Name: Основы гистологии и обнаружение гибели клеток в ткани медоносных пчел (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Изучите методы иммуногистохимии для обнаружения апоптоза и некроза в тканях медоносных пчел. Этот подход позволяет оценить клеточные ответы на пестициды и акарициды в средней кишке и гипофарингеальных железах.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Я с благодарностью отмечаю поддержку Словенского исследовательского агентства, грант No P4-133.

<ol><li>Ruttner, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRuttner%2C+F+%22Naturgeschichte+der+Honigbienen%22">Naturgeschichte der Honigbienen</a>. , Ehrenwirth. München. (1992).</li>
<li>Jordan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kleine+Bienenkunde%5BTitle%5D)+AND+%22%C3%96sterreichischer+Agrarverlag+Wien+M%C3%BCnchen%22%5BJournal%5D)">Kleine Bienenkunde.</a> Österreichischer Agrarverlag Wien München. , 41-45 (1964).</li>
<li>Snodgrass, R. E. The Anatomy of the Honey Bee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSnodgrass%2C+RE+%22The+Hive+and+the+Honey+Bee%22">The Hive and the Honey Bee</a>. , Dadant and Sons. 111-113 (1975).</li>
<li>Snodgrass, R. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSnodgrass%2C+RE+%22The+Anatomy+of+the+Honey+Bee%22">The Anatomy of the Honey Bee</a>. , Cornell University Press. (2004).</li>
<li>Hrassnigg, N., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+hypopharyngeal+gland+development+to+the+brood+status+of+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Adaptation of hypopharyngeal gland development to the brood status of honeybee (Apis mellifera L.) colonies.</a> Journal of Insect Physiology. 44 (10), 929-939 (1998).</li>
<li>Smodiš Škerl, M. I., Gregorc, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+hypopharyngeal+glands+in+honeybees+%28Apis+mellifera+carnica%29+from+a+nurse+colony%5BTitle%5D)+AND+%22Slovenian+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Characteristics of hypopharyngeal glands in honeybees (Apis mellifera carnica) from a nurse colony.</a> Slovenian Veterinary Research. 52 (2), 67-74 (2015).</li>
<li>Kubo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+the+expression+of+hypopharyngeal-gland+proteins+of+the+worker+honeybees+%28Apis+mellifera+L.%29+with+age+and%2For+role%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Change in the expression of hypopharyngeal-gland proteins of the worker honeybees (Apis mellifera L.) with age and/or role.</a> Journal of Biochemistry. 119 (2), 291-295 (1996).</li>
<li>Sammataro, D., Yoder, J. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSammataro%2C+D+%22Honey+bee+colony+health%3A+Challenges+and+sustainable+solutions%22">Honey bee colony health: Challenges and sustainable solutions</a>. , Taylor & Francis Group. 302(2012).</li>
<li>Crailsheim, K., Stolberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+diet%2C+age+and+colony+condition+upon+intestinal+proteolytic+activity+and+size+of+the+hypopharyngeal+glands+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Influence of diet, age and colony condition upon intestinal proteolytic activity and size of the hypopharyngeal glands in the honeybee (Apis mellifera L.).</a> Journal of Insect Physiology. 35 (8), 595-602 (1998).</li>
<li>Smodiš Škerl, M. I., Gregorc, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+proteins+and+cell+death+in+situ+localisation+in+hypopharyngeal+glands+of+honeybee+%28Apis+mellifera+carnica%29+workers+after+imidacloprid+or+coumaphos+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Heat shock proteins and cell death in situ localisation in hypopharyngeal glands of honeybee (Apis mellifera carnica) workers after imidacloprid or coumaphos treatment.</a> Apidologie. 41 (1), 73-86 (2010).</li>
<li>Gregorc, A., Bowen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histochemical+characterisation+of+cell+death+in+honeybee+larvae+midgut+after+treatment+with+Paenibacillus+larvae%2C+Amitraz+and+Oxytetracycline%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International%22%5BJournal%5D)">The histochemical characterisation of cell death in honeybee larvae midgut after treatment with Paenibacillus larvae, Amitraz and Oxytetracycline.</a> Cell Biology International. 24 (5), 319-324 (2000).</li>
<li>Higes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+pathogenesis+of+Nosema+ceranae+%28Microsporidia%3A+Nosematidae%29+in+honey+bees+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Microbiology+Reports%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the pathogenesis of Nosema ceranae (Microsporidia: Nosematidae) in honey bees (Apis mellifera).</a> Environmental Microbiology Reports. 5 (4), 530-536 (2013).</li>
<li>Kurze, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+dynamics+of+Nosema+ceranae+in+honey+bee+midgut+and+host+cell+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Invertebrate+Pathology%22%5BJournal%5D)">Infection dynamics of Nosema ceranae in honey bee midgut and host cell apoptosis.</a> Journal of Invertebrate Pathology. 154, 1-4 (2018).</li>
<li>Johnson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Honey bee toxicology.</a> Annual Review of Entomology. 60 (1), 415-434 (2005).</li>
<li>Gashout, H. A., Guzman-Novoa, E., Goodwin, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+and+natural+acaricides+impair+hygienic+and+foraging+behaviors+of+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Synthetic and natural acaricides impair hygienic and foraging behaviors of honey bees.</a> Apidologie. 51 (6), 1155-1165 (2020).</li>
<li>McMenamin, A. J., Genersch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+colony+losses+and+associated+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Honey bee colony losses and associated viruses.</a> Current Opinion in Insect Science. 8, 121-129 (2015).</li>
<li>Ramsey, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Varroa+destructor+feeds+primarily+on+honey+bee+fat+body+tissue+and+not+hemolymph%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+USA%22%5BJournal%5D)">Varroa destructor feeds primarily on honey bee fat body tissue and not hemolymph.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 116 (5), 1792-1801 (2019).</li>
<li>Requier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+bee+diet+in+intensive+farmland+habitats+reveals+an+unexpectedly+high+flower+richness+and+a+major+role+of+weeds%5BTitle%5D)+AND+%22Ecological+Applications%22%5BJournal%5D)">Honey bee diet in intensive farmland habitats reveals an unexpectedly high flower richness and a major role of weeds.</a> Ecological Applications. 25 (4), 881-890 (2015).</li>
<li>Santos, C., Serrão, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology+of+the+ileum+in+bees+%28Hymenoptera%2C+Apoidea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Morphological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Histology of the ileum in bees (Hymenoptera, Apoidea).</a> Brazilian Journal of Morphological Sciences. 23 (3), 405-413 (2006).</li>
<li>Suwannapong, G., Saichon, C., Benbow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histochemical+comparison+of+the+hypopharyngeal+gland+in+Apis+cerana+Fabricius%2C+1793+workers+and+Apis+mellifera+Linnaeus%2C+1758+workers%5BTitle%5D)+AND+%22Psyche%3A+A+Journal+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Histochemical comparison of the hypopharyngeal gland in Apis cerana Fabricius, 1793 workers and Apis mellifera Linnaeus, 1758 workers.</a> Psyche: A Journal of Entomology. , (2010).</li>
<li>Ceylan, A., Sevin, S., Özgenç, Ö <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+histochemical+structure+of+the+midgut+and+hindgut+of+the+Caucasian+honey+bee+%28Apis+mellifera+caucasia%29%5BTitle%5D)+AND+%22Turkish+Journal+of+Veterinary+and+Animal+Sciences%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and histochemical structure of the midgut and hindgut of the Caucasian honey bee (Apis mellifera caucasia).</a> Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences. 43 (6), 747-753 (2019).</li>
<li>Human, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miscellaneous+standard+methods+for+Apis+mellifera+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Miscellaneous standard methods for Apis mellifera research.</a> Journal of Apicultural Research. 52 (4), 1-53 (2013).</li>
<li>Gregorc, A., Smodiš Škerl, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicological+and+immunohistochemical+testing+of+honeybees+after+oxalic+and+rotenone+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Toxicological and immunohistochemical testing of honeybees after oxalic and rotenone treatments.</a> Apidologie. 38 (3), 296-305 (2007).</li>
<li>Carreck, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+methods+for+Apis+mellifera+anatomy+and+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Standard methods for Apis mellifera anatomy and dissection.</a> Journal of Apicultural Research. 52 (4), 1-40 (2013).</li>
<li>Bowen, I. D., Bowen, S. M., Jones, A. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBowen%2C+ID+%22Mitosis+and+apoptosis%3A+Matters+of+Life+and+Death%22">Mitosis and apoptosis: Matters of Life and Death</a>. , Chapman & Hall. London. (1998).</li>
<li>Eisenberg-Lerner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+and+death+partners%3A+apoptosis%2C+autophagy+and+the+cross-talk+between+them%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Life and death partners: apoptosis, autophagy and the cross-talk between them.</a> Cell Death and Differentiation. 16 (7), 966-975 (2009).</li>
<li>Bowen, I. D., Mullarkey, K., Morgan, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+cell+death+in+the+salivary+gland+of+the+blow+fly+Calliphora+vomitoria%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+Techniques%22%5BJournal%5D)">Programmed cell death in the salivary gland of the blow fly Calliphora vomitoria.</a> Microscopy Research Techniques. 34, 202-207 (1996).</li>
<li>D'Arcy, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death%3A+a+review+of+the+major+forms+of+apoptosis%2C+necrosis+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International%22%5BJournal%5D)">Cell death: a review of the major forms of apoptosis, necrosis and autophagy.</a> Cell Biology International. 43 (6), 582-592 (2019).</li>
<li>Matylevitch, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+and+accidental+cell+death+in+cultured+human+keratinocytes+after+thermal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis and accidental cell death in cultured human keratinocytes after thermal injury.</a> American Journal of Pathology. 153 (2), 567-577 (1998).</li>
<li>Perry, S. W., Epstein, L. G., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+in+situ+detection+of+apoptosis+and+necrosis+in+monolayer+cultures+by+TUNEL+and+trypan+blue+staining%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Simultaneous in situ detection of apoptosis and necrosis in monolayer cultures by TUNEL and trypan blue staining.</a> BioTechniques. 22 (6), 1102-1106 (1997).</li>
<li>Cuello-Carrion, F. D., Ciocca, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+detection+of+apoptotic+cells+using+a+modified+in+situ+TUNEL+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Improved detection of apoptotic cells using a modified in situ TUNEL technique.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 47 (6), 837-839 (1999).</li>
<li>Gregorc, A., Bowen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+cell+death+in+the+honeybee+%28Apis+mellifera+L.%29+larvae+midgut%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International%22%5BJournal%5D)">Programmed cell death in the honeybee (Apis mellifera L.) larvae midgut.</a> Cell Biology International. 21 (3), 151-158 (1997).</li>
<li>Gregorc, A., Pogačnik, A., Bowen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+honey+bee+%28Apis+mellifera%29+larvae+treated+with+oxalic+or+formic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Cell death in honey bee (Apis mellifera) larvae treated with oxalic or formic acid.</a> Apidologie. 35 (5), 453-460 (2004).</li>
</ol>

У автора нет конфликта интересов.

У живых организмов гибель клеток определяется как апоптоз или некроз25 и может сопровождаться аутофагией26. Разница между апоптотическими и некротическими клетками заключается в том, что апоптоз является формой запрограммированной гибели клеток и появляется в нормальных клетках, тогда как некроз возникает из-за летальных состояний (например, несчастный случай, болезнь)27,28. Апоптоз может быть обнаружен с помощью на...

Медоносные пчелы (Apis mellifera L.) являются, среди других диких опылителей, наиболее важными опылителями сельскохозяйственных растений. На протяжении тысячелетий изменяющаяся окружающая среда влияла на пчел, чтобы адаптировать их морфологию, физиологию, поведение и толерантность к нескольким патогенам и паразитам. Поэтому медоносные пчелы развили очень разнообразный диапазон видов и подвидов по всему земному шару1. Эти результаты согласуются с предыдущими выводами о том, что существует генетическая вариация в структуре пищеварительного тракта медоносной пчелы, но также предполагают, что изменения средней кишки обусловлены факторами окружающей среды 2,3.
Пищеварительный тракт медоносной пчелы состоит из трех основных частей: передней кишки, средней кишки (ventriculus) и задней кишки4. Желудочек является важным органом для переваривания пыльцы и нектара/меда; в задней кишке осмотический контроль происходит путем поглощения воды и ионов2. Гипофарингеальные железы (HPG) работников медоносных пчел расположены в голове и синтезируют и выделяют компоненты маточного молочка для питания расплода, матки и членов колонии. Их размер меняется с возрастом и задачами и зависит от правильного питания (качественная пыльца). Работники медсестер в возрасте от 6 до 18 дней занимаются выращиванием расплода, а размер HPG увеличивается на 5,6. У пчел-фуражиров HPG дегенерируют и выделяют только ферменты, которые важны для превращения сложных сахаров в простые (α-глюкозидазы, лейцинариламидазы, инвертазы) вмеде 7.
Медоносные пчелы подвергаются воздействию нескольких биотических и абиотических стрессоров8, а на пищеварительный тракт могут влиять несколько негативных стимуляторов. Первым барьером, защищающим организм от болезнетворных микроорганизмов, является перитрофическая мембрана в средней кишке, которая состоит из слизистой оболочки кишечника для защиты от болезнетворных микроорганизмов4. Развитие и функция HPG зависят от диеты, возраста и состояния колонии9 и подвержены влиянию инсектицидов, акарицидов10 и патогенов 11,12,13. Остатки акарицидов в улье из-за контрольной обработки варроа и пестицидов из окружающей среды влияют на пчел-фуражиров ипчел-кормилиц 14,15. Наибольшую угрозу для колоний медоносных пчел представляет клещ Варроа-деструктор, как переносчик вирусов, способствующих потерям колоний16, так и как потребитель жирового тела хозяина (важный жизненно важный орган у медоносных пчел), который, следовательно, влияет на организм человека и функции колонии17.
Тем не менее, интенсивные места обитания сельскохозяйственных угодий могут обеспечить краткосрочное снабжение продовольствием для медоносных пчел. Поэтому агроэкологические схемы должны повысить доступность медоносных цветов в сельскохозяйственных ландшафтах18. Для оценки морфологии различных подвидов 6,19,20,21 или сублетальных эффектов этих факторов на клеточном или тканевом уровнях, особенно средней кишки и HPG, гистологические и иммуногистохимические методы являются практичными и достаточно точными для использования в гистологических исследованиях у медоносных пчел.

<table><tbody><tr><td>2-Набор пропанол</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ApopTag пероксидазы (ApopTag Peroxidase in situ Apoptosis Detection)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7100</td><td>Assay B, https://www.sigmaaldrich.com/SI/en/product/mm/s7100?gclid=CjwKCA jw7vuUBhBUEiwAEdu2pPanI9SE j81ZTl-nLHEoxXAv7ViKwPA_QRx H7fciMRNcYwR7lbPQbhoCqcQQA vD_BwE; Положительные элементы контроля входят в состав S7101</td></tr><tr><td>Covers DeadEnd</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colorimetric TUNEL system</td><td>Promega</td><td>G7360</td><td>Assay A, https://worldwide.promega.com/products/cell-health-assays/apoptosis-assays/deadend-colorimetric-tunel-system/?catNum=G7360</td></tr><tr><td>Диссекционный микроскоп&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Дистиллированная вода</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Встраиваемая кассета</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EnVision System набор щелочной фосфатазы</td><td>Dako</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y Solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>спиртовой</td></tr><tr><td>этанол</td><td></td><td></td><td>95% (или менее чистый), 90%, 80%</td></tr> <tr><td>Faramount монтажная среда, водная</td><td>Dako</td><td></td><td>монтажный средний</td></tr><tr><td>Плющильный стол</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Щипцы (для вскрытия пчел)</td><td>Инструменты для тонкой науки</td><td>11294-00</td><td>Стандарт #4</td></tr><tr><td>Формалин 10%</td><td></td><td></td> <td>Формальдегид</td></tr><tr><td>Гематоксилин</td><td>Сигма-Олдрич</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ГистоЧойс Очищающий агент</td><td>Сигма-Олдрич</td><td></td><td>Очиститель</td></tr><tr><td>Водород пероксидаза 3%</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Инкубатор</td><td>BioRad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insect pins&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td>Entosphinx</td><td>44594</td><td>Штифты для насекомых нержавеющая сталь &ndash; белый, размер 2</td></tr><tr><td>ISCDDK, AP (In Situ Cell Death Detection Kit, щелочная фосфатаза)</td> <td>Roche</td><td>11684809910</td><td>Assay C, https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/362/737/11684809910b ul.pdf</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lab clock</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Световой микроскоп</td><td>Предметные</td> стекла Leica <td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Коробка со стеклами должна быть законсервирована в полиэтиленовую пленку для предотвращения попадания пыли</td>Микротом Модульная станция встраивания тканей Leica Na2HPO4<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Параформальдегид 4%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Парапласт</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Пастер пипетки</td><td></td><td></td><td>1,5 мл; 3 мл</td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>чашка Петри&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td></td><td></td><td>Заполнен конденсационным кремнием&nbsp; (Ксантопрен L синий и универсальный активатор жидкости плюс)</td></tr><tr><td>Протеиназа K</td><td>Merck</td><td>21627</td><td></td></tr><tr><td>Раствор Рингера&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td></td><td></td><td>7,5 г NaCL, 2,38 г Na2HPO4, 2,72 г KH2PO4, 1 л дистиллированной воды</td></tr><tr><td>Ножницы&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td>Инструменты для тонкой науки</td><td>1406-09, 14061-09</td><td>Прямые и изогнутые, 9 см</td></tr><tr><td>Универсальная жидкость плюс активатор&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td>Часовщик Kulzer</td><td></td><td></td></tr><tr><td> s щипцы (для вскрытия пчел)</td><td>Инструменты для тонкой науки</td><td>91100-12</td><td></td></tr><tr><td>Водяная баня</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Акварельная кисть</td><td></td><td></td><td>2x</td></tr><tr><td>Xantoprene L blue&nbsp; (для вскрытия пчел)</td><td>Кульцер</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Основы гистологии и обнаружение гибели клеток в ткани медоносных пчел

Histology Basics and Cell Death Detection in Honeybee Tissue

Медоносные пчелы (Apis mellifera L.) внутри улья (медсестры и другие пчелы-ульи) и вне улья (фуражиры) подвергаются воздействию изменений климата и погоды, различных пестицидов, патогенов и недоедания, в основном попадая через рот и в первую очередь поражая пищеварительный тракт взрослых пчел. Чтобы понять и предотвратить воздействие таких внешних и внутренних стрессоров на медоносных пчел, одним из полезных методов исследования является иммуногистохимический метод. Описан базовый протокол подготовки средней кишки (желудочковой) и гипофарингеальной желез (ГПГ) взрослых пчел к гистологическому анализу. Описана подробная методика оценки уровня повреждения клеток и отличия некроза от запрограммированной гибели клеток (апоптоза) как естественного процесса регенерации тканей. Представлены результаты обработки взрослых медоносных пчел щавелевой кислотой и пестицидами (инсектицидами и акарицидами) и определения гибели клеток в желудочках и ГПГ. Также обсуждаются плюсы и минусы методики.

Обнаружение гибели клеток в средней кишке Недавно появившиеся рабочие пчелы (Apis mellifera carnica) с экспериментальной пасеки в Сельскохозяйственном институте Словении в Любляне были индивидуально обработаны 3% щавелевой кислотой (OA)23. OA часто используется в пчеловодстве для управления деструктором Varroa . После обработки рабочих пчел (по три из каждой группы) обездвиживали на льду. Среднюю кишку рассекли и зафиксировали в 10% формалине. Затем ткань обез...

Иммуногистохимические методы полезны в исследованиях медоносных пчел для выявления и оценки уровня апоптоза и некроза в средней кишке и гипофарингеальных железах взрослых пчел.

Honeybees (Apis mellifera L.) inside the hive (nurse workers and other hive bees) and outside the hive (foragers) are exposed to climate and weather ...

Этот протокол полезен во многих биологических и токсикологических исследованиях медоносных пчел, обработанных пестицидами. Он помогает обнаружить клеточные реакции ткани медоносных пчел на акарициды, которые используются в пчелиных семьях для лечения против клещей Варроа. Это мощный инструмент для обнаружения суб-малого воздействия на ткани в сочетании с поведением пчел или других полезных насекомых.Для начала осторожно возьмите рабочую пчелу с щипцами и положите ее на лед или морозильную камеру при минус 20 градусах Цельсия на две минуты, чтобы обездвижить ее. Прижмите пчелу к чашке Петри по диагонали через самую верхнюю заднюю часть грудной клетки дважды слева направо и справа налево. Плохое насекомое физиологическим раствором покрывает тело.Поместите чашку Петри под стереомикроскоп, сфокусируйте и отрегулируйте. Чтобы рассечь среднюю кишку, начните с живота, вставив одну точку ножниц под тергит А5 в центр правой стороны тела пчелы. Вырезать до тергита А2. Держите внутреннее лезвие ножниц параллельно боковой части тела, чтобы избежать повреждения внутренних органов.Поверните ножницы влево и отрежьте. Аккуратно откройте левую часть живота и приколите ее. С помощью щипцов одной рукой аккуратно потяните желудок медоносной пчелы вверх, а ножницами в другой руке срежьте в самом конце пищевода.Оттяните живот и среднюю кишку от живота и срежьте прямую кишку. Используйте пипетку с солевым раствором насекомых и удалите любые калы или части ткани. Для рассечения гипофарингеальных желез обездвижите рабочую пчелу на льду, как описано выше.Отрежьте голову и поместите ее на меньшую пластину с антенной вверх. Закрепите голову двумя штифтами, один через левый составной глаз, а второй через правый составной глаз. Сделайте разрез поперек первого составного глаза на внутренней стороне штифтов, продолжайте движение к лабруму, а затем сделайте еще один разрез на другой стороне через второй составной глаз.Отрежьте усики. Снимите маску и срежьте там, где еще прикреплены. Возьмите щипцы и аккуратно удалите железы вместе с мозгом и частью сложных глаз.Для окрашивания гематоксилина и эозина поместите депараксированные, регидратированные участки в гематоксилин на пять минут. Затем аккуратно поместите их под проточную водопроводную воду на две минуты. Затем поместите их в дистиллированную воду на одну минуту и эозин на четыре минуты.Поместите слайды 96% этанола в течение одной минуты, затем 2-пропанола в течение двух минут и, наконец, в очищающее средство на две минуты. Добавьте монтажную среду и защитное стекло и дайте им высохнуть. Наблюдайте под световым микроскопом.Приготовьте банки Коплина. Готовят протеиназу-К. После депарафинизации и регидратации секций поместите слайды в PBS на пять минут.Поместите слайды в контейнер и добавьте протеиназу-К. Промойте горки в дистиллированной воде. Закалка в эндогенной пероксидазе при комнатной температуре.Промойте горки PBS или водой. Поместите слайды в контейнер и примените буфер равновесия на 10 секунд при комнатной температуре. После протирания вокруг ткани добавляют терминальный фермент дезоксинуклеотидилтрансферазы к каждому участку и инкубируют в увлажненной камере в течение одного часа при 37 градусах Цельсия.Перед инкубацией положите смоченные бумажные полотенца внутрь лотка вокруг горок и накройте их полиэтиленовой пленкой. После инкубации положите экземпляры на стойку и оставьте их в буфере стоп-промывки. После мытья горок в PBS и протирания вокруг тканей добавьте две капли теплой антидигоксигенинпероксидазы, конъюгированной в срезы и высиживайте в течение 30 минут в увлажненной емкости.После промывки в PBS, подготовьте рабочую прочно-пероксидазную подложку, накройте участки пероксидазной подложкой и окрашивайте в течение пяти минут. Поместите слайд под микроскоп и определите оптимальное время окрашивания. После мытья горок в окрасочной стойке и дистиллированной воде высиживать горки в дистиллированной воде в течение пяти минут.Противопоставьте пятно с использованием гематоксилина в течение двух минут. Вымойте горки, поместив их под проточную водопроводную воду на три минуты, а затем в дистиллированную воду. Установите горки под стеклянные крышки и монтажную среду и оставьте плоскими для высыхания.Наблюдайте под световым микроскопом. Процент пораженных клеток рассчитывали с помощью светового микроскопа. Результаты показали, что лечение щавелевой кислотой значительно повлияло на клетки в средней кишке.Иммуноокрашивание показало положительные красные или коричневые продукты реакции в апоптотических ядрах гипофарингеальных желез. Положительная реакция продукта после лечения имидаклопридом или кумафосом определялась в большинстве железистых клеток. При снятии маски с пчелиной головы следите за тем, чтобы не повредить и не оторвать части гипофарингеальных желез.Этот метод обнаруживает субклинические изменения у пчел, а также подходит для обнаружения других воздействий окружающей среды на пчел и некоторые другие живые организмы.

histology-basics-and-cell-death-detection-in-honeybee-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Пчелы могут быть обусловлены в аппетит обонятельных парадигмы обучения (PER кондиционирования). Использование запахов в качестве стимула, мы создали метод, в котором поведение записывается одновременно Кальций изображений используется для измерения запаха вызванную активность нейронов в грибном...

В естественных условиях Са 2 + - Съемка Гриб Нейроны тела во время обучения в обонятельной Honey Bee

Приведем простой протокол для визуализации регионов запрограммированной клеточной смерти (PCD) у эмбрионов мышей и дифференциации эмбриональных стволовых (ЭС) клеточных культур с использованием высоко растворимых красителей называют LysoTracker.

Использование LysoTracker обнаружить запрограммированной смерти клеток в эмбрионы и дифференциации эмбриональных стволовых клеток

В пчелиных работников, старение зависит от социального поведения, а не на хронологический возраст. Здесь мы показываем, как рабочие-типы с очень разных форм старения могут быть получены и проанализированы на клеточного старения.

Получение мутантов Замедление, ускоренного и Обратный Старение в Honey Bee Model

Микрочастицы клеточной мембране-пролил (MPS) являются активными биологические везикулы, которые могут быть выделены и их патофизиологические эффекты исследованы в различных моделях. Здесь мы описываем способ генерации MPs, полученные из Т-лимфоцитов (LMPs) и демонстрации их влияния на проапоптотический эпителиальных клеток дыхательных путей.

Генерация лимфобластный микрочастиц и выявление их проапоптозный Влияние на эпителиальными клетками дыхательных путей

Drosophila широко используется в качестве модельной системы для изучения нейродегенерации. Этот протокол описывает метод, с помощью которого вырождение, как определено образованием вакуолей в головном мозге, могут быть определены количественно. Это также сводит к минимуму эффекты, связанные с экспериментальной процедуры по обработке и секционирования контрольных и экспериментальных мух в качестве одного образца.

Масса гистологии к Количественно нейродегенерации<em&gt; Drosophila</em

Брюшной спинной сосуд медоносной пчелы и других насекомых служит функциональным эквивалентом сердца млекопитающего и играет важную роль в транспортировке питательных веществ, выведении отходов, иммунной функции и многом другом. Здесь мы опишем протокол визуализации и фармакологической манипуляции с частотой сердечных сокращений пчел.

Вскрытие и наблюдение Honey Bee Спинной сосуд для исследований сердечной функции

Мы здесь описываем анализ фагоцитоза с использованием дисперсных эмбриональных клеток Drosophila . Это позволяет нам легко и точно определять уровни фагоцитоза in vivo и идентифицировать новые молекулы, необходимые для фагоцитоза апоптозных клеток.

Анализ фагоцитоза для апоптозных клеток в Drosophila Эмбрионы

Чтобы проверить тормозящее действие фармакологических агентов на фосфолипаза C (PLC) в различных регионах мозга пчелы, мы представляем биохимического анализа для измерения активности PLC в этих регионах. Этот assay может быть полезным для сравнения PLC активность тканей, а также среди пчел, экспонирование различных поведений.

Определение активности фосфолипазы C в мозг огневки от пчелы

Гортаноглотки железы Ацинус размер является надежной мерой медсестра мед пчелы питания. Здесь мы предоставляем подробный протокол для рассечения, окрашивание, изображений и измерение медсестра пчел гортаноглотки железы Ацинусы.

Измерения гортаноглотки железы Ацинус размера медоносной пчелы (Apis mellifera) рабочих

Представлен протокол для использования системы CRISPR-Cas9 для сокращения производства белка во взрослом мозге пчел для проверки специфики антител.

Анти-RDL и Anti-mGlutR1 Рецепторы Антитела Тестирование в медоносных пчел мозга разделы с помощью CRISPR-Cas9

Изучите методы иммуногистохимии для обнаружения апоптоза и некроза в тканях медоносных пчел. Этот подход позволяет оценить клеточные ответы на пестициды и акарициды в средней кишке и гипофарингеальных железах.

Основы гистологии и обнаружение гибели клеток в ткани медоносных пчел

Больше видео