Мультиплексная иммунофлюоресценция в сочетании с анализом пространственных изображений для клинико-биологической оценки микроокружения опухоли

В данной статье описан протокол ручного усиления тирамидного сигнала (TSA) мультиплексной иммунофлуоресценции (mIF) в сочетании с анализом изображений и пространственным анализом. Этот протокол может быть использован с фиксированными формалином парафиновыми срезами (FFPE) для окрашивания от двух до шести антигенов на предметное стекло в зависимости от сканера предметного стекла, доступного в лаборатории.

В нашей лаборатории мы изучаем колоректальный рак человека. Его прогрессирование до метастатического заболевания и его реакция на лечение, включая иммунотерапию. Мы пытаемся найти новые прогностические и прогностические биомаркеры, исследуя иммунное микроокружение опухоли и внутриопухолевый микробиом при первичном и метастатическом заболевании.

В нашем проекте в настоящее время мы внедряем несколько технологий, таких как секвенирование РНК, секвенирование всего экзома, секвенирование TCR, анализ циркулирующей бесклеточной ДНК, иммунофлуоресценция и гибридизация института флуоресценции. На данный момент наша основная задача состоит в том, чтобы объединить гибридизационное окрашивание института флуоресценции с мультиплексной иммунофлуоресценцией амплификации сигнала тирамида для изучения взаимодействия между микробиомом и иммунными клетками. Наш метод надежен, воспроизводим, прост в использовании и экономичен.

Он может быть установлен в любой лаборатории, имеющей сканер флуоресцентного света, плюс метод может быть использован с любым коммерчески доступным антителом IHC в отличие от коммерчески доступных наборов, которые обычно оптимизированы для ограниченной панели антигенов.