2 августа 2024 г.
В данной работе мы представляем протокол изучения ортодонтического движения зубов (ОТМ), служащий подходящей моделью для исследования механизмов адаптации кости, резорбции корней и реакции костных клеток на механические раздражители. В этом всеобъемлющем руководстве содержится подробная информация о модели OTM, получении данных микрокомпьютерной томографии и последующем анализе.
Первой целью данного исследования является анализ ремоделирования кости верхней челюсти, а затем резорбции в ответ на фармакологические стимулы или использование трансгенных веществ. Последние достижения включают анализ молекулярного дизайна для предотвращения или лечения потери смертности костной массы. Это нововведение направлено на улучшение стоматологического лечения, связанного с такими структурами, как ортодонтия и зубные имплантаты.
Технологии, которые в настоящее время используются для продвижения исследований в нашей области, включают использование генетически модифицированных животных, компьютерный анализ макротомографии, достижения в технологии пружин и разработки материалов для дескрипторов зубов. Эта процедура проводится под анестезией в положении мышей на операционном столе и с помощью микроскопии для точности. Дефицит эстрогена, наблюдаемый при остеопорозе, связан с усилением ремоделирования верхнечелюстных костей.
Будущие исследования могут изучить потенциал таких молекул, как фосфаткиназа и диоксигеназа 1, в качестве терапии, нацеленной на остеокластические ферменты. Это стратегии, направленные на усиление остеозащиты в условиях механических нагрузок. Для начала используйте плоскогубцы с дистальным разрезом, чтобы разрезать никель-титановую пружину размером 0,25 на 0,76 дюйма на шесть петель с двумя петлевыми концами, расположенными перпендикулярно пружине, с помощью ортодонтических плоскогубцев Вайнгарта.
Придайте желаемую форму круглой хромоникелевой проволоке диаметром 0,20 мм с петлеобразными концами, используя пинцет Мэтью и круглый инструмент в качестве примера размера. Соедините концы катушки в форме петли и круглую хромоникелевую проволоку диаметром 0,20 миллиметра. После обезболивания мыши оцените глубину анестезии с помощью педального рефлекса.
Расположите мышь в положении лежа на хирургическом столе, обездвижив ее конечности, чтобы ограничить движения и обеспечить внутриротовой доступ. Используйте открыватель для рта, изготовленный из проволоки диаметром 0,50 мм и закрепленный проволокой 0,08 мм, чтобы обеспечить полную визуализацию и предотвратить движение головы. Под стереомикроскопом понаблюдайте за внутриротовыми структурами.
Очистите и протравите правые поверхности первого моляра и резцов с помощью ацетона и самопротравливающей грунтовки соответственно. С помощью микрокисти наберите небольшое количество самопротравливающего грунта. И нанесите его на окклюзионную поверхность верхнего первого моляра.
Отверждайте праймер на окклюзионной поверхности коренных зубов и резцов в течение 30 секунд. Используя светоотверждаемую смолу, прикрепите дистальный конец шестипетлевой никелево-титановой пружины с открытой спиралью к окклюзионной поверхности правого первого верхнечелюстного моляра. И светоотверждение в течение 30 секунд.
Активируйте катушку с помощью специально разработанного аппарата с рельсом и кривошипным механизмом, прикрепленным к хирургическому столу. Подсоедините конец круглой проволоки диаметром 0,20 мм в форме свободной петли к крючку натяжного манометра. После активации кривошипа перемещайте хирургический стол по рельсу до тех пор, пока динамометр не зарегистрирует усилие 0,35 ньютона.
Прикрепите круглую проволоку диаметром 0,20 мм к обоим верхним резцам, чтобы закрепить катушку. Обрежьте провод, чтобы отсоединить мышь от динамометра. Добавьте еще немного смолы, чтобы металлическая кромка устройства не обнажалась и не травмировала мышь.
И светоотверждение в течение 30 секунд. Разберите мышь со стола. После операции обрабатывайте мышь солевым раствором, чтобы избежать обезвоживания в период адаптации к устройству.
Для начала острыми ножницами извлеките верхнечелюстную кость из усыпленной мыши, разрезав все мягкие ткани. Скуловая кость в сагиттальной плоскости и фронтонный носовой шов и сфенозатылочный синхондроз в корональной плоскости. Зафиксируйте верхнечелюстную кость в 10% нейтральном буферном формалине на 48 часов.
Для проведения микрокомпьютерной томографии верхнечелюстной кости используйте изотропный размер вокселя от 9 до 18 микрометров, настройки рентгеновского излучения 50 киловольт, алюминиевый фильтр 0,5 миллиметра и угол поворота 0,5 градуса для сканирования с высоким разрешением. Реконструируйте полученные изображения с помощью программы реконструкции микротомографии, указанной производителем используемой микрокомпьютерной томографии. Чтобы количественно оценить ортодонтическое движение зубов, измерьте разницу в линейном расстоянии между цементно-эмалевым соединением первого и второго моляров правой получелюстной кости относительно левой получелюстной кости.
Для проверки образцов на наличие ортодонтической индуцированной воспалительной резорбции корня методом ручной контурной пластики выбирают интересующую область дистовестибулярного корешка первого верхнечелюстного моляра. Измерьте минеральную плотность корня и процент объема корня к общему объему. Исследование ортодонтической модели движения зуба мыши с приложенным усилием 0,35 ньютона показало, что среднее расстояние соединения цементной эмали на контрольной стороне между первым и вторым молярами составляет 243,69 мкм.
На стороне ортодонтического смещения зуба среднее расстояние до соединения цементной эмали составило 284,66 мкм.
В данном исследовании представлен протокол изучения ортодонтического перемещения зубов (ОПЗ) на модели мышей, с основным акцентом на ремоделировании кости верхней челюсти и резорбции корней в ответ на механические стимулы. Основные результаты демонстрируют эффективность данной модели для анализа перемещения зубов и оценки потенциальных терапевтических стратегий по предотвращению потери костной ткани.
Ортодонтическое перемещение зубов (ОПЗ) у мышей представляет собой надежную модель in vivo для изучения динамики ремоделирования костной ткани под воздействием контролируемой механической силы, что позволяет напрямую проводить валидацию мишеней на ранних этапах исследования путей адаптации кости. Количественный микро-КТ анализ перемещения зубов и резорбции корней обеспечивает точное измерение биологических реакций, что повышает прогностическую достоверность трансляционных исследований в области биологии костной ткани. Данная модель стратегически предназначена для доклинической оценки терапевтических воздействий, направленных на активность остеокластов и остеобластов.
Данная модель мышей OTM интегрируется в континуум от этапа открытия до доклинических исследований, связывая механистические исследования и трансляционный поиск в области адаптации костной ткани и ортодонтических вмешательств.