Оценка влияния новой процессорной системы охлаждающей ячейки на изоляцию островковых клеток
August 11th, 2023
Протокол здесь описывает пользовательскую систему процессора охлаждающей ячейки, совместимую с чистой комнатой надлежащей производственной практики (GMP) для улучшения жизнеспособности ячейки после обработки.
Здравствуйте, я доктор Джихад, директор лаборатории Центра. Сегодняшняя цель этого видео — показать адаптированный охлаждаемый процессор ячеек, используемый в изоляторе для глазков, без воздействия на окружающую среду, а также при восстановлении клеток. Начните с предварительного охлаждения легкого и сильного градиентов плотности и комплекта процессора ячейки при четырех градусах Цельсия.
Далее подготовьте процессор ячейки путем предварительного охлаждения в течение 45 минут. Вставьте комплект процессора для предварительного охлаждения ячеек в процессор для стандартного градиентного генератора с двойным охлаждением этанолом. Соедините две стеклянные камеры и поместите их на магнитную мешалку. Зажмите трубку между двумя камерами. Классно.
Градиентный генератор с циркуляционным охладителем этанола при нулевом градусе Цельсия после охлаждения. Установите скорость насоса на 150 миллилитров в минуту, чтобы заполнить камеру 130 миллилитрами градиента большой плотности на дне мешка. Как только тяжелый градиент окажется в пакете, закройте гемостат между двумя камерами.
Затем добавьте 130 миллилитров высокой плотности в передний стакан и 140 миллилитров градиентов низкой плотности в задний стакан.Декабрь. Зажмите гемостат между двумя камерами, затем установите скорость насоса 50 миллилитров в минуту, чтобы создать непрерывный градиент между двумя камерами. Затем подготовьте человеческие мононуклеарные клетки оболочки баффи для очистки из нескольких объединенных анонимных оболочек баффи, собранных из продуктов жизнедеятельности цельной крови, предоставленных банком крови.
После разделения добавьте пять миллилитров удельного веса, напоминающего суспензию мононуклеарных элементов низкой плотности, в 95 миллилитров градиентной среды высокой плотности в мешок для переноса с помощью перистальтического насоса, установленного на 25 миллилитров в минуту. Сверху загрузите предварительно сформированный градиент 30 миллилитрами суспензии мононуклеарных элементов с помощью предварительно откалиброванного термозонда. Беспрерывно. Измерьте температуру внутри процессора ячейки с помощью цифровой термопары, подключенной к стерильному термозонду.
Следите за температурой градиентов и ячеек во время процесса. В конце градиентной нагрузки установите процессор ячейки на 537 G, чтобы свести к минимуму тепло, выделяемое ротором. Выключите процессор ячеек, чтобы гидравлическая система вернулась к предварительному уровню и выпустила воздух.
Затем перезагрузите процессор ячейки на 537 G и добавьте 130 миллилитров тяжелых и 140 миллилитров градиентов низкой плотности, чтобы создать непрерывный градиент плотности со скоростью потока 50 миллилитров в минуту и 4,3 градуса по Цельсию. Затем загрузите 30 миллилитров суспензии Buffy coat cell поверх градиента плотности нагрузки со скоростью потока 25 миллилитров в минуту и шести градусов Цельсия. После загрузки ячейки через пять минут добавьте в процессор ячейки 50 миллилитров моющего раствора.
Соберите градиент вращения в 12 бутылок со скоростью потока 100 миллилитров в минуту и пять градусов Цельсия заполните пробирку, в одной из которых 100 миллилитров промывочного материала и 150 миллилитров ячеек. Затем заполните пробирки со второго по 12 225 миллилитров промывочного материала и 25 миллилитров ячеек. Оценка взвешенных в воздухе частиц в чистых помещениях, класс C и класс B, показала, что не было превышения частиц в воздухе от 0,5 до пяти микрон в соответствии с тремя стандартами чистых помещений, GMP класса C, класса B и BSL.
Существенной разницы в температурах градиента не наблюдалось в течение первых четырех этапов, при этом оба процессора поддерживали температуру около 4,5 градусов Цельсия. Однако после центрифугирования и на этапах сбора температура повышалась в начале и в конце этапов сбора для обоих процессоров. Кроме того, охлажденные клеточные процессоры влияют на очистку клеток человека.
Эффективность и жизнеспособность определяли после центрифугирования. Температура собранных клеток немного поднялась до 8,5 градусов по Цельсию. Активный отбор проб воздуха и скрининг на стерильность не показали роста.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
Это исследование фокусируется на системе охлажденного клеточного процессора, разработанной для использования в чистых помещениях GMP для повышения жизнеспособности клеток после обработки. Метод описывает шаги по подготовке и использованию процессора, который улучшает восстановление очищенных человеческих мононуklearных клеток из отходов крови.
Ключевые компоненты исследования
Область исследования
- Жизнеспособность клеток
- Протоколы чистых помещений
- Обработка человеческих клеток
Предпосылки
- Важность поддержания низких температур при обработке клеток
- Проблемы восстановления жизнеспособных клеток после обработки
- Соответствие стандартам GMP в условиях обработки клеток
Используемые методы
- Градиентная плотностная центрифугация
- Человеческие мононуklearные буфферные клетки
- Мониторинг температуры с помощью цифрового термопара
Основные результаты
- Демонстрирует эффективное восстановление клеток без значительного повышения температуры
- Поддерживает стерильные условия без превышения частиц в воздухе
- Обеспечивает жизнеспособность и чистоту обработанных человеческих клеток после центрифугирования
Выводы
- Протокол эффективно улучшает жизнеспособность клеток человека и результаты обработки
- Эта система способствует прогрессу в методологиях обработки клеток, актуальных для клинических применений
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
Maintaining optimal temperature control during cell processing is critical for preserving cell viability and function in cell therapy manufacturing. The introduction of a cooled cell processor system directly addresses the risk of thermal stress during centrifugation, supporting higher recovery and viability of therapeutic cell populations. This capability strengthens the reliability of cell isolation workflows and aligns with GMP cleanroom requirements for advanced therapy production.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables robust assessment of cell viability and function post-processing for downstream biological studies.
- Reduces confounding thermal effects, supporting clearer interpretation of cell-based assays.
- Improves confidence in the biological relevance of isolated cell populations for target validation.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of high-viability cell samples for assay development and screening platforms.
- Supports reproducible and standardized cell isolation, minimizing batch-to-batch variability.
- Ensures quantitative recovery metrics for reliable compound evaluation in cell-based assays.
Translational & Preclinical Research
- Aligns cell processing conditions with clinical manufacturing standards, supporting translational continuity.
- Enables risk-adjusted advancement of cell therapy candidates by preserving functional cell attributes.
- Provides a platform for validating process changes without compromising GMP cleanroom compliance.
Pipeline & Workflow Integration
This cooled cell processor system integrates into the cell therapy pipeline from early cell isolation through preclinical and translational research, supporting both discovery and manufacturing environments.
- Discovery Biology: Enhances hypothesis testing by ensuring cell integrity during isolation.
- Screening: Delivers reproducible, high-viability cell preparations for assay readiness.
- Analytics: Provides quantitative temperature and viability readouts for process monitoring.
- Translational Research: Maintains GMP-aligned conditions for preclinical and clinical cell therapy workflows.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, minimally invasive cooling solution adaptable across cell processing platforms.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in cell-based assays and reduces mechanistic ambiguity from thermal artifacts.
- Operational Value: Standardizes temperature control, supporting reproducibility and scalability in cell processing.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions by ensuring high-quality cell products for downstream applications.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of cell therapy candidates by improving process reliability.
Implementation Considerations
- Requires expertise in cell processing and cleanroom operations.
- Needs integration with temperature monitoring and digital thermocouple instrumentation.
- Demands adherence to GMP cleanroom standards for sterility and particulate control.
- Adaptable to various cell types and density gradient protocols with minimal modification.
- Limited by the availability of donor material for validation in certain regions.
