Выделение костного мозга мышей у новорожденных и получение макрофагов костного мозга
May 24th, 2024
Этот протокол описывает неферментативный и простой метод выделения 7-9-дневных клеток костного мозга новорожденных мышей и получения дифференцированных макрофагов с использованием надосадочной жидкости клеток L929 в качестве источника гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (M-CSF). Макрофаги, полученные из костного мозга, были дополнительно проанализированы на поверхностные антигены F4/80, CD206, CD11b и функциональную компетентность.
Цель данного исследования состоит в том, чтобы понять некоторые ограничения иммунного ответа на бактериальную инфекцию в раннем возрасте. Для этого нам необходимо разработать и использовать исследовательские модели, специфичные для новорожденных. Выделение костного мозга у семидневного щенка является сложной задачей и не очень хорошо установлено.
Макрофаги, полученные из костного мозга новорожденных, чувствительны и подвержены стрессу по сравнению с другими МПКТ. Методика, используемая в этом протоколе, проста и воспроизводима. Этот метод помогает пользователям изолировать костный мозг новорожденных мышей в возрасте от семи до девяти дней без использования каких-либо ферментов.
В этом исследовании представлена стандартизированная стратегия получения макрофагов, полученных из костного мозга у неонатальных мышей, которые могут быть использованы для решения вопросов неонатальной иммунологии. Этот воспроизводимый метод обеспечивает возрастную модель для продвижения исследований неонатальной иммунизации во многих областях знаний.
Обзор
Этот протокол описывает неферментативный метод изоляции клеток костного мозга новорожденных мышей и получения дифференцированных макрофагов. Исследование сосредоточено на трудностях работы с новорожденными мышами в возрасте 7-9 дней и на чувствительности их макрофагов, полученных из костного мозга.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Иммунология
- Клеточная биология
Бэкграунд
- Понимание ранних иммунных ответов на бактериальные инфекции у новорожденных.
- Трудности при изоляции костного мозга у новорожденных мышей.
- Макрофаги из костного мозга новорожденных чувствительны и склонны к стрессу.
- Необходимость воспроизводимых методов в исследованиях новорожденных.
Цель исследования
- Разработать надежный метод изоляции костного мозга у новорожденных мышей.
- Получить функциональные макрофаги для исследований иммунного ответа.
- Улучшить понимание иммунных ответов у новорожденных.
Используемые методы
- Изоляция костного мозга у новорожденных мышей в возрасте 7-9 дней.
- Неферментативная техника изоляции клеток.
- Использование супернатанта клеток L929 в качестве источника M-CSF.
- Анализ поверхностных антигенов и функциональной компетентности макрофагов.
Основные результаты
- Успешная изоляция макрофагов из костного мозга новорожденных.
- Характеристика макрофагов с использованием поверхностных антигенов F4/80, CD206 и CD11b.
- Демонстрация функциональной компетентности полученных макрофагов.
- Подтверждение метода как простого и воспроизводимого.
Выводы
- Протокол предоставляет надежный метод для изучения иммунных ответов у новорожденных.
- Изолированные макрофаги могут быть использованы для дальнейших исследований в области иммунологии.
- Эта техника может способствовать прогрессу в исследованиях новорожденного здоровья.
Часто задаваемые вопросы
Executive Industry Relevance
Reliable isolation and differentiation of neonatal mouse bone marrow-derived macrophages addresses a critical gap in modeling early-life immune responses for discovery-stage immunology. This standardized, enzyme-free protocol enables age-specific mechanistic studies, supporting predictive confidence in neonatal disease models and translational research. The method enhances portfolio relevance by enabling functional immune cell assays tailored to neonatal biology.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of neonatal immune mechanisms distinct from adult systems.
- Supports functional target validation in age-specific inflammatory and infection models.
- Facilitates biological de-risking for neonatal immunology hypotheses.
- Improves predictive confidence for early-life therapeutic targets.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, reproducible preparation of neonatal macrophages for downstream assays.
- Enables quantitative assessment of phagocytic function using pH-sensitive dye-conjugated bacteria.
- Supports flow cytometric analysis of surface markers for assay validation.
- Prepares validated cell systems for compound screening in neonatal contexts.
Translational & Preclinical Research
- Aligns in vitro macrophage models with disease-relevant neonatal immune responses.
- Enables continuity from discovery through preclinical validation in age-specific models.
- Supports risk-adjusted advancement of neonatal immunology programs.
- Provides mechanistic de-risking for early-life infection and inflammation studies.
Pipeline & Workflow Integration
This protocol integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis testing, functional validation, and quantitative readouts in neonatal immune models.
- Discovery Biology: Supports mechanistic studies of neonatal immune cell function and pathway analysis.
- Screening: Delivers reproducible, assay-ready macrophages for functional and phenotypic screening.
- Analytics: Provides quantitative outputs via flow cytometry and phagocytosis assays for condition comparison.
- Translational Research: Bridges discovery and preclinical work with age-appropriate immune cell models.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable, standardized workflow for neonatal immune cell preparation across programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in neonatal immune research.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable cell preparation for cross-study comparability.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions and capital efficiency in neonatal immunology portfolios.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of early-life immune targets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in neonatal mouse handling and sterile technique.
- Needs access to flow cytometry and fluorescence microscopy for functional and phenotypic analysis.
- Demands cross-team standardization for reproducibility in multi-site studies.
- Adaptation may be needed for different mouse strains or age windows.
- Cell yield and stress sensitivity may limit scalability compared to adult models.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
