Одномолекулярная визуализация раскручивания ДНК в реальном времени с помощью хеликазы CMG

В нашей лаборатории мы изучаем молекулярные механизмы репликации эукариотической ДНК. Мы хотим понять динамику дупликации генома на уровне отдельных молекул. Мы визуализируем репликацию ДНК с помощью нескольких систем, включая очищенные белки и экстракт, полученный из яиц Xenopus.

Многое из того, что мы знаем о репликации ДНК, получено в результате массовых экспериментов, визуализации клеток и структурной биологии. Эти методы действительно мощные, но они часто ограничены в том, что они могут рассказать нам о динамике или переходном поведении отдельных белков. Это то, для изучения чего действительно хорошо подходят методы с использованием одной молекулы, и именно поэтому их использование растет в этой области.

Наш протокол для визуализации раскручивания ДНК в реальном времени описывает платформу, которую можно использовать и модифицировать для исследования различных аспектов репликации ДНК. Это может обеспечить лучшее понимание молекулярного механизма активности CMG в присутствии выбранных компонентов рибосом и репликативного стресса. Чтобы понять сложные системы, участвующие в процессе репликации ДНК, мы изолируем ключевые белки и визуализируем их поведение в реальном времени in vitro.

Полученные нами знания способствуют созданию более полной картины репликации ДНК.