддержки и исследований болезни Баттена.

<ol><li>Himawan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+retinal+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to retinal photoreceptors.</a> Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+therapies+for+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%3A+More+than+meets+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye.</a> Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Grzybowski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((update+on+intravitreal+injections%3A+Euretina+expert+consensus+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations.</a> Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).</li>
<li>Pavlou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+AAV+capsids+for+intravitreal+gene+therapy+of+photoreceptor+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392(2021).</li>
<li>Kousi, M., Lehesjoki, A. -E., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+mutation+spectrum+and+clinical+correlations+of+over+360+mutations+in+eight+genes+that+underlie+the+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Mutation%22%5BJournal%5D)">Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).</li>
<li>Wibbeler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerliponase+alfa+for+the+treatment+of+atypical+phenotypes+of+CLN2+disease%3A+A+retrospective+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series.</a> Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+intraventricular+cerliponase+alfa+for+CLN2+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).</li>
<li>Mitchell, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+monitoring+of+the+CNS+demonstrates+the+efficacy+of+gene+therapy+in+a+sheep+model+of+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease.</a> Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+retinal+degeneration+in+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Scientific Reports. 12 (1), 3670(2022).</li>
<li>Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinography+data+from+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Data+in+Brief%22%5BJournal%5D)">Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Data in Brief. 37, 107188(2021).</li>
<li>Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+determination+and+allometric+prediction+of+vitreous+volume%2C+and+retina+and+lens+weights+in+G%C3%B6ttingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in Göttingen minipigs.</a> Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).</li>
<li>Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topography+of+ganglion+cells+and+photoreceptors+in+the+sheep+retina%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).</li>
<li>Frugier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+large+animal+model+of+CLN5+neuronal+ceroid+lipofuscinosis+in+Borderdale+sheep+is+caused+by+a+nucleotide+substitution+at+a+consensus+splice+site+%28c.571%2B1G%3EA%29+leading+to+excision+of+exon+3%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G>A) leading to excision of exon 3.</a> Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).</li>
<li>Murray, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+gene+therapy+protects+against+retinal+dysfunction+and+degeneration+in+sheep+with+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease.</a> Experimental Eye Research. 207, 108600(2021).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+retinal+transduction+by+AAV2-7m8+following+intravitreal+injection+in+a+sheep+model+of+CNGA3+achromatopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia.</a> Gene Therapy. , (2021).</li>
<li>Boyd, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor-targeted+gene+delivery+using+intravitreally+administered+AAV+vectors+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs.</a> Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).</li>
<li>Dalkara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo-directed+evolution+of+a+new+adeno-associated+virus+for+therapeutic+outer+retinal+gene+delivery+from+the+vitreous%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous.</a> Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).</li>
<li>Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+visual+performance+with+intravitreal+administration+of+9-cis-retinal+in+Rpe65-mutant+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs.</a> Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+photoreceptor+transduction+efficacy+of+capsid-modified+adeno-associated+viral+vectors+following+intravitreal+and+subretinal+delivery+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).</li>
<li>Kotterman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+neutralization+poses+a+barrier+to+intravitreal+adeno-associated+viral+vector+gene+delivery+to+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates.</a> Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).</li>
<li>Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immune+responses+to+AAV+gene+therapy+in+the+ocular+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment.</a> Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).</li>
<li>Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -Y., Kim, S. -W., Huh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subconjunctival+hemorrhage+after+intravitreal+injection+of+anti-vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).</li>
<li>Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+needle+forces+and+acute+pressure+changes+during+intravitreal+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections.</a> Clinical & Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).</li>
<li>Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+pressure+and+injection+forces+during+intravitreal+injection+into+enucleated+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).</li>
<li>Ross, M., Ofri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+retinal+gene+therapy%3A+Evolving+from+subretinal+to+intravitreal+vector+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery.</a> Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).</li>
<li>Henein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics+of+intravitreal+injections+into+liquid+vitreous+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes.</a> Pharmaceutics. 11 (8), 371(2019).</li>
<li>Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+intraocular+pressure+variation+during+automatic+intravitreal+injections%3A+An+ex-vivo+experimental+study+using+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes.</a> PloS One. 16 (8), 0256344(2021).</li>
<li>Willekens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreally+injected+fluid+dispersion%3A+Importance+of+injection+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).</li>
<li>Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+ex+vivo+models+to+study+drug+delivery+barriers+in+the+posterior+segment+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).</li>
<li>Kiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector+Considerations+for+Ocular+Gene+Therapy.+Adeno-associated+virus+vectors+offer+a+safe+and+effective+tool+for+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Retinal+Physician%22%5BJournal%5D)">Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery.</a> Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+targeting+the+inner+retina+rescues+the+retinal+phenotype+in+a+mouse+model+of+CLN3+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+brain-directed+gene+therapy+rescues+a+mouse+model+of+neurodegenerative+CLN6+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease.</a> Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).</li>
</ol>

У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.

Интравитреальные инъекции являются одной из наиболее распространенных хирургических процедур в офтальмологии человека и доказали свою эффективность в доставке AAV-опосредованной генной терапии к сетчатке овец. Ранее мы продемонстрировали эффективность AAV9. Генная терапия CLN5 проводилась интравитреально при ослаблении дисфункции и дегенерации сетчатки у овец с помощью CLN5 NCL15. Есть надежда, что перевод этого пути введения пациентам с НКЛ также окажется полезным.
Про...

Несколько методов могут быть использованы для доставки терапевтических агентов к сетчатке, включая интравитреальное (IVT), субретинальное, супрахороидальное, периокулярное или местное введение. Каждый путь введения включает преодоление барьеров, таких как барьер крови-сетчатки или внутренняя и внешняя ограничивающие мембраны, и имеет различные показатели эффективности в зависимости от доставляемого препарата и конкретной мишенисетчатки 1,2.
Доставка препарата IVT включает инъекцию в стекловидное тело глаза, студенистое вещество, которое занимает заднюю камеру глаза. Основная функция стекловидного тела заключается в поддержании формы глазного шара и удержании глазных тканей, таких как хрусталик и сетчатка, на месте. Стекловидное тело состоит в основном из воды, с небольшим количеством коллагена, гиалуроновой кислоты и других неколлагеновых белков3. Инъекция IVT является простой и распространенной процедурой, обычно используемой для лечения широкого спектра глазных состояний, включая возрастную макулярную дегенерацию, диабетический макулярный отек, диабетическую ретинопатию, окклюзию вен сетчатки и несколько наследственных дистрофий сетчатки 4,5.
Нейрональные цероидные липофусцинозы (NCL; Болезнь Баттена) представляют собой группу смертельных лизосомальных заболеваний хранения, которые вызывают тяжелую дегенерацию мозга и сетчатки. В настоящее время известно 13 вариантов NCL, возникающих в результате мутаций в различных генах (CLN1-8, CLN10-14), которые преимущественно поражают детей, но имеют различный возраст начала и тяжесть заболевания6. НКЛ имеют общие прогрессирующие симптомы, включая когнитивное и двигательное снижение, судороги и потерю зрения. Не существует лекарства от NCL; тем не менее, ферментозаместительная терапия, направленная на мозг, в настоящее время находится в клинических испытаниях для болезни CLN2 7,8, а генная терапия, опосредованная AAV, показала большие перспективы в доклинических исследованиях, а клиническое испытание генной терапии CLN5, как ожидается, начнется в 2022 году 9,10.
Многие другие виды развивают естественные формы NCL, включая кошек, собак, овец и коров. Две модели NCL овец в настоящее время активно изучаются в Новой Зеландии: модель болезни CLN5 у овец Бордердейла и модель болезни CLN6 у овец Южного Гемпшира. Пораженные овцы проявляют многие клинические и патологические особенности заболевания человека, включая атрофию сетчатки и потерю зрения10,11. Хотя генная терапия CLN5, направленная на мозг, у овец с болезнью CLN5 может предотвратить или остановить атрофию мозга и клиническое снижение, обработанные овцы все еще теряют зрение9. Это подчеркнуло необходимость лечения сетчатки для сохранения зрения и поддержания лучшего качества жизни, что привело к созданию протокола для глазной генной терапии у овец.
Овечий глаз представляет собой хорошую модель человеческого глаза из-за его сходства в размерах глазного шара, объеме стекловидного тела иструктуре сетчатки 10,12,13. В этой статье подробно описывается хирургический протокол доставки IVT небольшого объема (≤100 мкл) терапевтического вирусного вектора в овечий глаз.

<table><tbody><tr><td>1 мл Безопасный шприц с низким мертвым пространством и постоянно прикрепленной 0,5-дюймовой иглой</td><td>Fisher Scientific, Окленд, Новая Зеландия</td><td>05-561-28</td><td>Covidien Monoject Tuberculin Safety шприц или аналогичный</td></tr><tr><td>1,5 мл микроцентрифужная пробирка</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS4323</td><td>Автоклав пробирки для стерилизации перед использованием</td></tr><tr><td>Анестезиологический аппарат с газовой скамьей и монитором&nbsp;</td><td>Hyvet Anesthesia, Крайстчерч, Новая Зеландия</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Антибиотик глазные капли&nbsp;</td><td>Teva Pharma Ltd, Окленд, Новая Зеландия</td><td></td><td>Коммерческое название: Chlorafast (0,5% хлорамфеникол)</td></tr><tr><td>BrightMount plus антивыцветающая монтажная среда</td><td>Abcam, Кембридж, Великобритания</td><td>ab103748</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&prime; ,6-диамидино-2-фенилиндола дигидрохлорид)</td><td>Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>Диазепам седативное средство</td><td>Ilium, Troy Laboratories Pty Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td></td><td>5 мг/мл</td></tr><tr><td>Эндотрахеальные трубки</td><td>Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, United</td><td></td><td>Kingdom Standard, с манжетой. Размеры 7, 7,5 или 8 в зависимости от размера овцы</td></tr><tr><td>Глазное зеркало</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>KP151/14</td><td>Nopa Barraquer-Colibri (10 мм)</td></tr><tr><td>Фенестрированная хирургическая простыня</td><td>Amtech Medical Ltd, Уонгануи, Новая Зеландия</td><td>DI583</td><td>Или аналогичная&nbsp;</td></tr><tr><td>Фильтрующие наконечники</td><td>Interlab, Окленд, Новая Зеландия</td><td></td><td>10, 200 и 1,000 &микро; Л&nbsp;</td></tr><tr><td>Раствор формальдегида (37%)</td><td>Fisher Scientific, Окленд, Новая Зеландия</td><td>AJA809-2.5PL</td><td>Составляйте до 10% в дистиллированной воде с 0.9%</td></tr><tr><td>NaCl Goat anti-rabbit Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen Carlsbad, CA, США</td><td>&nbsp; A-11012</td><td>Применение в разведении 1:500</td></tr><tr><td>Изофлурана анестетик</td><td>Attane, Bayer Animal Health, Окленд, Новая Зеландия</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Кетамин HCl анестетик/анальгетик</td><td>PhoenixPharm Distributors Ltd, Окленд, Новая Зеландия</td><td></td><td>100 мг/мл</td></tr><tr><td>Ларингоскоп (ветеринарный)</td><td>KaWe Medical, Дания</td><td></td><td>Miller C лезвие, размер 2</td></tr><tr><td>иглы&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>302025</td><td>BD Иглы для подкожных инъекций, или аналогичные</td></tr><tr><td>нестероидные противовоспалительные</td><td>Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Окленд, Новая Зеландия</td><td>49402/008</td><td>Коммерческое название: Metacam 20 (20 мг/мл мелоксикам)</td></tr><tr><td>Беззубчатые щипцы</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>AB864/16</td><td>Или аналогичные&nbsp;</td></tr><tr><td>Беззубчатый гемостат</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>AA150/12</td><td>Или аналогичный&nbsp;</td></tr><tr><td>Нормальная козья сыворотка</td><td>Thermo Fisher Scientific, Крайстчерч, Новая Зеландия</td><td>16210072</td><td></td></tr><tr><td>кислород (медицинский)</td> <td>BOC Gas, Крайстчерч, Новая Зеландия</td><td></td><td>D2 баллон, код газа 180</td></tr><tr><td>Фосфат буферизированный солевой раствор&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Крайстчерч, Новая Зеландия</td><td>10010023</td><td>Стерильный, фильтрованный</td></tr><tr><td>раствор повидона-йода</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>005835</td><td>Коммерческое название: Бетадин (10% повидон-йод)</td></tr><tr><td>Кролик против коровьего глиального фибриллярного кислого белка (GFAP)</td><td>Dako, Glostrup, Дания</td><td>Z0334</td><td>Использование в разведении 1:2,500</td></tr><tr><td>Самокомплементарный аденоассоциированный вирус серотипа 9, содержащий промотор бета-действия курицы (CBh) и оптимизированный для кодонов овец CLN5</td><td>Университет Северной Каролины Вектор Кор, Северная Каролина, США.</td><td>scAAV9/CBh-oCLN5opt</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride 0,9% раствор для внутривенного введения</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>AHB1322</td><td>Коммерческое название: Солевой раствор&nbsp;</td></tr><tr><td>Подкожные антибиотики</td><td>Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Веллингтон, Новая Зеландия</td><td></td><td>Коммерческое название: Duplocillin LA (150 000 МЕ/мл прокаинового пенициллина и 115 000 МЕ/мл бензатин пенициллина)</td></tr> <tr><td>Хирургические острые тупые изогнутые ножницы&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, Тауранга, Новая Зеландия</td><td>SSSHBLC130</td><td></td></tr><tr><td>Terumo Syringe Luer Lock</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, Новая Зеландия</td><td>SH159/SH160</td><td>Стерильные шприцы; 10 мл для приготовления индукционных препаратов, 20 мл для приготовления физиологического раствора</td></tr><tr><td>Virkon Disinfectant Powder</td><td>EBOS Group Ltd, Крайстчерч, Новая Зеландия</td><td>28461115</td><td></td></tr></tbody></table>

Интравитреальные инъекции в ячий глаз

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

Существует несколько методов доставки терапевтических средств к сетчатке, включая интравитреальное (IVT), субретинальное, супрахориоидальное, периокулярное или местное введение. Доставка препарата IVT включает инъекцию в стекловидное тело глаза, желатиновое вещество, которое заполняет заднюю камеру глаза и поддерживает форму глазного шара. Хотя путь IVT менее специфичен, чем субретинальная доставка, он гораздо менее инвазивный и широко используется в клинических условиях для ряда глазных заболеваний. 
Ранее мы продемонстрировали эффективность интравитреальной доставки продукта генной терапии, опосредованного аденоассоциированным вирусом (AAV) (AAV9. CLN5) у овец с естественной формой CLN5 нейронального цероидного липофусциноза (NCL). Пораженные овцы получали генную терапию IVT в одном глазу, а другой необработанный глаз служил внутренним контролем. Структура и функция сетчатки сохранялись в обработанном глазу в течение 15 месяцев после лечения, в то время как необработанный глаз демонстрировал прогрессирующее снижение функции и тяжелую атрофию во время патологоанатомического исследования. Основываясь на исследованиях на овцах, продукт генной терапии CLN5 был одобрен в качестве кандидата в исследуемые новые препараты (IND) Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США в сентябре 2021 года. В этой статье подробно описывается хирургический протокол доставки IVT терапевтического вирусного вектора в овечий глаз.

Эффективность доставки IVT вектора генной терапии CLN5 в ослаблении дисфункции и дегенерации сетчатки у овец с CLN5 NCL ранее была продемонстрирована этой исследовательской группой15. Пораженные овцы получали одну инъекцию 100 мкл IVT CLN5, упакованную в вектор AAV серотипа 9 (AAV9) (AAV9). CLN5) в один глаз, при этом контралатеральный глаз служит необработанным внутренним контролем. Зрение оценивали ежемесячно с возраста при инъекции (3 месяца) до терминальной стадии заболевания (18 месяцев). Пос...

Интравитреальные инъекции проводились в овечий глаз с целью доставки вирусно-опосредованной генной терапии к сетчатке.

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

Интравитреальные инъекции могут быть использованы для доставки терапевтических агентов к сетчатке. Здесь представлен протокол интравитреальных инъекций в овечий глаз, как модель человеческого глаза. Интравитреальные инъекции гораздо менее инвазивны, чем другие глазные инъекции.Интравитреальные инъекции могут быть успешно использованы для доставки продукта генной терапии и лечения дегенерации сетчатки у овец естественными нейрональными цероидными липофусцинозами. После того, как овца будет обезболена, начните асептически дезинфицировать глаз, чтобы ввести его, орошая его от 1 до 5% раствора повидона йода с использованием 20-миллилитрового шприца. Затем поместите стерильную, фенестрированную хирургическую драпировку над глазом.Приложите зеркало глаза к векам, чтобы держать глаз открытым. Захватите бульбарную конъюнктиву на спинном боковом аспекте глаза щипцами и вращайте глазной шар вентромедиально. Вставьте иглу примерно семимиллиметровую кзади склеры на боковом аспекте глаза и под углом кзади, чтобы избежать хрусталика.Вводят однократную инъекцию по 100 микролитров в виде болюса, как можно ближе к сетчатке, не нарушая поверхность сетчатки. Промыть глаз примерно 10-15 миллилитрами от 1 до 5% раствора повидона йода, а затем 10 миллилитрами физиологического раствора перед удалением зеркала и драпировки. Электроретинографический анализ продемонстрировал сохранение функции сетчатки в обработанном глазу, в то время как необработанный глаз снижался аналогично животным, пораженным CLN5.Гистология сетчатки была почти нормализована в обработанном глазу с общей толщиной сетчатки, сопоставимой со здоровыми контрольными животными в центральной сетчатке. Напротив, толщина необработанной сетчатки была сопоставима с животными, пораженными CLN5. Экспрессия глиального фибриллярного кислого белка, или GFAP, маркера стресса сетчатки и астроглии, была ниже в обработанных глазах, чем в необработанных глазах, что указывает на то, что воспаление, связанное с заболеванием, ослаблялось после лечения.С созданием протокола интравитреальных инъекций в овечий глаз овцы теперь могут использоваться для проверки безопасности и эффективности многих интравитреально доставляемых терапевтических средств.

Research

JoVE Journal

Medicine

Медицина

Intravitreous инъекции широко используемый метод в исследовании визуального наук для глазных болезней или в виде прямого применения местного лечения. Это видео показали протокол для intravitreous инъекций применяют 1 мл шприца со стеклянной пипетки. Полезные советы об уходе от массивного кровотечения и повреждения линзы заданы.

Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Источник: Park, S. W., et al. Лимбальный подход - субретинальная инъекция вирусных векторов для генной терапии пигментного эпителия сетчатки мышей. J. Vis. Exp. (2015)В видеоролике описан метод субретинального введения вирусных векторов в пигментный эпителий сетчатки (РПЭ) на мышиной модели. В нем подробно описана процедура от анестезии и подготовки глаза до точной доставки лентивирусного вектора, обеспечивающего интеграцию и экспрессию генов в РПЭ.

Субретинальное введение вирусных векторов в пигментный эпителий сетчатки на мышиной модели

Кролики широко используются для изучения фармакокинетики внутриглазных препаратов. Описан метод проведения фармакокинетических исследований внутриглазных препаратов с использованием глаз кролика.

Использование глаз кролика в фармакокинетических исследованиях внутриглазного наркотиков

Здесь мы продемонстрировать новаторский подход к использованию высокого разрешения спектральной области оптическая когерентная томография (HR-SD-Окт) для содействия доставке генной терапии агентов в пространство субретинальное, оценить его ареал освещение и характеризуют фоторецепторных жизнеспособность.

Сверхвысоких резолюции мышь оптическая когерентная томография помощи внутриглазных инъекций в исследованиях сетчатки генной терапии

Клетки сетчатки пигментного эпителия могут служить клетки заместительная терапия для передовые формы сухие возраста макулярной дегенерации. Этот протокол описывает генерации большой eyed модель географической атрофии и субретинальное трансплантация человеческих эмбриональных стволовых клеток пигмента сетчатки эпителиальных клеток в этой модели болезни.

Субретинальное трансплантации эмбриональных стволовых клеток человека производные сетчатки пигментного эпителиальных клеток в большой eyed модель географической атрофии

Здесь описан метод интравитреальной инъекции и последующей бактериальной количественной оценки в мышиной модели бактериального эндофтальмита. Этот протокол может быть расширен для измерения иммунных реакций хозяина и бактериальной и экспрессии генов-хозяина.

Интравитреальная инъекция и количественная оценка параметров инфекции в мышиной модели бактериального эндофтальмита

В этой рукописи субконъюнктивальная инъекция демонстрируется как действительный векторный метод доставки для глазных тканей у мышей с использованием системы инъекций, состоящей из инфузионно-выводного шприцевого насоса и газонепроницаемого съемного шприца в сочетании с микроинъекционными иглами. Эта система инъекций также адаптируется для других внутриглазных путей введения.

Субконъюнктивальное введение аденоассоциированных вирусных векторов в моделях мелких животных

Этот протокол описывает технику внутрикамерной инъекции крысам с использованием центрального разреза роговицы и длинного туннеля в переднюю камеру. Этот метод инъекции сводит к минимуму риск непреднамеренного повреждения тканей и тем самым повышает точность и воспроизводимость.

Внутрикамерная инъекция крысам с низким риском побочных эффектов

Этот протокол описывает уникальную технику с использованием трансконъюнктивального доступа к зрительному нерву крысы для инъекций.

Трансконъюнктивальный доступ для инъекции в зрительный нерв крысы

В этом исследовании представлена методология доставки терапевтических препаратов в сетчатку и зрительные нервы взрослой крысы. Кроме того, представлен уникальный метод забора тканей для нисходящего сбора зрительного нерва и сетчатки у взрослой крысы.

Глазная терапевтическая доставка и расширенное извлечение тканей у взрослых крыс

Узнайте протокол интравитреальных инъекций в глаз овцы для доставки генной терапии сетчатки. Этот метод позволяет исследователям изучать лечение дегенерации сетчатки менее инвазивным способом.

Интравитреальные инъекции в ячий глаз

Больше видео