Получение высококачественных криорезов цельного кроличьего глаза
November 10th, 2023
В этом протоколе описан надежный метод получения высококачественной криосекции цельных глаз кролика. В нем подробно описаны процедуры диссекции, фиксации, встраивания и разрезания глаз кролика, которые могут быть легко адаптированы для использования в любом исследовании с использованием иммуногистохимии на больших глазах.
Наши исследования сосредоточены на новых подходах к регенерации пигментного эпителия сетчатки. Считается, что дисфункция пигментного эпителия сетчатки играет центральную роль в патофизиологии многих глазных заболеваний, таких как дегенерация желтого пятна, поэтому регенерация этого слоя клеток привлекательна с терапевтической точки зрения. Визуализация структурной анатомии сетчатки с помощью иммуногистохимии имеет широкое применение в исследованиях сетчатки.
В нашей лаборатории мы обнаружили, что получение полезных результатов из глаз кроликов затруднено из-за тканевых артефактов, таких как прикрепление сетчатки и складки сетчатки. Несмотря на эти проблемы, существует очень мало протоколов, описывающих успешную обработку тканей сетчатки кролика. Этот протокол вносит несколько важных изменений в стандартные методы обработки тканей, которые приводят к превосходным тканевым срезам сетчатки кролика.
Это исследование может позволить ученым получить лучшие результаты от своих исследований, которые включают использование иммуногистохимии на моделях кроликов.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Обзор
В данном исследовании представлен усовершенствованный протокол получения высококачественных криосекторов целых глаз кролика, что крайне важно для исследований, связанных с иммуногистохимией в исследованиях сетчатки. Метод позволяет преодолеть обычные проблемы, связанные с артефактами тканей, и улучшает визуализацию структур сетчатки.
Ключевые компоненты исследования
Область исследования
- Регенерация эпителия пигментного слоя сетчатки
- Иммуногистохимия в исследованиях сетчатки
- Техники обработки тканей и криосекторирования
Бэкграунд
- Дисфункция пигментного эпителия сетчатки связана с заболеваниями глаз, такими как макулярная дегенерация.
- Существующие протоколы обработки сетчатки кролика редки и часто неэффективны.
- Улучшенные методологии могут способствовать лучшим результатам исследований с использованием моделей кроликов.
Используемые методы
- Трансконъюнктивальная экнуклеация и фиксация тканей
- Глаз кролика как биологическая система
- Техники криопротекции, вложения и секторирования
Основные результаты
- Реализация улучшенной обработки тканей привела к получению отличных секций.
- Визуализированные структуры сетчатки имели неповрежденные слои и морфологию.
- Изменения протокола успешно минимизировали артефакты тканей.
Выводы
- Это исследование подтверждает надежный метод подготовки тканей глаз кролика для иммуногистохимии.
- Результаты увеличивают потенциал для исследований сетчатки и разработки терапевтических методов.
