Electroporation-Based CRISPR-Cas9-Mediated Gene Knockout in THP-1 Cells and Single-Cell Clone Isolation

Mathieu Pinaud; Alessia Zamborlini

doi:10.3791/67469

Нокаут генов CRISPR-Cas9 на основе электропорации в клетках THP-1 и выделение клонов одиночных кл...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Electroporation-Based CRISPR-Cas9-Mediated Gene Knockout in THP-1 Cells and Single-Cell Clone Isolation

Нокаут генов CRISPR-Cas9 на основе электропорации в клетках THP-1 и выделение клонов одиночных клеток

Full Text

3,484 Views

09:29 min

February 28, 2025

DOI: 10.3791/67469-v

Mathieu Pinaud¹, Alessia Zamborlini¹

¹INSERM, CEA, Center for Immunology of Viral, Auto-immune, Hematological and Bacterial diseases (IMVA-HB/IDMIT),Université Paris-Saclay

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Клеточная линия THP-1 широко используется в качестве модели для исследования функций моноцитов/макрофагов человека в различных областях исследований, связанных с биологией. В этой статье описывается протокол для эффективной инженерии на основе CRISPR-Cas9 и выделения клонов отдельных клеток, что позволяет получать надежные и воспроизводимые фенотипические данные.

Моя исследовательская деятельность сосредоточена на понимании механизмов, которые делают макрофаги устойчивыми к инфицированию ВИЧ, вирусом, ответственным за пандемию СПИДа. В частности, мы сосредоточимся на активности фермента, называемого HT-1, который разрушает NTP, строительные блоки вирусных геномов. Но у этого фермента есть и другие активности, которые мы пытаемся выяснить.

Мы разработали протокол генной инженерии клеток THP1. Эти клетки являются хорошо зарекомендовавшим себя суррогатом для изучения человеческими макрофагами. Например, репликация ВИЧ-1.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Электропорация CRISPR-Cas9 нокаут генов клетки THP-1 макрофаги полученные из моноцитов человека воспалительные сигнальные пути форбол-12-миристат 13-ацетат вирусные взаимодействия sgРНК эффективность редактирования ДНК секвенирование по Сэнгеру вывод о редактировании CRISPR истощение белков иммуноблоттинг выделение клонов одиночных клеток