Основные компоненты анализов транскрипции Borreliella (Borrelia) burgdorferi in vitro

Система анализа транскрипции in vitro для Borreliella burgdorferi предоставляет исследователям биохимический инструмент для изучения механизмов регуляции генов и факторов, которые управляют ферментативной активностью РНК-полимеразы. Система позволяет нам проверить, как факторы транскрипции, кофакторы, концентрации соли и рН влияют на функцию РНК-полимеразы Borreliella burgdorferi, что способствует нашему общему пониманию механизмов регуляции генов. Этот мощный метод также может позволить нам проводить скрининг лекарств, которые избирательно ингибируют РНК-полимеразу, открывая двери для разработки новых лекарств для лечения боррелиоза Лайма.

Для начала соберите клеточный гранул от двух до четырех литров Borreliella burgdorferi RpoC-His10X, культивируемого в среде BSKII в микроаэрофильной среде, до плотности в два-четыре раза по 10 констант на миллилитр. Гранулируйте ячейки в 10 000 раз G в течение 30 минут при четырех градусах Цельсия в центробежных бутылках объемом 500 миллилитров и выбросьте надосадочную жидкость. Затем ресуспендируйте клетки в 30 миллилитрах ледяного буфера HN, повторите этап центрифугирования и сцедите надосадочную жидкость.