Хирургическое и поведенческое тестирование в модели транспозиции нериномы большеберцовой кости у крыс

Этот метод помогает найти лучшие методы лечения боли при невриноме. Преимущество этого метода заключается в том, что вы можете независимо измерять как боль при невриноме, так и при генерализованной боли в одной и той же модели повторения. Модель TNT особенно подходит для тестирования боли в невриноме, так как сама невринома может быть механически стимулирована монофиламентами фон Фрея.

Начните с того, что положите анестезированную крысу на спину головой влево или вправо. Поместите ногу, подлежащую операции, рядом с хирургом. Экзовращайте нижнюю заднюю конечность так, чтобы медиальная лодыжка была обращена вверх.

Перед тем, как поместить крысу под стереохирургический микроскоп с 6-кратным увеличением, продезинфицируйте бритый участок не менее чем тремя чередующимися раундами скраба на основе йода и спирта. Найдите колено и аккуратно сделайте продольный разрез в два-три сантиметра по медиальной стороне задней лапы от середины голени до лодыжки с помощью скальпеля. При необходимости вскройте кожу и подкожную клетчатку микроножницами, пока не станут видны мышечные слои.

Определите поверхностный сосудисто-нервный пучок как две-три белые, фиолетовые или красные линии, которые могут свободно перемещаться по мышечным слоям. Сохраняйте сосудисто-нервный пучок нетронутым. Рассеките заднюю часть от этого пучка.

Затем рассекают, чтобы открыть фасцию между икроножными мышцами. Между фасциями мышц можно найти более глубокий сосудисто-нервный пучок с большеберцовым нервом, который примерно в три раза больше поверхностного сосудисто-нервного пучка. Используйте большеберцовую кость в качестве дополнительного ориентира, так как большеберцовый нерв летит чуть позади большеберцовой кости.

Чтобы освободить большеберцовый нерв от окружающих сосудистых пучков, тупо переместите большеберцовый нерв и разрежьте обнаженную ткань, которая показывает некоторое растяжение при движении большеберцового нерва. После того, как весь большеберцовый нерв обнажен, поместите мышечные слои обратно, чтобы избежать обезвоживания нерва до рассечения преберцовой кожи от подкожной мышцы. Чтобы отделить пребербиальную кожу от подкожного мышечного слоя и сделать подкожный туннель, удерживайте кожу и проталкивайте тупой кончик в ткань, параллельную коже, с помощью тупого микрохирургического инструмента.

Убедитесь, что конец туннеля расположен претибиально или сбоку для легкого доступа к области для тестирования невриномы. После перерезания большеберцового нерва на дистальном конце около лодыжки измените увеличение микроскопа на 10-кратное или 16-кратное и определите эпиневрий большеберцового нерва проксимальнее разреза, сделанного возле лодыжки. Или, в случае более проксимального раздвоения большеберцового нерва, определите эпиневрий как медиальной, так и латеральной сеялчатых ветвей проксимальнее разреза, сделанного возле лодыжки.

Аккуратно поставьте 8-0 Нейлоновый шов через эпиневрий проксимального нервного конца проводят, удерживая эпиневрий пинцетом и помещая иглу между нервом и эпиневрием с прикусом примерно 0,5 миллиметра. Прикусите иглой подкожно в конце подкожного туннеля и натяните шов, чтобы транспонировать нерв латерально в подкожный туннель. Зафиксируйте шов, сделав узел.

Наложите более толстый шов 4-0 с темным цветом, промытый к фиксированному нервному концу, не проникая в кожу. Убедитесь, что шов виден снаружи кожи. Проверьте, остается ли нерв на месте после движения лапы и мышц.

Срежьте концы швов чуть более длинным концом шва на 4-0, затем на 8-0 шов. Измените увеличение микроскопа обратно на 6x и закройте кожу внутриэпидермальными швами, используя 8-0 шов. Аккуратно очистите кожу 0,9% хлоридом натрия с помощью ватного тампона.

Если в помещении холодно, подложите грелку под часть чистой клетки и поместите крысу в клетку под бумажное полотенце в удобном положении. Обеспечьте легкий доступ к пище и воде. Чтобы стимулировать стерильный нерв при гиперчувствительности, наложите мононить на боковую сторону близко к границе волоса, не касаясь подушечек стоп.

Чтобы стимулировать большеберцовый нерв при гипочувствительности, наложите мононить на середину плантаторной поверхности задней лапы. Для тестирования на место невриномы держите крыс носом, направленным к локтевому сгибу. Если крысу держат в правой руке, ее левая задняя лапа должна свободно висеть между большим и указательным пальцами правой руки.

Убедившись, что крыса спокойна и комфортна при удержании, на исходном уровне аккуратно поместите 15-граммовую мононить на претибиальную поверхность открытой задней лапы. После операции поместите 15-граммовую мононить на видимый шов и приложите к мононити достаточное усилие, чтобы согнуть волосы и удерживать их в течение одной секунды. Фон Фрей из сайта невриномы показал, что в начале исследования крысы реагировали на 10-15% применений 15-граммовой мононити.

Через неделю после операции по транспозиции невриномы большеберцовой кости частота ответов увеличилась с 45% до 50%На контралатеральной стороне ответы после операции были аналогичны исходному уровню. Примерно у 20% крыс не развилась болезненная невринома, и частота ответа не увеличилась по сравнению с исходным уровнем. В конце рассеченной и транспонированной культи большеберцового нерва через 12 недель после операции у всех крыс развилась невринома.

Пересечение большеберцового нерва снижает механическую чувствительность в середине плантаторной стороны задней лапы, иннервируемой большеберцовым нервом. Гипочувствительность, присутствующая через неделю после операции, значительно отличалась от контралатеральной стороны и исходного уровня через три недели после операции и сохранялась до 12 недель после операции. В латеральной части плантаторной стороны задней лапы, иннервируемой интактным икроножным нервом, у крыс развилась значительно отличающаяся механическая гиперчувствительность от контралатеральной стороны и исходного уровня через неделю после операции.

Он сохранялся в течение 12 недель после операции. В контралатеральной лапе механическая чувствительность не была затронута по сравнению с исходным уровнем в областях, иннервируемых икроножным или большеберцовым нервом. Не забудьте создать недлинную длину большеберцового нерва для диапазона движений для боковой транспозиции.

Также не забудьте пометить этот участок невриномы темным швом.