Выделение и идентификация мезенхимальных стволовых клеток, полученных из жировой ткани крыс породы Sprague Dawley
7 апреля 2023 г.
В этом протоколе описывается методология выделения и идентификации мезенхимальных стволовых клеток (МСК), полученных из жировой ткани, от крыс Sprague Dawley.
Мезенхимальные стволовые клетки играют очень широкую роль в клеточной коммуникации благодаря своей паракринной функции. Этот протокол позволяет получить мезенхимальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани, с морфологической, иммунофенотипической и адекватной функциональностью для использования при изучении методов лечения регенерации поджелудочной железы и диабета. В настоящее время наблюдается более широкое использование клеточной терапии при лечении диабета.
Эти методы лечения включают аллогенную трансплантацию клеток поджелудочной железы, аутологичные продукты, полученные из стволовых клеток инсулин-продуцирующих клеток, и 3D-печатную ткань поджелудочной железы с использованием биологических чернил. В большинстве исследований в основном изучались компоненты секретома и их роль в регуляции различных клеточных процессов. Новые методы, такие как микрочипы и секвенирование следующего поколения, могут исследовать функцию микроРНК.
Задача в этой области состоит в том, чтобы добиться большей стимуляции мезенхимальных клеток, достигнув точного молекулярного состава в секретоме и направив его на лечение конкретных состояний. Мы будем оценивать, как микроРНК способствуют дегенерации ткани поджелудочной железы, подверженной окислительному стрессу. Исследование будет включать использование стволовых клеток из жировой ткани.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной работе представлен протокол выделения и характеристики мезенхимальных стволовых клеток (МСК), полученных из жировой ткани крыс линии Sprague Dawley. Эти МСК обладают значительным потенциалом для применения в терапии, направленной на регенерацию поджелудочной железы и лечение сахарного диабета.
Основные компоненты исследования
Область исследований
- Мезенхимальные стволовые клетки
- Клеточная терапия диабета
- Регенерация тканей поджелудочной железы
Теоретические сведения
- Роль МСК в межклеточной коммуникации
- Паракринные функции стволовых клеток
- Современные проблемы клеточной терапии диабета
Используемые методы
- Выделение и идентификация мезенхимальных стволовых клеток, полученных из жировой ткани
- Использование крыс линии Sprague Dawley
- Функциональная оценка стволовых клеток
Основные результаты
- Успешное выделение МСК с ожидаемыми морфологическими и иммунофенотипическими характеристиками
- Использование стволовых клеток для оценки терапии при сахарном диабете
- Вклад микроРНК в дегенерацию тканей поджелудочной железы
Выводы
- Исследование подтверждает потенциал МСК из жировой ткани в клеточной терапии заболеваний поджелудочной железы.
- Данная работа расширяет понимание стратегий лечения диабета с использованием стволовых клеток.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Стандартизированное выделение и характеристика мезенхимальных стволовых клеток (МСК), полученных из жировой ткани крыс линии Sprague Dawley, обеспечивают создание надежных доклинических моделей для регенеративной медицины и исследований диабета. Надежный доступ к высокопродуктивным, функционально валидированным МСК способствует снижению рисков при изучении механизмов и валидации мишеней в рамках разработки клеточной терапии. Данная возможность укрепляет трансляционную непрерывность и прогностическую достоверность на ранних стадиях разработки терапевтических методов.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранние этапы поиска и валидация мишени
- Позволяет исследовать паракринную сигнализацию, опосредованную МСК, и модуляцию путей в моделях заболеваний.
- Способствует снижению биологических рисков за счет обеспечения воспроизводимых, фенотипически определенных популяций клеток.
- Облегчает функциональную валидацию мишеней для регенеративных и иммуномодулирующих механизмов.
Скрининг и разработка анализа
- Обеспечивает получение валидированных культур МСК для последующих функциональных анализов и анализа секретома.
- Гарантирует воспроизводимость анализа за счет стандартизированного выделения клеток и характеризации на основе маркеров.
- Позволяет проводить количественную оценку дифференцировки и иммунофенотипических показателей.
Трансляционные и доклинические исследования
- Приводит доклинические модели в соответствие с релевантными системами заболеваний для исследований диабета и регенерации тканей.
- Обеспечивает оценку эффектов, опосредованных miRNA, в тканях поджелудочной железы в условиях окислительного стресса.
- Обосновывает решения о продвижении разработок с учетом рисков путем установления связи между результатами in vitro и трансляционными конечными точками.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный протокол выделения МСК интегрируется в начальный этап континуума от поиска до доклинических исследований, обеспечивая поддержку как механистических исследований, так и трансляционных исследований в области регенеративной медицины.
- Открывающая биология: обеспечивает проверку гипотез о паракринных эффектах MSC и составе секретома.
- Скрининг: предоставляет воспроизводимые, валидированные по маркерам клеточные системы для функциональных тестов и анализов дифференцировки.
- Аналитика: поддерживает количественное считывание данных с помощью проточной цитометрии, иммунофлуоресценции и окрашивания липидов.
- Трансляционные исследования: связывают функции MSC in vitro с доклиническими моделями регенерации поджелудочной железы и диабета.
- Корпоративное повторное использование: создает многократно используемую платформу для исследований на основе MSC в различных терапевтических областях.
Операционное и корпоративное влияние
- Научная ценность: повышает точность прогнозирования и снижает неопределенность механизмов в исследованиях клеточной терапии.
- Операционная ценность: обеспечивает стандартизированные, масштабируемые и воспроизводимые рабочие процессы по выделению и характеристике МСК.
- Стратегическая ценность: улучшает процесс принятия решений о продолжении или прекращении разработок (go/no-go), а также распределение капитала за счет обеспечения надежной валидации на ранних этапах.
- Влияние на портфель: поддерживает приоритизацию программ в области регенеративной медицины и лечения диабета с учетом рисков.
Рекомендации по внедрению
- Требуется опыт в области изоляции клеток, проточной цитометрии и методов иммунофлуоресценции.
- Необходим доступ к аналитической инфраструктуре для валидации маркеров и проведения анализов на дифференцировку.
- Требуется стандартизация между исследовательскими группами для обеспечения воспроизводимости и сопоставимости данных.
- Метод может быть адаптирован для различных источников жировой ткани и моделей грызунов, предусмотренных протоколом.
- Ограничения включают видоспецифические различия и возможность масштабирования на системы человека.
Часто задаваемые вопросы по биофармацевтике
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:57
Murine Adipose Tissue Excision
2:36
Murine Adipose‐Derived Mesenchymal Cell Isolation, Maintenance, and Characterization
5:39
Immunofluorescent Detection of Adipose‐Derived Stem Cell Expression Markers
7:09
Flow Cytometric Detection of Adipose‐Derived Stem Cell Expression Markers
9:28
Adipose‐Derived Stem Cell Differentiation to the Adipogenic Lineage
