Генерация подоцитов, полученных от пациента, из биопсии кожи

В этой рукописи описывается двухэтапный протокол для получения специфических для пациента подоцитов из дермальных фибробластов посредством эписомального перепрограммирования в индуцированные человеком плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) и последующей дифференцировки в подоциты.

Мы описываем протокол генерации подоцитов человека путем эписомального перепрограммирования дермальных фибробластов в индуцированные человеком плюрипотентные стволовые клетки. Эти клетки гораздо лучше напоминают подоциты in vivo, чем иммортализированные подоциты, с точки зрения процессов питания подоцитов и экспрессии специфического маркера подоцитов. Подоциты являются терминально дифференцированными клетками.

Следовательно, эти клетки больше не размножаются, и первичный анализ подоцитов в культуре клеток ограничен. Несмотря на то, что проблема ограниченного количества клеток была преодолена с помощью условно иммортализированных подоцитов, эти подоциты представляют собой дедифференцированный фенотип и поведение, что ставит под сомнение их использование в фундаментальных исследованиях. С помощью индуцированных плюрипотентных стволовых клеток подоциты могут быть получены in vitro в почти неограниченном количестве клеток с типичной морфологией подоцитов, включая различные пищевые процессы и экспрессию специфического маркера подоцитов.

При использовании специфических для пациента стволовых клеток для дифференцировки в подоциты можно изучить специфические для заболевания изменения клетки ex vivo. В этом случае первичная биопсия кожи была взята у пациента с генетическим заболеванием подоцитов. Подоциты, сгенерированные с помощью нашего протокола, представляют собой персонализированные больные клетки, несущие мутацию пациента.

Таким образом, эти клетки представляют собой улучшенную модель ex vivo для изучения заболеваний подоцитов и потенциальных терапевтических веществ в индивидуальном подходе.