Создание мышиной модели с гиперчувствительностью к кашлю путем вдыхания лимонной кислоты

Хронический кашель значительно ухудшает качество жизни, вызывая давящий вид и существенную экономическую нагрузку. Мы акцентируем внимание на персистенции кашля, особенно на механизме гиперчувствительности к кашлю. Мы создали мышиную модель с гиперчувствительностью к кашлю, которая будет использована для дальнейшего изучения механизма хронического кашля. По сравнению с другими животными моделями, особенно морскими свинками, они проще в содержании, более экономичны и поддаются генетическим манипуляциям. Наш протокол прост в эксплуатации. Модель легче контрастировать. MA более осуществима. Эта модель также будет ценна для дальнейшего изучения механизма и потенциальных новых методов лечения хронического кашля.

[Рассказчик] Для начала поместите мышей в две независимые камеры, каждая из которых подключена к ультразвуковому небулайзеру. Подвергните модельную группу воздействию аэрозоля 0,1 молярной лимонной кислоты, а контрольную группу - 0,9% обычного аэрозоля с солевым раствором. Установите скорость распыления на максимальное значение в три миллилитра в минуту и отрегулируйте выдержку до двух часов в день в течение двух недель. После каждого сеанса возвращайте мышей в соответствующие клетки. Настройте неинвазивную систему плетизмографии всего тела для измерения чувствительности к кашлю. Подключите камеры, преобразователи потока, смещение потока и другие компоненты. Откалибруйте систему, нажав кнопку «Калибровать», чтобы обеспечить точность измерений. Затем создайте новое исследование кашля в системном программном обеспечении для мышей. Настройте параметры исследования таким образом, чтобы на акклиматизацию отводилась одна минута, на время отклика — 10 минут, а на доставку химического раствора — 10 минут. После этого поместите каждую сознательную мышь в отдельные камеры, гарантируя, что в каждой камере будет только одна мышь. Затем добавьте в небулайзер один миллилитр соответствующего химического раствора, такого как обычный физиологический раствор, лимонная кислота или капсаицин, чтобы записать количество случаев кашля после начала процедуры. Подготовьте приборы для измерения гиперреактивности дыхательных путей. Создать исследование реакции на дозу в программном обеспечении системы для мышей. Настройте параметры измерения и последовательность задач. Одна минута на акклиматизацию, 30 секунд на доставку метахолина, три минуты на время реакции и одна минута на восстановление. Поместите каждую сознательную мышь в отдельные камеры, чтобы в каждой камере была только одна мышь. Затем добавьте в небулайзер 50 микролитров PBS или метахолина и начните исследование. Запишите значение Penh, которое указывает на бронхоконстрикцию в ответ на повышение концентрации метахолина. Чувствительность к кашлю значительно повысилась в модельной группе через неделю и сохранялась в течение всего периода воздействия. Смертность во время исследования не наблюдалась ни в модельной, ни в контрольной группе. После контакта количество спонтанных приступов кашля было достоверно выше в модельной группе, чем в контрольной группе. Чувствительность к кашлю, вызванная нормальным физиологическим раствором, лимонной кислотой и капсаицином, также была значительно выше в модельной группе после воздействия. Гиперреактивность дыхательных путей оставалась сопоставимой между двумя группами без существенной разницы после моделирования. Для начала соберите кровь из орбитальной пазухи усыпленной мыши в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров. Поместите пробирку на лед, центрифугируйте кровь при 3000 G в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия. С помощью пипетки соберите надосадочную жидкость и аликвотируйте ее. Затем откройте грудную клетку, чтобы обнажить трахею, и введите в трахею постоянную иглу 22-го калибра. Трижды промыть трахею 0,5 миллилитрами предварительно охлажденного PBS и собрать жидкость для бронхоальвеолярного лаважа. Затем центрифугируйте собранную жидкость при 500 G в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия. Соберите надосадочную жидкость, аликотируйте ее и храните при температуре -80 градусов по Цельсию. Повторно суспендируйте гранулу в 100 микролитрах PBS. Вскройте грудную клетку, чтобы обнажить легкие и осторожно удалите легочные ткани. Собранные легочные ткани поместите в криогенные флаконы. Существенных различий между группами в общем количестве воспалительных и дифференциальных клеток в жидкости бронхоальвеолярного лаважа не наблюдалось.