Generating and Imaging Mouse and Human Epithelial Organoids from Normal and Tumor Mammary Tissue Without Passaging

Serena L. Cornelius; Megan M. Colonnetta; Katherine E. Lake; Clayton A. Smith; Yu-An Zhang; Evanthia T. Roussos-Torres; Sangeetha M. Reddy; Elizabeth H. Chen; Isaac S. Chan

doi:10.3791/64626

Генерация и визуализация эпителиальных органоидов мыши и человека из нормальной и опухолевой ткан...

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

Generating and Imaging Mouse and Human Epithelial Organoids from Normal and Tumor Mammary Tissue Without Passaging

Генерация и визуализация эпителиальных органоидов мыши и человека из нормальной и опухолевой ткани молочной железы без пассажа

Full Text

3,438 Views

08:57 min

November 11, 2022

DOI: 10.3791/64626-v

Serena L. Cornelius^1,2, Megan M. Colonnetta^2,3,4,5, Katherine E. Lake^1,2, Clayton A. Smith^1,2, Yu-An Zhang^1,2, Evanthia T. Roussos-Torres⁶, Sangeetha M. Reddy^1,2, Elizabeth H. Chen^2,3,4,5, Isaac S. Chan^1,2,3,4

¹Department of Internal Medicine, Division of Hematology and Oncology,University of Texas Southwestern Medical Center, ²Harold C. Simmons Comprehensive Cancer Center,University of Texas Southwestern Medical Center, ³Department of Molecular Biology,University of Texas Southwestern Medical Center, ⁴Hamon Center for Regenerative Science and Medicine,University of Texas Southwestern Medical Center, ⁵Department of Cell Biology,University of Texas Southwestern Medical Center, ⁶Division of Medical Oncology, Norris Comprehensive Cancer Center, Keck School of Medicine,University of Southern California

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

В этом протоколе обсуждается подход к получению эпителиальных органоидов из первичной нормальной и опухолевой ткани молочной железы посредством дифференциального центрифугирования. Кроме того, включены инструкции по трехмерному культивированию, а также иммунофлуоресцентной визуализации встроенных органоидов.

Этот протокол важен для производства эпителиальных органоидов памяти, которые генерируются без пассажа. Основное преимущество этого метода заключается в том, что органоиды могут быть выделены из ткани молочной железы и памяти человека и мыши после ферментативного пищеварения. Мы выполняем серию этапов дифференциального центрифугирования, которые изолируют эпителиальные органоиды без необходимости прохождения клеток.

Человек, выполняющий эту технику, может столкнуться с проблемами при встраивании тканей в коллаген или матрикс и нанесении их на 96-луночную пластину. Кроме того, использование правильно полимеризованного коллагена и покрытие стабильных куполов является ключом к обнаружению вторжения. Для начала соберите ткань молочной железы усыпленной мыши, растопырив конечности мыши и используя четыре иглы 19 калибра, прикрепите мышь за лапы к доске, покрытой впитывающей прокладкой брюшной стороной вверх.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos