Определение прокоагулянтной активности внеклеточных везикул (ВВ) с помощью EV-активируемого временем свертывания крови (EV-ACT)
4 августа 2023 г.
В этом протоколе исследуется использование плазмы, обогащенной внеклеточными везикулами (ВВ), в качестве индикатора коагуляционной способности ВВ. Плазма, обогащенная EV, получают в процессе дифференциального центрифугирования и последующей рекальцификации.
Основное внимание мы уделяем нарушениям свертываемости крови у пациентов, перенесших черепно-мозговую травму. В этом исследовании мы пытаемся отслеживать изменения функции свертывания крови с помощью внеклеточной везикальной активности, времени свертывания крови. Наши команды уделяют особое внимание исследованию черепно-мозговых травм.
А при черепно-мозговой травме это тяжелое состояние, которое мы называем гиперкоагулированным состоянием. Это очень сложно измерить. И мы находим в крови пациента некоторые микровезикулы, которые мы называем внеклеточными везикулами, включая тело апоптоза, микровезикулу и экзосому.
И они отличаются прокоагуляционной способностью. Поэтому мы должны найти метод измерения способности. И с помощью этого метода мы можем быстро найти разницу между внеклеточными везикулами.
Это очень важно. В зависимости от этой меры мы можем сделать многое. Мы убедились, что у мышей TPI и клинического пациента, особенно в периферическом кровообращении, это будет стоить некоторой эмболизации.
Это очень, очень серьезно с клинической точки зрения. Наш протокол имел значительное преимущество по сравнению с другими методами благодаря своей простоте, экономичности и скорости. Это позволяет проводить анализ свертываемости крови у постели больного, устраняя необходимость в обширной лабораторной обработке.
В результате наших исследований был разработан новый метод, который позволяет измерять гиперкоагулированное состояние периферической крови. Его можно использовать не только при TPI, но и при других заболеваниях, таких как сепсис, преэклампсия, опухоль и гематологические заболевания. В будущем мы планируем исследовать при сканировании клиническое гиперсостояние, которое увеличивает риск образования тромбов.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
Это исследование исследует нарушения коагуляции у пациентов с травмой головы путем мониторинга функции свертывания крови через активность внеклеточных везикул (EV). Исследование фокусируется на гиперкоагуляционном состоянии, которое трудно измерить, и направлено на разработку метода оценки прокоагуляционной способности EV в образцах крови.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Нарушениe свертывания крови
- Внеклеточные везикулы
Бакграунд
- Нарушениe свертывания крови распространены у пациентов с травмой головы.
- Внеклеточные везикулы (EV) играют роль в процессах свертывания крови.
- Измерение гиперкоагуляционного состояния является сложным.
- Разные типы EV имеют различную прокоагуляционную способность.
Цель исследования
- Мониторинг изменений в функции свертывания, связанных с активностью EV.
- Разработка метода измерения коагуляционной способности EV.
- Улучшение понимания свертывания крови в случаях травм головы.
Использованные методы
- Сбор EV-богазой плазмы методом дифференциальной центрифугировки.
- Рекальцификация образцов плазмы для анализа.
- Оценка функции свертывания с использованием активности EV.
- Мониторинг микро везикул, включая апоптотические тела и экзосомы.
Основные результаты
- Определение различий в прокоагуляционных способностях различных EV.
- Разработка быстрого метода оценки коагуляционного статуса.
- Демонстрация важности EV в понимании нарушений свертывания крови.
- Получение представлений о связи между травмой головы и свертыванием крови.
Выводы
- Исследование предлагает новый подход к измерению свертывания крови у пациентов с травмой головы.
- Внеклеточные везикулы являются важными индикаторами коагуляционной способности.
- Необходимы дальнейшие исследования для изучения клинических последствий этих результатов.
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
Quantifying the procoagulant activity of extracellular vesicles (EVs) addresses a critical gap in early detection and risk assessment of hypercoagulable states across diverse disease contexts. The EV-Activated Clotting Time (EV-ACT) assay enables rapid, bedside evaluation of EV-driven coagulation, supporting mechanistic de-risking and target validation in translational research. This capability enhances predictive confidence at key inflection points in the discovery and preclinical pipeline.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of EV-mediated coagulation pathways relevant to disease mechanisms.
- Supports biological de-risking by quantifying functional procoagulant activity of EVs.
- Facilitates target validation for interventions modulating EV release or activity.
Screening & Assay Development
- Provides a standardized, quantitative assay for assessing EV procoagulant function in plasma samples.
- Delivers reproducible, real-time viscoelasticity measurements suitable for assay optimization.
- Enables rapid screening of samples from diverse disease models for hypercoagulability risk.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant models by detecting EV-driven hypercoagulability in preeclampsia, trauma, and cancer samples.
- Supports continuity from mechanistic discovery to preclinical validation of coagulation biomarkers.
- Informs risk-adjusted advancement decisions for candidate therapeutics targeting EV pathways.
Pipeline & Workflow Integration
The EV-ACT assay integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling functional assessment of EVs in both healthy and disease states.
- Discovery Biology: Quantifies EV-mediated procoagulant activity to clarify mechanistic hypotheses.
- Screening: Provides a rapid, reproducible readout for evaluating sample hypercoagulability.
- Analytics: Generates quantitative clotting time outputs for cross-condition comparison and statistical analysis.
- Translational Research: Bridges discovery findings to preclinical models with disease-relevant EV measurements.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, standardized platform for ongoing EV functional studies across indications.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in EV-related coagulation mechanisms and target validation.
- Operational Value: Delivers rapid, standardized, and reproducible bedside testing capability.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions by providing actionable coagulation risk data early in development.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of programs targeting EV-mediated pathologies.
Implementation Considerations
- Requires expertise in coagulation biology and EV isolation techniques.
- Needs access to viscoelasticity analyzers and standardized plasma preparation protocols.
- Demands cross-team alignment on assay parameters and data interpretation standards.
- May require adaptation for different disease models or sample types.
- Dependent on quality of EV enrichment and removal procedures for reliable outputs.
