Индукция пародонтита с помощью комбинации лигатуры и инъекции липополисахарида на крысиной модели

Это модель экспериментального пародонтита на крысах, основанная на методах инъекций липополисахаридов в сочетании с размещением лигатуры, предлагающая эффективный метод изучения прогрессирования заболевания и оценки методов лечения пародонтита. Сочетание обоих методов с отдельными методами приводит к быстрой индукции заболевания, усилению деструктивной воспалительной реакции и увеличению потери соединительной ткани и резорбции альвеолярной кости. Этот метод дает ценную возможность оценить влияние лечения пародонтита.

Продемонстрирует процедуру доктор Оскар Вилла, доктор философии. Начните со стерилизации всех хирургических инструментов перед операцией. Приготовьте смесь кетамина и ксилазина, смешав 1,6 миллилитра кетамина с одним миллилитром ксилазина, разведенного в PBS или физиологическом растворе, и храните бульон при четырех градусах Цельсия.

Разбавьте атипамезол до конечной концентрации 0,25 миллиграмма на миллилитр и бупренорфин до конечной концентрации 0,03 миллиграмма на миллилитр в PBS или физиологическом растворе и храните запасы при четырех градусах Цельсия. Приготовьте один миллилитр PG-LPS в стерильном физиологическом растворе и храните запас при температуре минус 20 градусов по Цельсию. Для эксперимента используйте самок и самцов крыс Вистар.

Держите животных группами в соответствующей среде, с едой и стандартной водой, предлагаемой ad libitum. После того, как крыса будет обезболена, поместите животное на спину на подогретую хирургическую платформу. Накрывайте тело животного во время процедуры, чтобы предотвратить потерю тепла.

Вводите 100% кислород с помощью небольшого носового конуса и контролируйте частоту пульса и насыщение кислородом с помощью пульсоксиметрии. Теперь откройте рот крысы с помощью алюминиевого кляпа вокруг резцов. Втяните им язык и стабилизируйте верхнюю челюсть и нижнюю челюсть в открытом, удобном рабочем положении, обеспечивая доступ к нижнечелюстным молярам.

Соберите GCF, используя в общей сложности четыре абсорбирующих бумажных точка No 30, вставив их в десневую щель вокруг мезиопалатала M1 до небольшого сопротивления. Удерживайте точку бумаги в том же положении в течение 30 секунд перед немедленным извлечением. После сбора немедленно переложите бумажную точку в пластиковый флакон и храните при температуре минус 80 градусов Цельсия до проведения анализа.

Расположите дистальный хвост шва на небной стороне зубного ряда и вставьте проксимальный сегмент между контактом M1 и вторых верхнечелюстных моляров. Используйте периостальный микрохирургический элеватор, чтобы вставить шов в борозду. Оберните лигатуру вокруг щечной поверхности М1 очень осторожно, так как ткани на этом уровне представляют собой узкую зону прикрепленной десны.

Убедитесь, что шов затянут с обоих концов, чтобы вбить его в десневую борозду. Далее завяжите концы шва хирургическим узлом и обрежьте хвосты как можно короче. Вставьте узел в борозду.

После лигатурного позиционирования вводят 40 микролитров PG-LPS в стерильном физиологическом растворе в поддесневую ткань на мезиопалатальной стороне M1 с обеих сторон. Чтобы исследовать и отрегулировать лигатуру, поместите анестезированное животное на спину и используйте во время процедуры небольшой носовой конус с 1% изофлураном и 100% кислородом для поддержания анестезии животного. Откройте рот с помощью алюминиевого кляпа вокруг резцов, втягивая им язык и стабилизируя верхнюю челюсть и нижнюю челюсть в открытом, удобном рабочем положении, обеспечивая доступ к лигатурам.

Затяните лигатуры против десны с помощью периостального микрохирургического элеватора и убедитесь, что наложен шов лигатур, создавая воспаление вокруг десны. После коррекции лигатуры двусторонне вводят 40 микролитров PG-LPS в поддесневую ткань на мезиопалатальной стороне M1, как показано ранее. После принесения в жертву животного на 14-й день соберите ЗКФ, как показано ранее.

Немедленно переложите бумажную точку в пластиковый флакон и храните при температуре минус 80 градусов Цельсия до проведения анализа. Двумерные изображения альвеолярной кости верхнечелюстных моляров показывают больший объем кости в базальном контроле и более высокую потерю альвеолярной кости после установления пародонтита. Анализ сагиттальных изображений выявляет более значительную альвеолярную потерю костной ткани в межкорешковой костной области М1 и М2 после установления пародонтита по сравнению с базальной контрольной группой.

После жертвоприношения нёбо представляло различия в рецессии десен в M1 среди разных групп. В группе пародонтита наблюдается более заметная апикальная миграция десен и воспаление десны вокруг верхнечелюстных моляров по сравнению с базальной контрольной группой. Кроме того, группа пародонтита показала значительно более высокое высвобождение провоспалительного цитокина 1L-1 бета из ЗКФ, чем контрольная группа.

Важнейшими этапами процедуры являются правильное размещение шва и узла в борозде, правильная регулировка лигатуры и точная инъекция липополисахарида в течение 14-дневного протокола.