Индуцирование ложной беременности у самок мышей без необходимости вазэктомии самцов перед нехирургическим переносом эмбрионов или искусственным оплодотворением
7 июля 2023 г.
Представленный метод манипуляций с шейкой матки может индуцировать ложную беременность у мышей без необходимости скрещивания самок с самцами, подвергнутыми вазэктомии. Индукция ложной беременности необходима для успешного безоперационного переноса эмбрионов и безоперационного искусственного оплодотворения, которые также представлены.
Основным направлением наших исследований является разработка методов вспомогательной репродукции, которые обеспечивают усовершенствование и сокращение в соответствии с 3R экспериментов на животных. Мы разработали процедуры нехирургического переноса эмбрионов и нехирургического искусственного оплодотворения для мышей, а также нехирургическую процедуру переноса эмбрионов для крыс. С добавлением процедуры манипуляций на шейке матки для получения псевдобеременных самок, мы создаем улучшения 3R и вспомогательную репродукцию у грызунов.
Протоколы, описанные здесь, обеспечивают оптимизированные методы извлечения детенышей с использованием нехирургических методов переноса эмбрионов и искусственного оплодотворения мышей. Протокол манипуляций на шейке матки предусматривает усовершенствование процедур получения псевдобеременных женщин-реципиентов для вспомогательных репродуктивных технологий. Это уменьшает количество женщин, необходимых в качестве псевдобеременных реципиентов, и устраняет необходимость в вазэктомии мужчин.
Протоколы, изложенные здесь, могут быть использованы для стратегического управления виварием. Протоколы могут быть использованы при криоконсервации, экстракорпоральном оплодотворении, редеривации, производстве возрастных когорт и производстве генетически модифицированных животных.
Обзор
В данном исследовании представлен метод манипуляции шейного отдела, который индуцирует ложную беременность у мышей, что необходимо для успешного нехирургического переноса эмбрионов и искусственного осеменения. Данное достижение снижает необходимость в разведении животных и улучшает условия их содержания в соответствии с принципами 3R.
Основные компоненты исследования
Область исследований
- Методы вспомогательных репродуктивных технологий
- Благополучие животных и принцип 3R
- Модели на грызунах
Теоретические основы
- Современные проблемы методов разведения ложнобеременных самок
- Важность сокращения количества разводимых животных
- Необходимость эффективных процедур переноса эмбрионов грызунов
Используемые методы
- Манипуляции с шейкой матки для индуцирования ложной беременности
- Мыши (линия CD1)
- Методы нехирургического переноса эмбрионов и искусственного осеменения
Основные результаты
- Манипуляции с шейкой матки позволяют успешно получать псевдобеременных самок без необходимости использования вазэктомированных самцов.
- Оптимизированные протоколы улучшают выживаемость потомства благодаря применению нехирургических методов.
- Данные методы представляют ценность для криоконсервации, оплодотворения in vitro и создания генетически модифицированных животных.
Выводы
- В данном исследовании продемонстрирован эффективный метод получения ложнобеременных самок мышей, что способствует развитию вспомогательных репродуктивных технологий.
- Результаты имеют важное значение для повышения эффективности управления вивариумом и обеспечения более высоких стандартов благополучия животных в исследованиях.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для отрасли
Эффективная индукция ложной беременности у самок мышей имеет решающее значение для масштабируемых и воспроизводимых рабочих процессов вспомогательных репродуктивных технологий в доклинических исследованиях. Стандартизированная методика манипуляций с шейкой матки устраняет необходимость в использовании вазэктомированных самцов, что оптимизирует работу вивария и поддерживает принципы 3R. Данное усовершенствование повышает надежность и предсказуемость получения реципиентов с ложной беременностью для переноса эмбрионов и искусственного осеменения, что напрямую влияет на распределение ресурсов и общую производительность экспериментов.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Обеспечивает быстрое формирование когорт реципиентов для генетически модифицированных и подобранных по возрасту моделей животных.
- Поддерживает эффективность рабочих процессов редеривации и криоконсервации, обеспечивая своевременное наличие псевдобеременных самок.
- Снижает биологическую вариабельность за счет стандартизации подготовки реципиентов в различных экспериментах.
Скрининг и разработка анализа
- Облегчает подготовку валидированных моделей животных для последующего фенотипического скрининга и функциональных анализов.
- Повышает воспроизводимость и масштабируемость протоколов переноса эмбрионов и искусственного осеменения.
- Обеспечивает получение стабильных количественных данных для оценки репродуктивных показателей и параметров развития.
Трансляционные и доклинические исследования
- Обеспечивает трансляционную преемственность, поддерживая создание генетически модифицированных моделей для изучения заболеваний.
- Устраняет операционные затруднения при создании доклинических моделей и расширении когорт.
- Поддерживает продвижение с учетом рисков за счет минимизации процедурных сбоев и количества используемых животных.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
Данный протокол манипуляций с шейкой матки интегрируется в процесс вспомогательной репродукции: от ранних этапов поиска до разработки доклинических моделей и ведения когорт.
- Открывающая биология: Оптимизирует проверку гипотез и валидацию моделей за счет обеспечения надежной подготовки реципиентов.
- Скрининг: Стандартизирует готовность животных моделей для высокопроизводительных тестов репродукции и развития.
- Аналитика: Предоставляет количественные данные о беременности и размере помета для обоснования дизайна экспериментов и планирования ресурсов.
- Трансляционные исследования: Обеспечивает преемственность в создании и поддержании релевантных моделей заболеваний на животных.
- Корпоративное повторное использование: Предлагает многократно используемый нехирургический метод для различных применений вспомогательных репродуктивных технологий в рамках исследовательских программ.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает прогностическую достоверность результатов репродукции и снижает механистическую неоднозначность при создании моделей.
- Практическая ценность: улучшает стандартизацию, воспроизводимость и масштабируемость рабочих процессов вспомогательных репродуктивных технологий.
- Стратегическая ценность: оптимизирует процесс принятия решений о продолжении или прекращении исследований, а также повышает эффективность использования ресурсов за счет сокращения количества используемых животных и снижения сложности процедур.
- Влияние на портфель проектов: способствует приоритизации с учетом рисков и развитию генетически модифицированных и болезнь-ориентированных моделей.
Особенности реализации
- Требуется технический опыт в процедурах синхронизации эструса и манипуляций с шейкой матки.
- Необходим доступ к базовому инструментарию, такому как пипетки, зеркала и микроскопия для цитологической оценки.
- Требуется стандартизация между группами исследователей для обеспечения воспроизводимости и минимизации вариабельности.
- Метод применим для различных линий мышей и, при оптимизации протокола, потенциально для других моделей грызунов.
- Ограничения включают необходимость точного определения стадии эструса и обучение оператора для достижения максимальной эффективности.
