Стандартизированная подготовка коронарного кольца крысы и запись в режиме реального времени динамических изменений напряжения вдоль диаметра сосуда

Этот протокол подробно знакомит с локализацией, разделением и фиксацией мышечного кольца коронарных артерий крыс. Предоставление нового метода для механизмов, исследования и лечения различных сердечно-сосудистых заболеваний. Система подходит и для стабильной регистрации динамических изменений артериального напряжения in vitro, показания в диаметре от 60 микрометров до 10 миллиметров.

Мы предлагаем новичкам сначала точно понять анатомическое расположение каждого сосуда и начать с немного более крупного сосуда, такого как грудная артерия и брыжеечная артерия. После диссоциации и удаления сердца начните с дренирования остаточной крови из всех камер сердца путем мягкого сдавливания медицинскими пластическими щипцами. Быстро поместите предварительно обработанное сердце в чашку Петри, содержащую 95% кислорода и 5% насыщенный углекислым газом физиологический раствор соли при четырех градусах Цельсия, имеющий значение рН 7,40.

Чтобы точно определить анатомическое положение коронарных артерий, скорректируйте положение изолированного сердца под световым микроскопом по принципиальной схеме. Срежьте лево- и правую желудочковую полости вдоль межжелудочковой перегородки от корня легочной артерии хирургическими ножницами и пинцетом. Чтобы отделить левую и правую коронарные артерии от ткани миокарда, рассекните правый желудочек под оптическим анатомическим микроскопом, чтобы тщательно обнажить правую ветвь коронарной артерии.

Затем определите положение левой коронарной артерии, повернув сердечную ткань на 45 градусов по часовой стрелке. После удаления окружающей липкой ткани миокарда явно различают пульсирующие левую и правую коронарные артерии. Отделите коронарные артерии посередине сразу и полностью погрузите в физиологический раствор соли при четырех градусах Цельсия.

Приобретите артериальное кольцо размером около двух миллиметров, вертикально разрезав отсоединившуюся артерию анатомическими ножницами, чтобы записать сосудистое напряжение при различных раздражителях. Подготовьте две двухсантиметровые проволоки из нержавеющей стали и предварительно замочите в растворе физиологической соли четырех градусов Цельсия, насыщенном 95% кислородом и 5% углекислым газом. Пропустите оба провода параллельно через артериальное кольцо вместе с направлением сосуда под оптическим анатомическим микроскопом и с проводами одинаковой длины, выставленными на обоих концах сосудистой полости.

Зафиксируйте артериальное кольцо стальной проволокой спереди и сзади в ванне с проволочной микрофотографией, заполненной пузырящимся физиологическим солевым раствором с 95% кислорода и 5% углекислого газа. Поверните горизонтальную винтовую ручку для соответствующего переднего и заднего расстояния так, чтобы два провода были горизонтальными, а артериальное кольцо находилось в естественном состоянии расслабления. После установки ванны DMT на термостатический аппарат откройте программное обеспечение для сбора данных, чтобы убедиться, что был записан соответствующий сигнал пути.

Задайте параметры. Достигните оптимального начального натяжения артериального кольца, применяя разумное напряжение по диаметру сосуда. В этот момент установите отображаемое значение сосудистого напряжения равным нулю.

После этого примените импульсный стимул в три милли Ньютона к артериальному кольцу, вращая спиральную ось ванны. Нажмите на ЖК-панель, чтобы установить его на ноль милли Ньютон и поддерживать в течение одного часа. После инкубации в течение одного часа в насыщенном кислородом физиологическом растворе раствора соли буфере при 37 градусах Цельсия рН 7,40, устанавливают значение напряжения равным нулю милли Ньютон снова на панели управления натяжением проводной микрофотографии.

Выполняют сократительную активность коронарного кольца с помощью метода проволочного миографа и проверяют в трех отдельных операциях, стимулируя 60 миллимолярами раствора ионов калия в течение 10 минут каждая. После каждой стимуляции промывайте ванну насыщенным кислородом физиологическим солевым раствором до тех пор, пока тонус сосудов не вернется в исходное состояние. Добавьте 0,3 микромоляра U46619 в ванну и наблюдайте в течение 10 минут.

Добавьте один микромолярный апигенин и наблюдайте за сосудистыми эффектами. Когда расширение достигнет плато, добавьте следующую концентрацию. Добавьте один микромолярный апигенин к 60 миллимолярному раствору калия, предварительно уменьшающемуся для наблюдения за сосудистым эффектом.

Когда расширение достигнет плато, добавьте следующую концентрацию. Добавьте 28 миллимоляров иона калия в покоящееся сосудистое кольцо. Когда сокращение достигнет плато, добавьте следующую концентрацию.

Добавьте 0,01 микромоляра U46619 к покоящемуся сосудистому кольцу. Когда сокращение достигнет плато, добавьте следующую концентрацию. После того, как начальное напряжение Ньютона в три милли Ньютона было приложено к артериальному кольцу, его напряжение превысило более двух милли Ньютонов, применяя концентрацию 60 миллимоляров ионов калия параллельно три раза.

Таким образом, вышеуказанные процедуры привели к изолированному коронарному кольцу с отличной физиологической активностью. Кумулятивную концентрацию ионов калия, или U46619, добавляли в ванну DMT620M, что приводило к концентрационно-зависимому повышению сосудистого тонуса пробирки. Следующая концентрация иона калия или U46619 была добавлена, когда эффект сужения сосудов достиг плато.

Для изолированных коронарных колец, суженных ионом калия и U46619, тестируемый препарат апигенин вызывал вазодилатацию удивительно концентрационно-зависимым образом. Сердце рассекается вдоль желудочковой перегородки от корня легочной артерии, обнажая и отделяя два миллиметра коронарным мышечным кольцом. После этой процедуры мы можем регистрировать сосудистое напряжение в микрососудах сетчатки, функцию почек, почечную артерию и в средней мозговой артерии.

Область динамически от 60 микрометров до 10 миллиметров.