Методы подтверждения электропорации и трансформации Limosilactobacillus reuteri DSM20016
June 23rd, 2023
Здесь мы представляем протоколы работы с DSM20016 Limosilactobacillus reuteri , подробно описывающие рост, трансформацию плазмиды, ПЦР колоний, измерение флуоресцентного репортерного белка и ограниченную мини-подготовку плазмиды, а также распространенные проблемы и устранение неполадок. Эти протоколы позволяют измерять репортерные белки в DSM20016 или подтверждать с помощью колонии ПЦР, если репортер не участвует.
L.Reuteri, и, в частности, штамм, DSM20016 является надежным, естественным комменсалом кишечника человека, с большими перспективами для терапевтической доставки и выявления заболеваний во всем желудочно-кишечном тракте. Эта работа поможет позиционировать DSM20016 как шасси синтетической биологии для такого рода приложений. Лактобациллы не имеют специфического модельного организма.
Предпочтительные виды существуют, но они обычно выбираются с уклоном в сторону конкретных исследовательских целей. Вариации в семействе бактерий привели к фрагментированным протоколам, некоторые из которых с итерациями модификаций, восходящими к публикациям. Начинающим людям очень сложно точно отфильтровать, что полезно, а что нет.
Один документ о преобразовании DSM20016 действительно существует, но он не современный. Современные протоколы для других членов семейства Lactobacillales существуют, но они не являются DSM20016. Здесь мы стремимся предоставить простой в использовании, централизованный, модернизированный, полный набор протоколов для DSM20016 электропорации.
Этот набор протоколов предлагает существенную модернизацию по сравнению с предыдущим протоколом разведки DSM20016 и разъясняет некоторые висячие нити, а также подчеркивает части, которые ранее были менее ясными. Набор протоколов также является полным, и специально для DSM20016, штамма, для которого другие протоколы, не относящиеся к DSM20016, не полностью совместимы. Одной из наших главных целей является использование микробов в качестве недорогих датчиков и систем доставки.
Мы сотрудничаем с экспертами по кишечным заболеваниям, чтобы использовать DSM20016 для определения состояния желудочно-кишечного тракта и предоставления терапевтических средств по мере необходимости.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
В этой статье представлены протоколы работы с Limosilactobacillus reuteri DSM20016, устойчивым комменсальным микроорганизмом человеческого кишечника. Протоколы включают в себя рост, трансформацию плазмид, колоний PCR и измерение флуоресцентных репортерных белков.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Микробиология
- Синтетическая биология
- Здоровье желудочно-кишечного тракта
Фон
- Limosilactobacillus reuteri DSM20016 является естественным комменсальным микроорганизмом человеческого кишечника.
- Эта штамм показывает обещание для терапевтической доставки и обнаружения заболеваний.
- Протоколы в этой области часто фрагментированы и сложны для понимания.
- Цели исследования могут повлиять на выбор видов бактерий.
Цель исследования
- Предоставить ясные протоколы работы с DSM20016.
- Облегчить измерение репортерных белков и подтверждение колоний PCR.
- Рассмотреть распространенные проблемы и решение их в протоколах.
Используемые методы
- Рост Limosilactobacillus reuteri DSM20016.
- Техники трансформации плазмид.
- Колонии PCR для подтверждения генетических модификаций.
- Измерение флуоресцентных репортерных белков.
Основные результаты
- Были установлены успешные протоколы роста и трансформации.
- Колонии PCR подтвердили наличие желаемых генетических конструкций.
- Флуоресцентные репортерные белки были эффективно измерены.
- Были предоставлены руководства по устранению распространенных проблем.
Выводы
- Протоколы улучшают исследовательскую применимость DSM20016.
- Они предоставляют основу для будущих приложений в синтетической биологии.
- Четкие руководства помогают исследователям ориентироваться в фрагментированной литературе.
Часто задаваемые вопросы
Chapters in this video
0:00
Introduction
2:04
Preparing Limosilactobacillus reuteri DSM20016 Electrocompetent Cells for Electroporation
5:27
Measurement of the Acid‐Resistant Fluorescent Reporter Protein mCherry2
7:03
Confirmation of Plasmid Uptake via Colony PCR
8:45
Mini‐Prep Protocol for Limosilactobacillus reuteri and Confirmation of Plasmid Presence by PCR
