Name: Автоматическое отделение и сбор веществ, связанных с раком, из клинических образцов (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-13T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Узнайте автоматизированный протокол выделения циркулирующих опухолевых клеток и циркулярной ДНК из цельной крови. Этот метод минимизирует загрязнение и обеспечивает высокую чистоту образцов для исследований рака.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Эта рукопись была частично поддержана Корейским фондом разработки медицинских изделий (KMDF, грант No RS-2020-KD000019) и Корейским институтом развития индустрии здравоохранения (KHIDI, грант No HI19C0521020020).

<ol><li>Babayan, A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+liquid+biopsy+approaches+for+early+detection+and+monitoring+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">Advances in liquid biopsy approaches for early detection and monitoring of cancer.</a> Genome Medicine. 10 (1), 21(2018).</li>
<li>Crowley, E., Di Nicolantonio, F., Loupakis, F., Bardelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsy%3A+monitoring+cancer-genetics+in+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsy: monitoring cancer-genetics in the blood.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 10 (8), 472-484 (2013).</li>
<li>Bardelli, A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsies%2C+what+we+do+not+know+%28yet%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsies, what we do not know (yet).</a> Cancer Cell. 31 (2), 172-179 (2017).</li>
<li>Mattox, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+liquid+biopsies+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Applications of liquid biopsies for cancer.</a> Science Translational Medicine. 11 (507), (2019).</li>
<li>Heitzer, E., Perakis, S., Geigl, J. B., Speicher, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+liquid+biopsies+for+the+early+detection+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precision+Oncology%22%5BJournal%5D)">The potential of liquid biopsies for the early detection of cancer.</a> NPJ Precision Oncology. 1 (1), 36(2017).</li>
<li>Scudellari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myths+that+will+not+die%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myths that will not die.</a> Nature. 582 (7582), 322-326 (2015).</li>
<li>Prasad, V., Fojo, T., Brada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+oncology%3A+origins%2C+optimism%2C+and+potential%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Precision oncology: origins, optimism, and potential.</a> The Lancet Oncology. 17 (2), 81-86 (2016).</li>
<li>Prasad, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspective%3A+The+precision-oncology+illusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Perspective: The precision-oncology illusion.</a> Nature. 537 (7619), 63(2016).</li>
<li>Siravegna, G., Marsoni, S., Siena, S., Bardelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+liquid+biopsies+into+the+management+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Integrating liquid biopsies into the management of cancer.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (9), 531-548 (2017).</li>
<li>Bettegowda, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+DNA+in+early-and+late-stage+human+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor DNA in early-and late-stage human malignancies.</a> Science Translational Medicine. 6 (224), 24(2014).</li>
<li>Udomruk, S., Orrapin, S., Pruksakorn, D., Chaiyawat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+distribution+of+cell-free+DNA+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Size distribution of cell-free DNA in oncology.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 166, 103455(2021).</li>
<li>Paterlini-Brechot, P., Benali, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+%28CTC%29+detection%3A+clinical+impact+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions.</a> Cancer Letters. 253 (2), 180-204 (2007).</li>
<li>Loeian, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsy+using+the+nanotube-CTC-chip%3A+capture+of+invasive+CTCs+with+high+purity+using+preferential+adherence+in+breast+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsy using the nanotube-CTC-chip: capture of invasive CTCs with high purity using preferential adherence in breast cancer patients.</a> Lab on a Chip. 19 (11), 1899-1915 (2019).</li>
<li>Rikkert, L. G., Van Der Pol, E., Van Leeuwen, T. G., Nieuwland, R., Coumans, F. A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centrifugation+affects+the+purity+of+liquid+biopsy-based+tumor+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Centrifugation affects the purity of liquid biopsy-based tumor biomarkers.</a> Cytometry Part A. 93 (12), 1207-1212 (2018).</li>
<li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation%2C+culture%2C+and+downstream+molecular+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+advances%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation, culture, and downstream molecular analysis.</a> Biotechnology advances. 36 (4), 1063-1078 (2018).</li>
<li>Bennett, C. W., Berchem, G., Kim, Y. J., El-Khoury, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA+and+next-generation+sequencing+in+the+service+of+personalized+medicine+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA and next-generation sequencing in the service of personalized medicine for lung cancer.</a> Oncotarget. 7 (43), 71013(2016).</li>
<li>Lowes, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+%28CTC%29+and+cell-free+DNA+%28cfDNA%29+workshop+2016%3A+scientific+opportunities+and+logistics+for+cancer+clinical+trial+incorporation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells (CTC) and cell-free DNA (cfDNA) workshop 2016: scientific opportunities and logistics for cancer clinical trial incorporation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1505(2016).</li>
<li>Bryzgunova, O. E., Konoshenko, M. Y., Laktionov, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+cell-free+DNA+in+different+tumor+types%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Molecular+Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Concentration of cell-free DNA in different tumor types.</a> Expert Review of Molecular Diagnostics. 21 (1), 63-75 (2021).</li>
<li>Park, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumour+cells+as+an+indicator+of+early+and+systemic+recurrence+after+surgical+resection+in+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Circulating tumour cells as an indicator of early and systemic recurrence after surgical resection in pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-12 (2021).</li>
<li>Heidrich, I., Ačkar, L., Mossahebi Mohammadi, P., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsies%3A+Potential+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsies: Potential and challenges.</a> International Journal of Cancer. 148 (3), 528-545 (2021).</li>
<li>Celec, P., Vlková, B., Lauková, L., Bábíčková, J., Boor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA%3A+the+role+in+pathophysiology+and+as+a+biomarker+in+kidney+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Reviews+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA: the role in pathophysiology and as a biomarker in kidney diseases.</a> Expert Reviews in Molecular Medicine. 20, 1(2018).</li>
<li>Thierry, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+quantification+of+circulating+DNA+in+mice+with+human+colorectal+cancer+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Origin and quantification of circulating DNA in mice with human colorectal cancer xenografts.</a> Nucleic Acids Research. 38 (18), 6159-6175 (2010).</li>
<li>Moreira, V. G., de la Cera Martínez, T., Gonzalez, E. G., Garcia, B. P., Menendez, F. V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+and+clearance+of+cell-free+plasma+DNA+in+hemodialysis+quantified+by+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory+Medicine+%28CCLM%29%22%5BJournal%5D)">Increase in and clearance of cell-free plasma DNA in hemodialysis quantified by real-time PCR.</a> Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM). 44 (12), 1410-1415 (2006).</li>
<li>Gauthier, V. J., Tyler, L. N., Mannik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+clearance+kinetics+and+liver+uptake+of+mononucleosomes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Blood clearance kinetics and liver uptake of mononucleosomes in mice.</a> Journal of Immunology. 156 (3), 1151-1156 (1996).</li>
<li>Meng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+in+patients+with+breast+cancer+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells in patients with breast cancer dormancy.</a> Clinical Cancer Research. 10 (24), 8152-8162 (2004).</li>
<li>Alix-Panabières, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+circulating+tumour+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Challenges in circulating tumour cell research.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (9), 623-631 (2014).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+circulating+tumor+cells+in+non-small-cell-lung-cancer+patients+using+a+multi-flow+microfluidic+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Microsystems+%26+Nanoengineering%22%5BJournal%5D)">Isolation of circulating tumor cells in non-small-cell-lung-cancer patients using a multi-flow microfluidic channel.</a> Microsystems & Nanoengineering. 5 (1), 8(2019).</li>
<li>Sajay, B. N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+an+optimal+and+unbiased+approach+for+tumor+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Towards an optimal and unbiased approach for tumor cell isolation.</a> Biomedical Microdevices. 15 (4), 699-709 (2013).</li>
<li>Bailey, P. C., Martin, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+CTC+biology+and+clinical+impact+emerging+from+advances+in+capture+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on CTC biology and clinical impact emerging from advances in capture technology.</a> Cells. 8 (6), 553(2019).</li>
<li>Ahn, S. M., Simpson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+fluid+proteomics%3A+Prospects+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics-Clinical+Applications%22%5BJournal%5D)">Body fluid proteomics: Prospects for biomarker discovery.</a> Proteomics-Clinical Applications. 1 (9), 1004-1015 (2007).</li>
</ol>

У авторов нет конфликта интересов, связанного с данной работой.

Количество и концентрация cfDNA и CTC зависит от индивидуальности, стадии и типа рака. Это также зависит от состояния больного 2,4,5,10,20. В частности, на ранних или предраковых стадиях рака концентрации связанных с раком веществ очень низкие, поэтому существует высокая вероятность того, что его невозможно обнаружить. Тем не менее, раннее выявление оказывает ...

Раннее и точное выявление различных заболеваний, в том числе онкологических, является важнейшим фактором в установлении стратегии лечения 1,2,3,4. В частности, раннее выявление рака тесно связано с повышением шансов на выживаемость пациента 5,6,7,8. В последнее время жидкие биопсии находятся в центре внимания для раннего выявления рака. Солидные опухоли подвергаются ангиогенезу и выделяют в кровь различные вещества. В частности, вкрови больных раком обнаружены циркулирующие ДНК (ctDNAs), циркулирующие РНК (ctRNAs), белки, везикулы, такие как экзосомы, и циркулирующие опухолевые клетки (CTC). Хотя существуют различия в количестве этих веществ, они последовательно наблюдаются не только на ранних стадиях, но и на более поздних стадиях 6,10. Однако эти индивидуальные различия очень высоки; например, количество бесклеточной ДНК (cfDNA), содержащей ctDNA, составляет менее 1000 нг, а количество CTC составляет менее 100 в 10 мл цельной крови у больных раком 11,12,13. Многие исследования характеризуют рак с использованием этих веществ, присутствующих в меньших количествах (например, cfDNA, ctDNA и CTC). Для получения точных результатов важно точно отделить небольшие количества веществ с высокой чистотой13,14. Обычно используются обычные методы центрифугирования, но они сложны в обращении и имеют низкую чистоту в зависимости от навыков пользователя. С момента открытия CTC было разработано несколько методов разделения, таких как центрифугирование или разделение по плотности, иммуногранула и микрофлюидные методы. С момента открытия ЦОК было разработано несколько методов сдерживания. Однако эти методы часто ограничены, когда необходимо изолировать клетки из различных чипов и мембран, используемых для их выделения15. Кроме того, методы маркировки требуют такого оборудования, как FACS, и существуют ограничения на последующий процесс из-за загрязнения маркировки.
В последнее время возросло использование жидких биопсий, и проводятся различные исследования для раннего выявления рака. Хотя этот метод прост, все еще существуют трудности в последующем анализе, и различные исследования пытаются преодолеть эти трудности16,17. Кроме того, многие сайты, включая больницы, требуют автоматизированных, воспроизводимых и высокочистых методов, которые удобны в использовании. Здесь мы разработали лабораторию на диске для автоматического отделения веществ от образцов крови после жидкой биопсии. Эти устройства основаны на принципе центрифугирования, микрофлюидики и захвата клеток размером с пору. Существует три типа дисков: LBx-1 может приобретать плазму и пышную оболочку, в то время как LBx-2 может приобретать плазму и PBMC из цельной крови объемом менее 10 мл; FAST-auto также может приобретать CTC с помощью мембраны, которая снимается с диска. До четырех дисков можно использовать за один прогон. Прежде всего, преимущество этого устройства и метода заключается в том, что он может получать различные вещества, полученные из рака, из одного и того же образца, используя небольшое количество крови. Это означает, что кровь пациента должна быть взята только один раз. Кроме того, он имеет преимущество в исключении ошибок из-за различий в периоде забора крови. Эта платформа проста в использовании и обеспечивает точные результаты для жидких биопсий и последующих применений. В этом протоколе введено использование устройства и картриджа.

<table><tbody><tr><td>1% BSA (Бычий сывороточный альбумин)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>1,5 мл Микроцентрифужная пробирка</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>15 мл Коническая пробирка</td><td>SPL</td><td>50015</td><td></td></tr><tr><td>4150 TapeStation System</td><td>Agilent</td><td>G2992AA</td><td>Лента для скрининга бесклеточной ДНК (Agilent, 5067-5630), буфер для образцов бесклеточной ДНК (Agilent, 5067-5633)</td></tr><tr><td>Apostle MiniMax Высокоэффективный набор для выделения ДНК без клеток&nbsp;</td><td>Apostle</td><td>A17622-250</td><td>5 мл X 50 подготовительная версия</td></tr><tr><td>BD Vacutainer пробирки для сбора крови</td><td>BD</td><td>367525</td><td>EDTA Пробирка для сбора крови (10 мл)</td></tr><tr><td>BioViewCCBS</td><td>Clinomics</td><td></td><td>Индивидуальная система Bioview. Оборудование для кастомизации на базе микроскопа Allegro Plus</td></tr><tr><td>CD45 Моноклональное антитело (HI30), PE-Alexa Fluor 610</td><td>Invitrogen</td><td>MHCD4522</td><td></td></tr><tr><td>FAST Автоматический картридж</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M3001</td><td></td></tr><tr><td>LBx-1</td><td>картридж Clinomics</td><td>CLX-M4101</td><td></td></tr><tr><td>LBx-2</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M4201</td><td></td></tr><tr><td>OPR-2000 инструмент</td><td>Clinomics</td><td>CLX-I2001</td><td></td></tr><tr><td>Защитное стекло</td><td>Marienfeld Superior</td><td>HSU-0101040</td><td></td></tr><tr><td>DynaMag 2 Магнитная подставка</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll Paque Solution</td><td>GE здравоохранение</td><td>17-1440-03</td><td>градиент плотности раствор</td></tr><tr><td>Фильтрующий наконечник, 10 & микро; L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-10</td><td>Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.</td></tr><tr><td>Фильтрующий наконечник, 200 & микро; L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-200</td><td>Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.</td></tr><tr><td>Фильтрующий наконечник, 100 & микро; L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-100</td><td>Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.</td></tr><tr><td>Наконечник с фильтром, 1000 & микро; L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-1000</td><td>Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.</td></tr><tr><td>FITC anti-human CD326 (EpCAM) антитело</td><td>BioLegend</td><td>324204</td><td></td></tr><tr><td>FITC Мышиный античеловеческий цитокератин</td><td>BD Biosciences</td><td>347653</td><td></td></tr><tr><td>раствор формальдегида (35 мас. % в H2O)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>433284</td><td></td></tr><tr><td>Kimtech Science Wipers</td><td>Yuhan-Kimberly</td><td>41117</td><td></td></tr><tr><td>Латексная перчатка</td><td>Microflex</td><td>63-754</td><td></td></tr><tr><td>Штатив для разделения магнитных шариков</td><td>V& P Scientific</td><td>VP 772F2M-2</td><td></td></tr><tr><td>Ручное пипетирование&nbsp; (0,5-10 & микро; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000020</td><td></td></tr><tr><td>ручное пипетирование&nbsp; (2-20 & микро; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000038</td><td></td></tr><tr><td>ручное пипетирование&nbsp; (10-100 & микро; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000046</td><td></td></tr><tr><td>ручное пипетирование&nbsp; (20-200 & микро; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>ручное пипетирование&nbsp; (100-1000 & микро; L)</td><td>Монтажная среда Eppendorf</td><td>3120000062</td><td></td></tr><tr><td>с DAPI&nbsp;- водная, флюорощиток</td><td>abcam</td><td>ab104139</td><td></td></tr><tr><td>для нормального контроля IgG человека</td><td>R& D Systems</td><td>1-001-A</td><td></td></tr><tr><td>OLYMPUS BX-UCB</td><td>Olympus</td><td>9217316</td><td></td></tr><tr><td>Пан-цитокератиновое моноклональное антитело (AE1/AE3), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53-9003-82</td><td></td></tr><tr><td>PBS (фосфатно-солевой буферный раствор)</td><td>Corning</td><td>21-040CVC</td><td></td></tr><tr><td>Портативный пипеточный помощник</td><td>Drummond</td><td>4-000-201</td><td></td></tr><tr><td>Слайд-стекло</td><td>Marienfeld Superior</td><td>HSU-1000612</td><td></td></tr><tr><td>Коробка для окрашивания StainTray</td><td>Simport</td><td>M920</td><td></td></tr><tr><td>Стерильная серологическая пипетка (10 мл)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>Triton&nbsp; Решение X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>93443</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN&nbsp; 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P7949</td><td></td></tr><tr><td>Цельная кровь</td><td></td><td></td>, <td>хранящаяся при температуре 4-8 °°; C путем сбора в ЭДТА или стабильную пробирку cfDNA: Если в цельной крови недостаточно 9 мл, добавьте PBS (фосфатно-солевой буфер) столько, сколько необходимо.</td></tr><tr><td>X-Cite 120Q (Осветитель люминесцентной лампы)</td><td>Excelitas</td><td>010-00157</td><td></td></tr></tbody></table>

Автоматическое отделение и сбор веществ, связанных с раком, из клинических образцов

Automatic Separation and Collection of Cancer-Related Substances from Clinical Samples

В последнее время жидкие биопсии стали использоваться для диагностики различных заболеваний, в том числе рака. Жидкости организма содержат много веществ, включая клетки, белки и нуклеиновые кислоты, происходящие из нормальных тканей, но некоторые из этих веществ также происходят из больной области. Исследование и анализ этих веществ в жидкостях организма играют ключевую роль в диагностике различных заболеваний. Поэтому важно точно отделить необходимые вещества, и для использования с этой целью разработано несколько методик.
Мы разработали устройство и платформу типа «лаборатория на диске» под названием CD-PRIME. Это устройство автоматизировано и имеет хорошие результаты по загрязнению образца и стабильности образца. Кроме того, он имеет преимущества хорошей доходности приобретения, короткого времени работы и высокой воспроизводимости. Кроме того, в зависимости от типа диска, подлежащего установке, плазма, содержащая бесклеточную ДНК, циркулирующие опухолевые клетки, мононуклеарные клетки периферической крови или пушистые оболочки могут быть разделены. Таким образом, приобретение различных материалов, присутствующих в жидкостях организма, может быть сделано для различных последующих применений, включая изучение омики.

Целью этой методики является легкое и автоматическое выделение связанных с раком веществ из цельной крови. В частности, любой желающий может использовать эту технику во всех подходящих областях исследований и анализа. Одновременное и воспроизводимое разделение нескольких веществ в одном образце крови имеет значение при жидкой биопсии. Диски LBx-1 и LBx-2 используются для выделения плазмы и пышной оболочки или PBMC из цельной крови. На рисунке 1 показаны материалы, разделенные применением дан...

В этой статье описывается применение автоматизированного оборудования для легкого и эффективного отделения и сбора веществ, таких как бесклеточная ДНК и циркулирующие опухолевые клетки, из цельной крови.

Recently, liquid biopsies have been used to diagnose various diseases, including cancer. Body fluids contain many substances, including cells, proteins, ...

Наш протокол удобен для пользователя. Используя эту методику, любой желающий может легко выделить компонент из крови. Загрязнение может быть сведено к минимуму, а материалы могут быть точно разделены.Благодаря автоматизации и созданию этого протокола исследователи могут легко получать связанные с раком вещества с высокой чистотой, что полезно для различных последующих исследований. В частности, ожидается, что он обеспечит важные преимущества для исследований конечных пользователей. Демонстрировать свою процедуру будет Джей Чжон, старший научный сотрудник и помощник менеджера в Научно-исследовательском институте геномики рака.Для начала загрузите картридж LBx 1, выбрав тип картриджа на сенсорной панели прибора. Нажмите кнопку со стрелкой, чтобы изменить количество образцов. Затем откройте дверцу прибора и вставьте все картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа.В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку «Выполнить» на экране сенсорной панели.Прибор закрывает клапаны на картриджах, что занимает примерно 30 секунд. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверь. Снимите опорное колесо и извлеките закрытый клапан картриджа из держателя картриджа.Пипетка максимум 10 миллилитров образца цельной крови с использованием серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови. После вставки картриджей в прибор закройте дверцу прибора и нажмите кнопку OK.Плазма и пушистые оболочки автоматически отделяются от цельной крови, что занимает примерно 30 минут. Как только плазменное и пышное пальто будут разделены, на экране появится сообщение, сопровождаемое звуком тревоги. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку остановки.Откройте дверь. Извлеките картридж и положите его на стол. Извлеките три миллилитра плазмы из плазменного выхода с помощью одномиллилитрового наконечника пипетки.Затем извлеките три миллилитра пальто баффи из выходного отверстия для пальто, используя наконечник пипетки в один миллилитр. Затем загрузите картридж LBx 2, выбрав имя картриджа на сенсорной панели прибора. Нажмите кнопку стрелки, чтобы изменить количество образцов, и следуйте той же процедуре, что и для картриджа LBx 1, чтобы вставить картридж в держатель картриджа.После вставки картриджа и закрытия дверцы нажмите кнопку «Выполнить» на экране тачпада. Следуйте процедуре, показанной выше, чтобы извлечь закрытый клапан картриджа из держателя картриджа и поместить его на стол. Пипетка градиентного раствора плотности с помощью серологической пипетки.Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите раствор. Затем пипетка образца цельной крови и медленно вводит его во входное отверстие образца. После вставки и закрепления картриджа закройте дверцу и нажмите кнопку OK.Как только плазма и PBMC автоматически отделяются от цельной крови, появляется сообщение, сопровождаемое звуком тревоги. Откройте дверцу и извлеките картридж. Извлеките три миллилитра плазмы из плазменного выхода с помощью одномиллилитрового наконечника пипетки, а затем извлеките три миллилитра PBMC из выходного отверстия PBMC.Аналогичным образом, для картриджа FAST-auto после извлечения закрытого клапаном картриджа из держателя картриджа впрыскивайте шесть миллилитров раствора PBS во входное отверстие PBS картриджа. Затем пипетку из трех миллилитров цельной крови или пышной оболочки, полученной из LBx 1, или образца PBMC, полученного из LBx 2, и медленно вводят образец во входное отверстие образца картриджа. Вставив картридж и закрепив его, закройте дверцу и нажмите кнопку OK.Как только автоматическое обогащение CTC будет завершено, остановите сигнализацию. Извлеките картридж и вставьте средство для удаления задней панели, или BPR, в четыре отверстия на передней панели картриджа. Нажмите на темно-синее крыло большими пальцами обеих рук, а затем нажмите на светло-голубое тело, пока оно не щелкнет.Осторожно извлеките корпус картриджа, подняв его. Очень осторожно подберите фильтрующую мембрану за край с помощью пинцета и поместите мембрану в 1,5-миллилитровую трубку для приготовления нуклеиновой кислоты или на скользящее стекло для окрашивания. При необходимости восстановите отфильтрованную кровь к выходу крови с помощью одномиллилитрового наконечника пипетки.Извлеченные cfDNAs оценивали с помощью биоанализатора, а экранные ленты cfDNA использовали вместе с электронной лестницей. Зеленая линия использовалась для выравнивания лестницы и образца. Треугольные знаки указывают на полосу ДНК.Большинство cfDNA имеет длину 166 пар оснований, а некоторые существуют в целочисленных кратных длине. Обычно концентрация cfDNA измеряется размером от 50 до 700 пар оснований. Хотя существует разница в количестве, полученном из каждого отдельного образца, например, 8,47 нанограмма на миллилитр и 5,2 нанограмма на миллилитр, результаты экстракции cfDNA были хорошими как для концентрации, так и для распределения по размерам во всех случаях.Эти результаты указывают на то, что метод LBx 1 точно разделяет плазму, содержащую cfDNA. В FAST-auto мембрану удаляли и окрашивали флуоресцентными антителами для обнаружения ЦОК и лейкоцитов. Витражная мембрана, размещенная на стеклянных слайдах, наблюдалась под флуоресцентным микроскопом.После окрашивания мембран клетки показывают DAPI или ядерно-положительные сигналы синим цветом, в то время как EpCAM и CK или CTC положительные выделены зеленым цветом, а CD45 или WBC положительные выделены красным. Удалить мембрану не составляет труда. Тем не менее, необходимо быть осторожным с потерей и загрязнением CTC.Цельная кровь, PBMC и пышная шерсть доступны. Вместо этого вам просто нужно установить весь объем. Другие жидкости также могут быть использованы, хотя потребуется тестирование.Этот метод может быть прооперирован непосредственно в больницах, и вещество может быть получено быстро.

automatic-separation-collection-cancer-related-substances-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Исследования рака

Циркулирующих клеток опухоли, выделенных из крови больных раком, не причиняя повреждения клеток. Изоляция опухолевых клеток достигается с помощью бимолекулярной поверхности Е-селектина в дополнение к антителам против эпителиальных маркеров. Нанотрубок покрытие специально способствует адгезии раковых клеток приводит к высокой чистоты захвата.

Быстрое выделение жизнеспособного циркулирующих опухолевых клеток из образцов крови пациентов

Циркулирующие опухолевые клетки (CTCs) являются прогностическим в нескольких метастатических раковых заболеваний. Эта рукопись описывает стандартный CellSearch систему золотую (CSS) CTC перечисления платформу и выделяет наиболее распространенные ошибки неправильной классификации. Кроме того, два адаптированные протоколы описаны для пользовательского маркера характеристике ЦОК и СТС перечисления в доклинических моделях мыши метастазов с использованием этой технологии.

Адаптация полуавтоматического циркулирующих опухолевых клеток (СТС) Анализы для клинических и доклинических исследований приложений

Углубленный анализ протеомов раковых клеток облегчает идентификацию новых мишеней для лекарств и диагностических биомаркеров. Описан экспериментальный процесс количественного анализа (фосфо-)протеомов в субпопуляциях раковых клеток, полученных из жидких и солидных опухолей. Это достигается за счет сочетания стратегий обогащения клеток с количественной масс-спектрометрией на основе Super-SILAC.

Количественный масс-спектрометрический Профилирование раковых клеток протеомов, полученные из жидких и твердых опухолей

Кожные опухоли часто отбрасываются после микрографической хирургии Мооса. Здесь описывается протокол, который позволяет персоналу клинической поддержки эффективно обрабатывать и хранить образцы кожного новообразования ( например, плоскоклеточный рак, базально-клеточный рак и меланома) для последующих лабораторных исследований без вмешательства в клинические операции.

Создание клиники на основе биоресурсов

Характеристика циркулирующих опухолевых клеток (КТК) является популярной темой в трансляционных исследованиях. Этот протокол описывает полуавтоматический иммунофлуоресценции (IF) анализ для PD-L1 характеристики и перечисления CTCs в немелкоклеточного рака легких (NSCLC) образцов пациентов.

Полуавтоматический PD-L1 Характеристика и перечисление циркулирующих опухолевых клеток от немелкоклеточных больных раком легких по иммунофлуоресценции

Рукопись представляет на месте выборки опухолей головного мозга человека с твердой фазы микроэкстракции следуют их биохимического профилирования к открытию биомаркеров.

Выборка и удаление опухолей головного мозга для метаболомики и липидомического анализа

Биобанки являются важнейшими ресурсами для биомедицинских исследований, и Биобанк для трансляционной и цифровой медицины в Европейском институте онкологии является моделью в этой области. Здесь мы приводим подробное описание стандартных операционных процедур биобанков для управления различными типами биологических образцов человека.

Биобанк для трансляционной медицины: стандартные операционные процедуры для оптимального управления образцами

Жидкая биопсия произвела революцию в нашем подходе к трансляционным исследованиям онкологии, при этом сбор, качество и хранение образцов являются важнейшими шагами для ее успешного клинического применения. Здесь мы описываем стандартизированный и проверенный протокол для последующих приложений ДНК без циркуляции, который может быть применен в большинстве трансляционных исследовательских лабораторий.

Стандартизированный преаналитический протокол жидкой биопсии для последующих применений ДНК без циркуляции

Клинический микрофлюидный чип является важным методом биомедицинского анализа, который упрощает предварительную обработку образцов крови клинического пациента и иммунофлуоресцентно окрашивает циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) in situ на чипе, что позволяет быстро обнаруживать и идентифицировать один ЦОК.

Клиническая микрофлюидная чип-платформа для выделения универсальных циркулирующих опухолевых клеток

Этот протокол стандартизирует анализ SDS-PAGE для персонализированного профилирования белковых корон на наночастицах, обеспечивая воспроизводимое, масштабируемое и недорогое обнаружение специфических для рака сигнатур. Разработанный для ранней диагностики аденокарциномы протоков поджелудочной железы, он представляет собой практическую, согласованную с REASSURED альтернативу сложным протеомным методам как в научных, так и в клинических условиях.

Стандартизированный рабочий процесс SDS-PAGE для персонализированного профилирования белковой короны в раннем выявлении рака

Узнайте автоматизированный протокол выделения циркулирующих опухолевых клеток и циркулярной ДНК из цельной крови. Этот метод минимизирует загрязнение и обеспечивает высокую чистоту образцов для исследований рака.

Автоматическое отделение и сбор веществ, связанных с раком, из клинических образцов

Больше видео