Создание мышиной модели тонкого эндометрия

Тонкий эндометрий широко признан важнейшей причиной бесплодия. Исследования патогенеза тонкого эндометрия опираются на животные модели, что делает выбор подходящей модели критически важным. В этой статье мы опишем подробный протокол, который позволяет создать надежную и воспроизводимую модель тонкого эндометрия у мышей.

Операция травматична, так как нам нужно рассечь мышь и подставить мышиный маточный рог для манипуляций. Неправильная операция может стать причиной инфицирования или даже привести к гибели мышей. Действительно, перед экспериментальной эксплуатацией необходима тщательная подготовка и опыт.

Мы успешно разработали модель эндометрия с временем инфузии от одной до трех минут, чтобы воспроизвести различные степени симптомов тонкого эндометрия, наблюдаемых в клинических случаях. Это позволяет нам создавать модели с разным уровнем повреждений, в зависимости от конкретных потребностей наших исследований. Метод, используемый в нашем протоколе, имеет преимущество низкой стоимости, пригодности, а также экспериментального периода.

Изучается патологический механизм и лечение в трех начальных случаях по сравнению с другими методиками. Для начала расположите мышь под наркозом на спине на предварительно нагретом операционном столе и с помощью медицинской ленты закрепите конечности мыши. С помощью стерильных ножниц и щипцов сделайте разрез в один сантиметр в брюшной полости, расположенный примерно в сантиметре от отверстия уретры, простирающийся до брюшной полости.

Аккуратно отодвиньте внутренности в сторону с помощью стерильных щипцов, чтобы найти матку. Обнажите правый маточный рог и наложите кровоостанавливающие зажимы на проксимальном конце возле шейки матки и дистальном конце возле яичника. С помощью шприца 25 калибра введите примерно 50 микролитров 95% этанола в полость матки, держа иглу параллельно маточному рогу.

Удерживайте шприц от одной до пяти минут в зависимости от ситуации. Затем извлеките этанол из полости матки и пять раз промойте полость матки стерильным физиологическим раствором, чтобы удалить остатки этанола. Теперь снимите кровоостанавливающие зажимы и верните матку и внутренности в исходное положение.

С помощью рассасывающихся хирургических нитей 5/0 зашить брюшину, а затем эпидермис. Для начала положите усыпленную модель мыши с тонким эндометрием на стол для вскрытия и разрежьте швы хирургическими ножницами, чтобы обнажить матку. Затем с помощью хирургических щипцов аккуратно извлечь всю матку и отделить матку от окружающих внутренностей.

Сразу же удалите оба маточных рога и разделите каждый рог на три-четыре небольших сегмента. Поместите ткани матки в один миллилитр 4%-ного параформальдегида, взятого в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров. Поместите зафиксированные формалином образцы в тканевые кассеты и пропустите тканевые кассеты через ряд концентраций этанола, за которым последовали ксилол и парафин.

Заполните восковую форму расплавленным парафином, нагретым до 55 градусов Цельсия. С помощью нагретых щипцов можно быстро перенести инфильтрированные сегменты ткани из встраиваемой кассеты в восковую форму. После того, как сегменты ткани будут правильно расположены, поместите нижнюю часть встраиваемой кассеты поверх гистологической формы.

Затем поместите форму прямо на охлаждающую пластину, установленную на четыре градуса Цельсия, не менее чем на 20 минут, чтобы парафин затвердел. Затем извлеките образец из формы и с помощью парафинового триммера обрежьте излишки воска вокруг него. Толщина эндометрия и количество эндометриальных желез достоверно уменьшались в группах одной, двух- и трехминутной терапии по сравнению с контрольной группой.

Выраженная спайка матки и почти невидимая полость матки наблюдались в четырех- и пятиминутной группах, эндометриальных желез обнаружено не было. Фиброз эндометрия увеличивался с увеличением продолжительности инфузии этанола, о чем свидетельствует чрезмерное окрашивание в группах от одной до пяти минут по сравнению с контролем.