Массив серийной анестезии для высокопроизводительного исследования летучих агентов с использованием Drosophila melanogaster

SAA обеспечивает высокую пропускную обработку для исследования фармакологии летучих агентов в модельных организмах беспозвоночных, которые наделены сложным мозгом и обширным репертуаром поведения. В сочетании с генетическим инструментарием, доступным в Drosophila melanogaster, этот метод позволяет быстро и недорого изучать фармакогенетику летучих агентов. Многие люди подвергаются воздействию летучих агентов в качестве загрязнителей или терапевтических агентов.

Помимо анестезии, летучие анестетики обладают многочисленными токсическими и полезными побочными эффектами. Степень эффекта отчасти определяется генетикой, которая осталась в значительной степени неизученной. После изготовления деревянной рамы измените крышки 50-миллилитровых хронических трубок, просверлив по два отверстия в каждой крышке сверлом 9/32 дюйма.

Отшлифуйте отверстия, чтобы очистить рваный пластик. Также отшлифуйте верхнюю часть шляпки, чтобы придать поверхности шероховатость. Затем нарежьте пять миллилитровых серологических пипеток по размеру, надрезав пластик и разбив его на линии надрезов.

Отшлифуйте концы срезанных или сломанных пипеток. После этого приклейте сетку к трубкам и обрежьте сетку по размеру трубки, как только клей высохнет. Вставьте трубки в отверстия конических колпачков так, чтобы обе трубки выступали над колпачком.

Убедитесь, что впускная трубка проходит в трубку дольше, чем выпускная. Нанесите клей на верхнюю часть колпачков вокруг тюбиков, чтобы скрепить детали вместе и дать им высохнуть. Прикрепите клейкие кабельные стяжки к раме.

Прикрепите колпачки к раме с помощью стяжек и коротко обрежьте концы бирок для застежек-молний. Отрежьте и подсоедините длину трубки tygon к входным и выпускным трубкам на каждой модифицированной крышке. Начиная с верхнего конца, присоедините трубку сначала к притоку, затем от оттока к притоку последующего положения.

Затем добавьте индикатор расхода к самому последующему притоку. Поместите коническую трубку объемом 50 миллилитров в первое положение и отметьте отметку наполнения водой. Извлеките трубку.

Наполните его водой ниже приточной трубки и верните на место. Подготовьте сопряжение для испарителя. Снимите поршни, вырежьте насечки из двух 10-миллилитровых дозирующих шприцев и вставьте их во впуск и отток испарителя так, чтобы насечки были направлены прямо к передней части испарителя, чтобы выровнять отверстия.

Подключите всю систему. Используйте трубку tygon, чтобы прикрепить газгольдер-носитель к регулятору, расходомеру газа, испарителю и SAA. Заполните пустые позиции на массиве пустыми 50-миллилитровыми хроническими трубками.

Теперь включите бензобак. Откройте расходомер до двух литров в минуту и включите испаритель на 0%Проверьте расходомер через систему, проверив расходомер перед испарителем и индикатор расхода после последней камеры SAA на предмет расхода. В качестве альтернативы вставьте конец трубки, расположенной ниже по течению, в воду и ищите пузырьки.

За 24 часа или более до воздействия анестетика отсортируйте когорты мух по мере необходимости для эксперимента, используя предпочтительный метод. Переложите мух из пищевых флаконов в пустые конические трубки объемом 50 миллилитров. Подсчитайте и запишите всех мертвых мух до воздействия.

Снимите крышку и прикрутите 50-миллилитровые конические трубки с мухами к SAA. Включите газ-носитель и установите в нем желаемый расход. Установите испаритель анестетика на желаемую концентрацию и подвергайте мух воздействию в течение желаемого времени.

По окончании экспозиции промывайте систему потоком свежего газа со скоростью 1,5 литра в минуту в течение пяти минут, что соответствует примерно 10-кратному объему от общего объема SAA. Полностью откройте регулятор высокого давления, затем закройте его на пол-оборота, чтобы обеспечить поток газа-носителя. Проследите трубки для каждой линии к расходомерам и испарителю и проверьте уровень анестетика в испарителях.

Убедитесь, что при потоке газа он показывает расход на расходомере и на индикаторе расхода ниже по потоку. В конце эксперимента дайте четыре-пять минут воздушному потоку, чтобы вымыть анестетик. Семь линий, выделенных из одной популяции через встречи одной пары, показали различия в смертности, вызванной токсичностью изофтора, из-за эволюционного давления у мух ND23 60114.

Предварительное кондиционирование мух с 15 минутами 2%-ного изофтора до черепно-мозговой травмы снижало индекс смертности через 24 часа у белых 1118 и желто-белых штаммов. Индекс смертности через 24 часа не был значительно ниже в предварительно подготовленных линиях Oregon R и Canton S. Во время сборки насечки в модифицированных шприцах должны совпадать с отверстиями отверстий портов испарителя.

Во время воздействия периодически проверяйте, есть ли поток через систему. Эта процедура может быть использована для широкого спектра поведенческих исследований, исследований выживания и молекулярных исследований, которые могут привести к пониманию фармакологии летучих агентов.