Стратегия изучения IL-9-продуцирующих лимфоидных клеток в модели инфекции Nippostrongylus brasiliensis
3 марта 2023 г.
IL-9-экспрессирующие Т- и ILC2-клетки индуцируются во время инфекции N. brasiliensis , однако их характеристика в значительной степени упускается из виду в инфицированном кишечнике из-за их низкой частоты и дифференциальной кинетики. Этот протокол описывает выделение этих клеток из разных органов-мишеней и подтверждение их идентичности с помощью проточной цитометрии на разных стадиях инфекции.
Этот протокол позволяет выделить и охарактеризовать лимфоидные клетки, экспрессирующие IL-9, в нелимфоидных инфицированных тканях, включая инфицированный разрез, который недавно был технически незаметен. Этот протокол также обеспечивает альтернативу для анализа популяций клеток из периферических тканей, ранее не оцененных при инфекции из-за внутренних трудностей выделения клеток из этих анатомических участков. Этот метод позволяет изучать трудно поддающиеся изоляции популяции из инфицированного N.brasiliensis пореза и может быть применен к другим гельминтным инфекциям, расширяя наше понимание анкилостомозных инфекций у людей. Демонстрировать процедуру будет Офелия Му
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном протоколе подробно описывается процедура выделения экспрессирующих IL-9 T-клеток и ILC2 из различных органов-мишеней при инфекции N. brasiliensis. Особое внимание уделяется важности характеристики этих клеток, которые зачастую игнорировались из-за их низкой частоты встречаемости и различной кинетики.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Иммунология
- Инфекционные заболевания
- Клеточная биология
Теоретические основы
- Т-клетки и клетки ILC2, экспрессирующие IL-9, играют важную роль в иммунных ответах.
- Эти клетки индуцируются при инфекции N. brasiliensis.
- Характеристика этих клеток имеет решающее значение для понимания их функции.
- Их изучение осложняется низкой частотой встречаемости и различной кинетикой.
Цель исследования
- Выделение T-клеток и ILC2, экспрессирующих IL-9, из инфицированных тканей.
- Подтверждение идентичности этих клеток с помощью проточной цитометрии.
- Изучение динамики этих клеток на разных стадиях инфекции.
Используемые методы
- Выделение клеток из различных органов-мишеней.
- Проточная цитометрия для идентификации клеток.
- Анализ частоты и кинетики клеток в процессе инфекции.
- Сравнение популяций клеток на разных стадиях инфекции.
Основные результаты
- Успешное выделение экспрессирующих IL-9 T-клеток и ILC2.
- Характеристика этих клеток, подтвержденная методом проточной цитометрии.
- Наблюдение дифференциальной кинетики на различных стадиях инфекции.
- Представления о роли этих клеток в иммунном ответе.
Выводы
- Т-клетки и ILC2, экспрессирующие IL-9, играют важную роль при инфекции N. brasiliensis.
- Характеристика этих клеток может углубить понимание иммунных механизмов.
- Необходимы дальнейшие исследования для изучения их функциональной роли.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для промышленности
Точная характеристика лимфоидных клеток, продуцирующих IL-9, в модели инфекции Nippostrongylus brasiliensis восполняет критический пробел в деконволюции иммунных путей для исследований гельминтозов. Данный протокол обеспечивает стандартизированный и воспроизводимый количественный анализ редких популяций иммунных клеток в различных тканях, что повышает прогностическую достоверность на этапах раннего поиска и снижения механистических рисков. Этот подход оптимизирует принятие решений по портфелю препаратов за счет уточнения кинетики иммунных клеток и тканеспецифических ответов, имеющих значение для разработки методов лечения инфекционных и воспалительных заболеваний.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Позволяет исследовать иммунные пути, регулируемые IL-9, в тканях, имеющих значение для заболевания.
- Обеспечивает функциональную валидацию мишеней путем количественного определения редких субпопуляций лимфоидных клеток.
- Способствует снижению механистических рисков за счет кинетического профилирования иммунных ответов.
- Повышает прогностическую достоверность стратегий иммуномодуляции.
Скрининг и разработка анализа
- Стандартизирует выделение и детектирование клеток, экспрессирующих IL-9, для последующих анализов.
- Повышает воспроизводимость анализа за счет детального описания выхода клеток и протоколов для конкретных типов тканей.
- Подготавливает валидированные биологические системы для скрининга соединений, воздействующих на иммунные пути.
- Обеспечивает количественные показатели для сравнительной оценки иммуномодуляторов.
Трансляционные и доклинические исследования
- Обеспечивает согласованность профилирования иммунных клеток с моделями соответствующих заболеваний для обеспечения трансляционной преемственности.
- Способствует поиску биомаркеров путем картирования кинетики клеток, продуцирующих IL-9, на различных стадиях инфекции.
- Позволяет обосновать продвижение кандидатов для иммунотерапии с учетом оценки рисков.
- Предоставляет данные о механизмах для выбора и валидации доклинических моделей.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Данный протокол интегрируется в континуум от этапа открытия до доклинических исследований, обеспечивая надежное профилирование иммунных клеток в моделях инфекции, что способствует как валидации мишеней, так и трансляционным исследованиям.
- Фундаментальная биология: способствует проверке гипотез о роли сигнального пути IL-9 в защитных реакциях организма хозяина.
- Скрининг: обеспечивает воспроизводимые количественные результаты для анализов на основе иммунных клеток.
- Аналитика: предоставляет данные измерений методом проточной цитометрии для сравнения различных условий.
- Трансляционные исследования: позволяют перенести результаты фундаментальных открытий на стадию доклинической валидации в системах, релевантных для конкретных заболеваний.
- Корпоративное повторное использование: устанавливает воспроизводимый протокол анализа иммунных клеток для применения в моделях гельминтозов и родственных инфекций.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает прогностическую достоверность и снижает механистическую неопределенность в исследованиях иммунных путей.
- Операционная ценность: способствует стандартизации, воспроизводимости и масштабируемости анализов иммунных клеток.
- Стратегическая ценность: позволяет принимать обоснованные решения о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) и эффективно распределять ресурсы.
- Влияние на портфель: обеспечивает приоритезацию иммуномодулирующих мишеней и кандидатов с учетом рисков.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы в области проточной цитометрии и выделения иммунных клеток из сложных тканей.
- Необходим доступ к специализированному оборудованию для сортировки и анализа клеток.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для внедрения протокола и сопоставимости данных.
- Может потребоваться адаптация для различных типов тканей или моделей инфекции.
- Выход клеток и чувствительность детекции могут варьироваться в зависимости от органа и стадии инфекции.
Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике
Chapters in this video
0:05
Introduction
1:03
Isolation of Mediastinal Lymph Nodes, Lungs, Mesenteric Lymph Node Chains, and Small Intestine
2:37
Preparation of Single-Cell Suspensions from the Small Intestine, Lung, and Lymph Nodes
6:20
Results: Flow Cytometry Analysis and Gating Strategy for the Identification of Th9 Cells and IL-9+ ILC2 Cells
7:48
Conclusion
