Немедленное частичное удаление кумулюс-ооцитарных комплексов: усовершенствованный подход к быстрому наблюдению за экстракорпоральным оплодотворением

Наши исследования направлены на улучшение результатов ЭКО путем оценки того, улучшает ли немедленное частичное удаление кумулюсной ооциты компрессию оплодотворения. Эффективность наблюдения влияет на оплодотворение, гонку и качество эмбрионов, а также оптимизирует лабораторные процедуры. Мы стремимся усовершенствовать методы ЭКО для достижения лучших клинических результатов.

Установлено, что при медиальном частичном удалении кумулюса ооцит значительно сжимается, повышается эффективность наблюдения за оплодотворением при ЭКО. Это приводит к улучшению сроков оценки событий оплодотворения и потенциальной оптимизации качества эмбрионов и результатов ЭКО. Наш протокол повышает эффективность ЭКО за счет сокращения времени обработки рук и минимизации воздействия окружающей среды, а также потенциального улучшения качества эмбрионов.

Он предлагает оптимизированный и эффективный подход по сравнению с традиционными методами. Для начала поместите чашки для сбора ооцитов в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия на ночь. Инкубируйте 12 миллилитров рабочей среды для фолликулов в 14 миллилитрах пробирок с круглым дном при температуре 37 градусов Цельсия на ночь.

Затем перенесите пробирки на предварительно подогретый штатив для пробирок за 30 минут до забора ооцитов. Затем добавьте девять миллилитров фолликулярной рабочей среды в пробирку с круглым дном объемом 14 миллилитров и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в течение ночи. В день забора ооцитов переложите 4,5 миллилитра среды в предварительно инкубированную чашку для сбора ооцитов, покрытую двумя миллилитрами 100% парафинового масла.

Затем добавьте 4,5 миллилитра среды для удобрения в чашку для сбора ооцитов и выдерживайте при температуре 37 градусов Цельсия в течение ночи. После этого добавьте один миллилитр среды для удобрения в шестисантиметровую посуду, покрытую 100% парафиновым маслом. Чтобы затупить и округлить кончики стеклянных пипеток Пастера, прожгите их на спиртовой лампе в течение примерно пяти секунд.

Прикрепите всасывающую головку к кончику пастеровской пипетки так, чтобы она могла касаться дна посуды, не царапая. Промойте стакан мимо пипеток в 10-сантиметровой посуде средой для манипуляций с фолликулами. Вкратце, используйте иглу 17 калибра для извлечения ооцитов под трансвагинальным ультразвуковым контролем.

Налейте фолликулярную жидкость, собранную в пробирке с круглым дном объемом 14 миллилитров, в 10-сантиметровую посуду. Поставьте блюдо на платформу с постоянной температурой. Наблюдайте за OCCC под стереомикроскопом, чтобы подтвердить наличие ооцитов и оценить их зрелость.

Подтвердите, есть ли ооциты в OCCC, и проведите предварительную оценку зрелости ооцитов. Предварительно приготовьте силиконовую аспирационную пипетку с помощью круглой пастерской пипетки, отполированной пламенем. Отсадите OCCC, осторожно поднимая чашку для культуры в положении с девяти до 10:00 левым безымянным пальцем и наклоняя ее примерно на 15 градусов влево.

Во время выплевывания аспирированный OCCC находится в положении 11:00 блюда, слегка вытянутого горизонтально вправо. Затем понаблюдайте за размером гранулезных клеток вокруг расширенного OCCC. Теперь с помощью пастеровской пипетки аккуратно удалите лишние клетки гранулеза с быстрым разрезом вниз в соответствующем месте на удлиненном OCCC.

Переложите нарезанный OCCC в сборную чашку, содержащую промывочный раствор OCCC. Перелейте оставшуюся фолликулярную жидкость в стерильную емкость для образца. Для начала оцените концентрацию сперматозоидов, подвижность и морфологию собранного образца спермы под световым микроскопом.

Затем переложите сперматозоидную гранулу в новую центрифужную пробирку и дважды промойте ее в среде для удобрения. Инкубируйте их при 6% углекислом газе и 37 градусах Цельсия до тех пор, пока это не понадобится. После удаления лишних гранулезных клеток добавьте в чашку для удобрения от шести до восьми OCCC и один миллилитр среды для удобрения.

Осемените OCCCs модальными сперматозоидами в одной капле, примерно через два-три часа после извлечения в чашке для оплодотворения. Для краткосрочного оплодотворения следует проводить совместную инкубацию OCCC со сперматозоидами в течение четырех-шести часов. После инкубации следует механически удалить кумулюсные клетки, окружающие ооциты.

Аспирируйте ооциты с помощью пипетки с внутренним диаметром немного меньше ооцитов, чтобы обеспечить полное удаление клеток. Чтобы подтвердить оплодотворение, понаблюдайте за наличием двух полярных тел. Ооциты, показывающие второе полярное тельце, считаются оплодотворенными.

Для регулярного оплодотворения удалите кумулюсные клетки с помощью пипеток через 18–20 часов совместной инкубации для оценки оплодотворения. Культивируйте оплодотворенные ооциты в течение трех-пяти дней после извлечения ооцитов. Оцените оплодотворение через 20 часов после инсеминации, чтобы определить количество пронуклеусов.

Затем культивируют каждую зиготу по отдельности в средней капле и переносят эмбрионы после оплодотворения в среду для расщепления. Перенесите эмбрионы третьего дня в бластоцитарную среду и оцените на пятый день. Представляйте непрерывные данные в виде среднего значения и стандартного отклонения, а порядковые данные — в виде пропорций.

Из 47 пациенток, получавших кратковременную инсеминацию, не наблюдалось существенных различий по возрасту пациенток и количеству извлеченных ооцитов. Среднее время процедуры было значительно короче в группе частичного удаления ОКК по сравнению с контрольной группой, несмотря на отсутствие существенных различий в скорости расщепления, оптимальной скорости эмбриона и оптимальной скорости бластоцитов. У пациентов, перенесших традиционное ЭКО, было отмечено сходство в возрасте пациентов и количестве извлеченных ооцитов между двумя группами.

Несмотря на то, что в группе частичного удаления OCCC было отмечено несколько более короткое среднее время операции, статистически значимой разницы не наблюдалось. Как и в предыдущей группе, не было выявлено существенных расхождений в скорости расщепления, оптимальной скорости эмбриона и оптимальной скорости бластоцитов.