Создание моделей крыс, имитирующих гендерно-утверждающую гормональную терапию

В нашем исследовании были разработаны животные модели для воспроизведения гормональной терапии для трансгендеров с использованием тестостерона для трансгендерных мужчин и эстрогена с антиандрогенами для трансгендерных женщин. Мы изучаем, являются ли те, кто проходит эту терапию, так же уязвимы к химическим веществам окружающей среды, как население в целом, и есть ли какие-либо долгосрочные побочные эффекты гормонального лечения. Эта модель уникальна в своей области, поскольку в настоящее время доступны данные и инструменты для оценки потенциально различной восприимчивости к химическим веществам трансгендерных людей, проходящих гормональную терапию, и их побочных эффектов.

Важным открытием нашей работы является использование специфического для пола печеночного CPS в качестве маркера для оценки успеха гормональной терапии. Этот подход, разработанный впервые в нашем исследовании, является ценным инструментом для подтверждения точности и эффективности модели.

Наш протокол устраняет пробел в понимании долгосрочных эффектов гормональной терапии. В нем также исследуется, может ли ежедневное воздействие пищевых продуктов и химических веществ из окружающей среды взаимодействовать или изменять эффекты гормонального лечения с течением времени.

В будущем мы изучим, подходит ли модель для долгосрочного тестирования, и исследуем дополнительные биомаркеры, такие как узкие поведенческие тесты, чтобы лучше оценить эффекты терапии.

[Инструктор] Начните с ущипывания и подтяжки кожи в месте инъекции для введения тестостерона и эстрадиола плюс ципротерона ацетата, растворенного в кунжутном масле. Введите иглу одномиллилитрового шприца параллельно спине животного. Как только игла окажется внутри, медленно введите 100 микролитров тестостерона или 200 микролитров эстрадиола плюс ципротерона ацетат, в зависимости от модели. После двух недель лечения поместите каждую крысу под наркозом в положение лежа на грелке. Далее приготовьте пятимиллилитровый шприц с иглой 21 калибра, следя за тем, чтобы вакуум был снят. С помощью пальцев найдите сердце. Аккуратно очистите грудную стенку и осторожно введите иглу в боковую грудную стенку, перпендикулярно телу, в точке, выровненной с согнутыми локтями, между пятью и шестью ребрами. Как только игла достигнет сердечного желудочка, кровь попадет в шприц капиллярным путем. Медленно и непрерывно втягивайте поршень шприца, пока не наберется кровь. После жертвоприношения поместите каждое животное на стол для вскрытия на спине, передними ногами вверх, а задними вниз. Зафиксируйте конечности булавками, затем сбрызните брюшную поверхность животного дезинфицирующим раствором для подготовки к вскрытию. С помощью ножниц разрежьте по средней линии от лобка к верхней части живота. Сделайте два боковых разреза вдоль медиальных поверхностей каждой задней конечности от среднего вентрального разреза брюшной полости и обнажите брюшные внутренности. У самцов крыс иссекают семенники, расположенные во внутрибрюшном мошоночном мешке. Нажмите на мошоночный мешок, чтобы яички выступали, и осторожно возьмитесь за них. Используйте плоскогубцы, чтобы удерживать висцеральный жир, затем осторожно отрежьте яички от внутренних органов. Взвесьте яички перед тем, как поместить их в раствор Буа для гистопатологического анализа. У самок крыс захватывают матку деликатно. Определите яичники на концах обоих маточных рогов и отрежьте их от окружающей висцеральной жировой ткани. Взвесьте яичники после иссечения. Далее захватите печень щипцами, следя за тем, чтобы она не сломалась. Плоскогубцами захватите мечевидный отросток и полностью разрежьте диафрагму ножницами. С помощью ножниц отделите печень от диафрагмы. Подтяните мечевидный отросток с помощью щипцов и извлеките печень из брюшной полости. После иссечения взвесьте печень и храните ее соответствующим образом. С помощью ножниц режьте перпендикулярно вдоль шеи животного. Удалите кожу и мускулатуру, чтобы обнажить трахею, где расположена щитовидная железа. Аккуратно обрежьте концы трахеи, чтобы удалить щитовидную железу. После удаления яичка захватите придаток яичка, который прикреплен к заднему краю яичка и содержится внутри мошонки. Чтобы собрать сперму, очистите хвост правого придатка яичка, удалив жир и соединительную ткань с помощью ножниц. Отделите хвост от оставшейся части и поместите его в чашку Петри, содержащую один миллилитр ДМЭМ. Отрежьте хвост ножницами и используйте прошлую пипетку, чтобы аккуратно пропустить содержимое и облегчить освобождение. Теперь перелейте собранную жидкость в пробирку объемом 15 миллилитров и отрегулируйте объем до 10 миллилитров с помощью DMEM, чтобы достичь коэффициента разбавления один к 10. Пипеткой надавите содержимое, чтобы оно гомогенизировалось и создало суспензию. После легкого встряхивания возьмите 10 микролитров суспензии для загрузки камеры Нейбауэра.