Выделение костного мозга мышей у новорожденных и получение макрофагов костного мозга
May 24th, 2024
Этот протокол описывает неферментативный и простой метод выделения 7-9-дневных клеток костного мозга новорожденных мышей и получения дифференцированных макрофагов с использованием надосадочной жидкости клеток L929 в качестве источника гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (M-CSF). Макрофаги, полученные из костного мозга, были дополнительно проанализированы на поверхностные антигены F4/80, CD206, CD11b и функциональную компетентность.
Цель данного исследования состоит в том, чтобы понять некоторые ограничения иммунного ответа на бактериальную инфекцию в раннем возрасте. Для этого нам необходимо разработать и использовать исследовательские модели, специфичные для новорожденных. Выделение костного мозга у семидневного щенка является сложной задачей и не очень хорошо установлено.
Макрофаги, полученные из костного мозга новорожденных, чувствительны и подвержены стрессу по сравнению с другими МПКТ. Методика, используемая в этом протоколе, проста и воспроизводима. Этот метод помогает пользователям изолировать костный мозг новорожденных мышей в возрасте от семи до девяти дней без использования каких-либо ферментов.
В этом исследовании представлена стандартизированная стратегия получения макрофагов, полученных из костного мозга у неонатальных мышей, которые могут быть использованы для решения вопросов неонатальной иммунологии. Этот воспроизводимый метод обеспечивает возрастную модель для продвижения исследований неонатальной иммунизации во многих областях знаний.
Обзор
Этот протокол описывает неферментативный метод изоляции клеток костного мозга новорожденных мышей и получения дифференцированных макрофагов. Исследование сосредоточено на трудностях работы с новорожденными мышами в возрасте 7-9 дней и на чувствительности их макрофагов, полученных из костного мозга.
Ключевые компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Иммунология
- Клеточная биология
Бэкграунд
- Понимание ранних иммунных ответов на бактериальные инфекции у новорожденных.
- Трудности при изоляции костного мозга у новорожденных мышей.
- Макрофаги из костного мозга новорожденных чувствительны и склонны к стрессу.
- Необходимость воспроизводимых методов в исследованиях новорожденных.
Цель исследования
- Разработать надежный метод изоляции костного мозга у новорожденных мышей.
- Получить функциональные макрофаги для исследований иммунного ответа.
- Улучшить понимание иммунных ответов у новорожденных.
Используемые методы
- Изоляция костного мозга у новорожденных мышей в возрасте 7-9 дней.
- Неферментативная техника изоляции клеток.
- Использование супернатанта клеток L929 в качестве источника M-CSF.
- Анализ поверхностных антигенов и функциональной компетентности макрофагов.
Основные результаты
- Успешная изоляция макрофагов из костного мозга новорожденных.
- Характеристика макрофагов с использованием поверхностных антигенов F4/80, CD206 и CD11b.
- Демонстрация функциональной компетентности полученных макрофагов.
- Подтверждение метода как простого и воспроизводимого.
Выводы
- Протокол предоставляет надежный метод для изучения иммунных ответов у новорожденных.
- Изолированные макрофаги могут быть использованы для дальнейших исследований в области иммунологии.
- Эта техника может способствовать прогрессу в исследованиях новорожденного здоровья.
Часто задаваемые вопросы
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
