Фаго-опосредованная генетическая манипуляция болезнью Лайма Spirochete Borrelia burgdorferi

Этот протокол важен, потому что он описывает еще один важный инструмент для препарирования молекулярной биологии агента болезни Лайма Borrelia burgdorferi. Основным преимуществом этой методики является то, что, используя фаговую трансдукцию, она обеспечивает альтернативный метод введения ДНК в Borrelia burgdorferi, не требуя применения электрического импульса, как при электропорации. Этот метод может быть использован для обеспечения дальнейшего понимания молекулярных механизмов, используемых Borrelia burgdorferi, чтобы сохраниться в своем энзоотическом цикле и в конечном итоге вызвать болезнь Лайма у людей.

Для начала инокулируют 150 микролитров соответствующего клона Borrelia burgdorferi в 15 миллилитров BSK в плотно закрытых стерильных конических центрифужных трубках для протокола трансдукции. Затем дополните среду соответствующей концентрацией антибиотиков или комбинацией антибиотиков для отбора и поддержания гетерологичной ДНК в клоне Borrelia burgdorferi и инкубируйте образец при 33 градусах Цельсия. После того, как культура вырастет, центрифугируют соответствующий объем культуры в 6000 г в течение 10 минут.