Отделение гранулез преовуляторного фолликула птиц и слоев клеток теки для последующего применения

Мы стремимся понять специализированные гранулезы и тека клеток яичника Ланганда. Мы изучаем дифференциальную экспрессию генов между двумя типами клеток в разные моменты овуляции. Это дает представление о репродуктивной эффективности и фертильности, которое будет использоваться для устойчивого увеличения производства яйцеклеток.

Репродуктивная биология птицы в настоящее время исследуется с использованием технологий секвенирования нового поколения и метаболических анализов. Это делается для изучения как репродуктивных тканей, так и гормонального взаимодействия, участвующего в половой зрелости и овуляции. Слой клеток гранулезы не всегда может отклеиваться как неповрежденный лист.

Пациенты на практике должны обеспечить себе более высокую вероятность успеха. Лишний желток, оставшийся на слое гранулезы, является еще одной проблемой. Более длительное время инкубации при холодном PBS может облегчить эту проблему.

В противном случае может потребоваться очистка ниже по течению. Этот метод позволит стандартизировать биологов-репродуктологов птиц. По мере совершенствования технологии секвенирования выяснение роли специализированных клеток в органах становится все более доступным.

Таким образом, визуализация метода, который разделяет специализированные типы клеток, имеет решающее значение для будущей репликации. Для начала возьмите фолликулы, выделенные от половозрелой самки птицы, и поместите их на лед. Перед манипуляцией изучите фолликулы, отметив расположение стебля, рыльца, зародышевого диска.

Затем аккуратно перекатывайте фолликул по сухому бумажному полотенцу и при необходимости оттягивайте серозу от поверхности фолликула. Держите фолликул за стебель над миской, наполненной PBS, и используйте гравитацию, чтобы визуализировать, где стебель заканчивается на поверхности фолликула. С помощью ножниц отрежьте только стебель, не прокалывая поверхность фолликула, и продолжайте удалять серозу, пока она не станет заметной.

Используя световой короб для освещения и зародышевый диск в качестве ориентира, переместите рыльце на противоположную сторону. Осторожно держите фолликул так, чтобы была видна сторона рыльца, и расположите фолликул прямо над чашей с ледяным PBS. Затем возьмите в руки скальпель и аккуратно разрежьте по длине рыльца.

Сразу же капните фолликул в ПБС, как желток начнет выпадать. С помощью пары прямых щипцов без зубов аккуратно отшпилите розовый слой фолликулярной стенки от желтка с одной стороны среза. Продолжайте небольшими щипковыми и тянущими движениями, чтобы приподнять стенку фолликула от желтка.

Чтобы выполнить разделение слоев, оттяните примерно пять миллиметров ткани фолликулярной стенки от желтка за один раз. После того, как пятимиллиметровый срез будет втянут, используйте угловые щипцы в тандеме с прямыми щипцами для зондирования вдоль оболочки фолликула. Как только слой гранулезы будет найден, надежно прижмите его к слою Тека и продолжайте оттягивать оба слоя от желтка, как описано ранее.

Затем с помощью изогнутых щипцов слегка смахните желток с защипнутых слоев. Сметите или удалите лишний желток из миски, не соскребая слой гранулезы, чтобы избежать разрывов. После втягивания каждого участка фолликулярной стенки на 5-10 миллиметров сделайте паузу и с помощью щипцов оттолкните слои теки и гранулезы друг от друга, а также от желтка.

Теперь осторожно подойдите к зародышевому диску с помощью прямых щипцов. Крепко прижмите слой гранулезы к слою Theca. С помощью изогнутых щипцов легкими движениями щеткой отодвиньте зародышевый диск от гранулезных клеток на поверхность желтка.

Если в качестве исследовательского образца требуется зародышевый диск, смахните желток с помощью скошенных щипцов. Продолжайте отделять желток от стенки фолликула изогнутыми щипцами до тех пор, пока вся сфера фолликула не будет лишена желтка. После того, как оставшаяся часть желтка будет смахнута, отделите последнюю часть слоя гранулезы от слоя Theca.

Убедитесь, что полностью отделенный слой гранулезы максимально чистый, не будучи сильно покрытым гнетом. Поместите слои гранулезы и теки в отдельные емкости с температурой четыре градуса Цельсия PBS. После помещения слоя гранулезы и слоя теки в предназначенный для этого контейнер аккуратно перемешайте слой теки в PBS с помощью щипцов, чтобы отделить любые оставшиеся остатки слоя гранулезы.