Оценка влияния новой процессорной системы охлаждающей ячейки на изоляцию островковых клеток
11 августа 2023 г.
Протокол здесь описывает пользовательскую систему процессора охлаждающей ячейки, совместимую с чистой комнатой надлежащей производственной практики (GMP) для улучшения жизнеспособности ячейки после обработки.
Здравствуйте, я доктор Джихад, директор лаборатории Центра. Сегодняшняя цель этого видео — показать адаптированный охлаждаемый процессор ячеек, используемый в изоляторе для глазков, без воздействия на окружающую среду, а также при восстановлении клеток. Начните с предварительного охлаждения легкого и сильного градиентов плотности и комплекта процессора ячейки при четырех градусах Цельсия.
Далее подготовьте процессор ячейки путем предварительного охлаждения в течение 45 минут. Вставьте комплект процессора для предварительного охлаждения ячеек в процессор для стандартного градиентного генератора с двойным охлаждением этанолом. Соедините две стеклянные камеры и поместите их на магнитную мешалку. Зажмите трубку между двумя камерами. Классно.
Градиентный генератор с циркуляционным охладителем этанола при нулевом градусе Цельсия после охлаждения. Установите скорость насоса на 150 миллилитров в минуту, чтобы заполнить камеру 130 миллилитрами градиента большой плотности на дне мешка. Как только тяжелый градиент окажется в пакете, закройте гемостат между двумя камерами.
Затем добавьте 130 миллилитров высокой плотности в передний стакан и 140 миллилитров градиентов низкой плотности в задний стакан.Декабрь. Зажмите гемостат между двумя камерами, затем установите скорость насоса 50 миллилитров в минуту, чтобы создать непрерывный градиент между двумя камерами. Затем подготовьте человеческие мононуклеарные клетки оболочки баффи для очистки из нескольких объединенных анонимных оболочек баффи, собранных из продуктов жизнедеятельности цельной крови, предоставленных банком крови.
После разделения добавьте пять миллилитров удельного веса, напоминающего суспензию мононуклеарных элементов низкой плотности, в 95 миллилитров градиентной среды высокой плотности в мешок для переноса с помощью перистальтического насоса, установленного на 25 миллилитров в минуту. Сверху загрузите предварительно сформированный градиент 30 миллилитрами суспензии мононуклеарных элементов с помощью предварительно откалиброванного термозонда. Беспрерывно. Измерьте температуру внутри процессора ячейки с помощью цифровой термопары, подключенной к стерильному термозонду.
Следите за температурой градиентов и ячеек во время процесса. В конце градиентной нагрузки установите процессор ячейки на 537 G, чтобы свести к минимуму тепло, выделяемое ротором. Выключите процессор ячеек, чтобы гидравлическая система вернулась к предварительному уровню и выпустила воздух.
Затем перезагрузите процессор ячейки на 537 G и добавьте 130 миллилитров тяжелых и 140 миллилитров градиентов низкой плотности, чтобы создать непрерывный градиент плотности со скоростью потока 50 миллилитров в минуту и 4,3 градуса по Цельсию. Затем загрузите 30 миллилитров суспензии Buffy coat cell поверх градиента плотности нагрузки со скоростью потока 25 миллилитров в минуту и шести градусов Цельсия. После загрузки ячейки через пять минут добавьте в процессор ячейки 50 миллилитров моющего раствора.
Соберите градиент вращения в 12 бутылок со скоростью потока 100 миллилитров в минуту и пять градусов Цельсия заполните пробирку, в одной из которых 100 миллилитров промывочного материала и 150 миллилитров ячеек. Затем заполните пробирки со второго по 12 225 миллилитров промывочного материала и 25 миллилитров ячеек. Оценка взвешенных в воздухе частиц в чистых помещениях, класс C и класс B, показала, что не было превышения частиц в воздухе от 0,5 до пяти микрон в соответствии с тремя стандартами чистых помещений, GMP класса C, класса B и BSL.
Существенной разницы в температурах градиента не наблюдалось в течение первых четырех этапов, при этом оба процессора поддерживали температуру около 4,5 градусов Цельсия. Однако после центрифугирования и на этапах сбора температура повышалась в начале и в конце этапов сбора для обоих процессоров. Кроме того, охлажденные клеточные процессоры влияют на очистку клеток человека.
Эффективность и жизнеспособность определяли после центрифугирования. Температура собранных клеток немного поднялась до 8,5 градусов по Цельсию. Активный отбор проб воздуха и скрининг на стерильность не показали роста.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
Данное исследование посвящено специализированной системе с охлаждаемым процессором для клеток, разработанной для использования в чистых помещениях стандарта GMP с целью повышения жизнеспособности клеток после обработки. В методе описаны этапы подготовки и использования процессора, который позволяет улучшить выход очищенных мононуклеарных клеток человека из отходов крови.
Основные компоненты исследования
Область исследования
- Жизнеспособность клеток
- Протоколы работы в чистых помещениях
- Обработка человеческих клеток
Обзор
- Важность поддержания низких температур при обработке клеток
- Трудности при восстановлении жизнеспособных клеток после обработки
- Соблюдение стандартов GMP в условиях обработки клеток
Используемые методы
- Центрифугирование в градиенте плотности
- Мононуклеарные клетки лейкоцитарного слоя человека
- Мониторинг температуры с помощью цифровой термопары
Основные результаты
- Продемонстрировано эффективное восстановление клеток без значительного повышения температуры
- Поддерживались стерильные условия без превышения содержания твердых частиц в воздухе
- Обеспечены жизнеспособность и чистота обработанных клеток человека после центрифугирования
Выводы
- Данный протокол эффективно повышает жизнеспособность клеток человека и улучшает результаты обработки
- Эта система способствует совершенствованию методик обработки клеток, применимых в клинической практике
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для промышленности
Поддержание оптимального температурного контроля во время обработки клеток имеет решающее значение для сохранения их жизнеспособности и функций при производстве клеточной терапии. Внедрение системы охлаждаемого процессора для обработки клеток напрямую устраняет риск термического стресса при центрифугировании, что способствует более высокому выходу и жизнеспособности популяций терапевтических клеток. Данная возможность повышает надежность рабочих процессов изоляции клеток и соответствует требованиям GMP к чистым помещениям для производства передовых методов терапии.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичный поиск и валидация мишени
- Обеспечивает надежную оценку жизнеспособности и функции клеток после обработки для последующих биологических исследований.
- Снижает влияние побочных термических эффектов, что способствует более четкой интерпретации анализов на основе клеточных культур.
- Повышает уверенность в биологической релевантности изолированных популяций клеток для валидации мишеней.
Скрининг и разработка анализа
- Облегчает подготовку образцов клеток с высокой жизнеспособностью для разработки анализа и платформ скрининга.
- Обеспечивает воспроизводимую и стандартизированную изоляцию клеток, сводя к минимуму вариабельность между партиями.
- Обеспечивает количественные показатели выхода для надежной оценки соединений в клеточных анализах.
Трансляционные и доклинические исследования
- Приводит условия обработки клеток в соответствие со стандартами клинического производства, обеспечивая трансляционную непрерывность.
- Позволяет осуществлять риск-ориентированное продвижение кандидатов для клеточной терапии за счет сохранения функциональных характеристик клеток.
- Предоставляет платформу для валидации изменений в процессе без нарушения требований соответствия чистых помещений GMP.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Эта система охлаждаемого процессора клеток интегрируется в технологический процесс клеточной терапии — от начального выделения клеток до доклинических и трансляционных исследований, поддерживая работу как в исследовательских, так и в производственных условиях.
- Открывательная биология: улучшает проверку гипотез, обеспечивая целостность клеток в процессе изоляции.
- Скрининг: обеспечивает получение воспроизводимых препаратов клеток с высокой жизнеспособностью для проведения анализов.
- Аналитика: предоставляет количественные данные о температуре и жизнеспособности для мониторинга процесса.
- Трансляционные исследования: поддерживает условия, соответствующие стандартам GMP, для доклинических и клинических рабочих процессов клеточной терапии.
- Корпоративное повторное использование: предлагает масштабируемое, минимально инвазивное решение по охлаждению, адаптируемое для различных платформ обработки клеток.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает достоверность прогнозов в анализах на клеточных моделях и снижает неопределенность механизмов, вызванную термическими артефактами.
- Операционная ценность: стандартизирует контроль температуры, обеспечивая воспроизводимость и масштабируемость процессов обработки клеток.
- Стратегическая ценность: способствует принятию более обоснованных решений о продолжении или прекращении разработки (go/no-go) за счет обеспечения высокого качества клеточных продуктов для последующего применения.
- Влияние на портфель: поддерживает приоритезацию кандидатов для клеточной терапии с учетом рисков за счет повышения надежности технологического процесса.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы с клеточными культурами и выполнение операций в чистых помещениях.
- Необходима интеграция с системами мониторинга температуры и цифровым оборудованием на базе термопар.
- Требуется соблюдение стандартов GMP для чистых помещений в части обеспечения стерильности и контроля содержания твердых частиц.
- Метод адаптируемы к различным типам клеток и протоколам градиентного центрифугирования при минимальной модификации.
- Ограничено доступностью донорского материала для валидации в некоторых регионах.
