Иммунофлуоресцентная визуализация внеклеточных ловушек нейтрофилов в тканях человека и мыши
August 18th, 2023
Нейтрофильные внеклеточные ловушки (НВЛ) связаны с различными заболеваниями, и для их визуализации часто используется иммунофлуоресценция. Тем не менее, существуют различные протоколы окрашивания, и во многих случаях исследуется только один тип ткани. Здесь мы устанавливаем общеприменимый протокол для окрашивания НВЛ в тканях мышей и человека.
Среди селекции антител для визуализации тканей сложность заключается в том, что процесс фиксации представляет собой проблему маскировки эпитопов. Таким образом, требуется индивидуальный шаг ретривера, чтобы подвергнуть эти антигены связыванию антител. Кроме того, присущая тканям автофлуоресценция может вызвать трудности вплоть до окрашивания на высоком фоне.
Однако использование различных подходов в протоколах в литературе препятствует стандартизированному сравнению изображений. Наше исследование направлено на удовлетворение спроса на стандартизированные процедуры и помощь исследователю в преодолении трудностей в процессе визуализации. Мы разработали универсальный протокол визуализации, применимый к различным тканям, путем сравнения различных протоколов.
Таким образом, наша работа предоставляет рекомендации и советы по устранению неполадок от использования антител до монтажа образца, подчеркивая потенциальные подводные камни. Наши результаты продвигают исследования, вводя новое первичное антитело к цитруллинированному гизону три, а также автофлуоресцентный восстановитель для минимизации фонового окрашивания. Кроме того, для успешной визуализации мы подчеркиваем осторожность при обращении с образцами и важность поддержания постоянной высокой температуры для извлечения антигена.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
Это исследование посвящено вопросам визуализации внеклеточных ловушек нейтрофилов (ВЛН) в различных тканях. Создавая стандартизированный протокол визуализации, исследование направлено на улучшение согласованности и надежности визуализации ВЛН как в тканях мышей, так и в тканях человека.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Иммунология
- Клеточная биология
- Визуализация тканей
Предыстория
- Внеклеточные ловушки нейтрофилов (ВЛН) задействованы в различных заболеваниях.
- Для визуализации ВЛН обычно используется иммунофлюоресценция.
- Существующие протоколы различаются и часто сосредоточены на одном типе ткани.
- К проблемам относятся маскировка эпитопов и аутофлуоресценция в тканях.
Цель исследования
- Создать универсальный протокол визуализации ВЛН.
- Стандартизировать процедуры для различных типов тканей.
- Помочь исследователям преодолеть трудности с визуализацией.
Используемые методы
- Сравнение различных протоколов окрашивания для визуализации ВЛН.
- Настройка шагов ретривера для обнажения антигенов для связывания антител.
- Решение проблемы аутофлуоресценции тканей для уменьшения фонового окрашивания.
- Применение установленного протокола к тканям мышей и человека.
Основные результаты
- Был разработан стандартизированный протокол окрашивания ВЛН.
- Улучшена визуализация ВЛН в различных типах тканей.
- Повышена надежность результатов визуализации для исследователей.
- Упрощено сравнение изображений ВЛН из различных исследований.
Выводы
- Установленный протокол решает ключевые проблемы визуализации ВЛН.
- Стандартизация может привести к лучшей воспроизводимости в исследованиях.
- Будущие исследования могут опираться на этот протокол для дальнейших исследований.
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
Standardized immunofluorescence imaging of neutrophil extracellular traps (NETs) addresses a critical need for reproducible target validation in inflammation and immune-mediated disease research. By enabling consistent visualization across human and mouse tissues, this protocol supports predictive confidence at the discovery and translational interface. Reliable NET detection informs mechanistic de-risking and portfolio triage for therapeutic programs targeting innate immunity and inflammatory pathways.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables robust interrogation of NET-associated pathways in disease-relevant tissues.
- Supports biological de-risking by clarifying NET involvement in pathogenesis.
- Facilitates functional target validation for NET-modulating therapeutics.
- Improves predictive confidence for advancing immune-targeted assets.
Screening & Assay Development
- Prepares validated tissue systems for downstream compound screening.
- Standardizes assay conditions to ensure reproducibility and quantitative imaging outputs.
- Enables reliable comparison of NET formation across experimental conditions.
- Supports scalability and platform reuse for high-content screening initiatives.
Translational & Preclinical Research
- Aligns NET detection with disease-relevant tissue models for translational continuity.
- Enables risk-adjusted advancement decisions based on mechanistic NET involvement.
- Supports biomarker development for NET-driven pathologies when justified by data.
- Provides continuity from discovery through preclinical validation in immune and inflammatory disease pipelines.
Pipeline & Workflow Integration
This immunofluorescence protocol integrates from early discovery through preclinical research, supporting hypothesis testing, assay development, and translational validation in immune and inflammatory disease programs.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification for NET-mediated mechanisms.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative imaging outputs for assay readiness.
- Analytics: Provides semi-quantitative readouts to compare NET formation across tissues and conditions.
- Translational Research: Bridges discovery findings to preclinical models with disease-relevant tissue imaging.
- Enterprise Reuse: Offers a standardized, adaptable protocol for cross-program and cross-species application.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in NET research.
- Operational Value: Enhances standardization, reproducibility, and scalability of tissue imaging workflows.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by reducing late-stage biological risk.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of immune and inflammation-focused assets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in immunofluorescence and tissue handling.
- Needs access to widefield fluorescence microscopy and validated antibody panels.
- Demands cross-team standardization of staining and imaging protocols.
- Adaptable to multiple tissue types and species with protocol optimization.
- Careful temperature control and sample handling are critical for reproducibility.
