Обнаружение регулируемых алкалоидов спорыньи в пищевых матрицах с помощью жидкостной хроматографии-спектрометрии подвижности ионов-времяпролетной масс-спектрометрии

Целью нашей группы является предложение новой аналитической методологии, которая позволяет эффективно контролировать загрязнения и остатки в различных матрицах за счет уникальной идентификации соединений в ячейках. Мы попытались решить некоторые проблемы, связанные с безопасностью пищевых продуктов, с помощью передовых аналитических платформ и устойчивой обработки проб. Недавние исследования микотоксинов подчеркивают достижения в таких методах обнаружения, как массивная спектрометрия и биосенсоры.

В нем также исследуется воздействие на здоровье и стратегии снижения загрязнения, направленные на повышение безопасности пищевых продуктов и разработку эффективных процессов детоксикации в сельскохозяйственной практике. Масс-спектрометрия играет ключевую роль в обнаружении химических остатков и загрязняющих веществ, включая микотоксины в пищевых продуктах. Последние достижения в масс-спектрометрии сместили исследования от целевого к нецелевому аналитическому методу, при этом коммерциализация ионной подвижности, масс-спектрометрия с высоким разрешением, способствовала этой растущей тенденции.

Он позволяет проводить аналитическое количественное определение каждого регулируемого алкалоида спорыньи. Хроматографический анализ этих соединений может привести к неправильной количественной оценке, особенно если пики недостаточно разрешены. Таким образом, применение спектрометрии ионной подвижности обеспечивает еще одно измерение для их количественной оценки на основе значений их подвижности.

Наш интерес в будущих исследованиях заключается не только в продолжении борьбы с новыми загрязнителями в пищевых продуктах, но и в том, чтобы сосредоточиться на экспосомическом и биомониторинге человека. Крайне важно понимать связь между воздействием окружающей среды и здоровьем, измеряя химические вещества, токсины и другие метаболиты в биологических жидкостях. Для начала приготовьте два янтарных флакона объемом 1,5 миллилитра с 500 микролитрами промежуточного раствора, и еще один флакон со смесью растворителей в качестве моющего раствора.

Во время кондиционирования колонки жидкостной хроматографии составьте список работ, включающий два раствора. В столбце файла метода списка работ загрузите файл метода получения, сохраненный с требуемыми параметрами. Создайте папку для сохранения всех полученных файлов данных.

Направьте все сэмплы в выбранную папку в столбце пути к сэмплу. Перейдите на верхнюю панель инструментов программного обеспечения и запустите список работ. Как только список работ будет выполнен, откройте качественное программное обеспечение.

Чтобы загрузить все анализируемые образцы, выберите файл, а затем откройте список работ. Щелкните правой кнопкой мыши по образцу, соответствующему EA-решению. Перейдите к редактированию хроматограммы, затем выберите тип, а затем извлеченную ионную хроматограмму.

Введите теоретическую молекулярную массу протонированного иона для каждого советника, затем нажмите «Добавить» и «OK». Появятся шесть выделенных ионных хроматограмм, соответствующих шести ЭА и их эпимерам. На каждой выделенной ионной хроматограмме появятся два пика, соответствующие основному ЭА и его эпимеру. Щелкните правой кнопкой мыши, выделив всю площадь одного пика, и спектр подвижности ионов выскочит.

Перейдите к оси x спектра подвижности ионов, щелкните правой кнопкой мыши и щелкните по поперечному сечению столкновения. Если значение CCS не отображается, щелкните правой кнопкой мыши по спектру мобильности и выберите «Копировать в мобилограмму», затем снова щелкните правой кнопкой мыши по спектру мобильности и выберите состояние назначенной зарядки. Введите точную массу и заряд иона.

Затем на основе данных о фрагментации из литературы и баз данных сравните и выберите наиболее интенсивный продукт в качестве дополнительной точки идентификации. Обратите внимание на время удержания, значение CCS и точную массу основного ионного аддукта для каждого советника, чтобы создать метод количественной оценки. Затем откройте программное обеспечение для обработки данных и перейдите на вкладку управления методами, затем нажмите на настройки аналита.

Введите название каждого советника, а также время его хранения, значение CCS и массу протонированных аддуктов. При необходимости отрегулируйте допуск для каждой точки идентификации при использовании настроек по умолчанию. Для начала подготовьте колонку жидкостной хроматографии и настройте параметры сбора данных.

Взвесьте один грамм образца в 50-миллилитровой центрифужной пробирке. Добавьте четыре миллилитра раствора для экстракции, и перебейте образец на вихревом воздухе в течение одной минуты. Центрифугируйте образец в течение пяти минут при температуре 9 750 G и четырех градусах Цельсия.

Перенесите всю надосадочную жидкость в 15-миллилитровую центрифужную пробирку, содержащую 150 миллиграммов смеси сорбента, и переведите образец на вихревой поток в течение одной минуты. После центрифугирования образца соберите надосадочную жидкость и переложите ее в четырехмиллилитровый флакон из янтарного стекла. Выпарите экстракт под слабой струей азота, затем восстановите образец в 750 микролитрах водной смеси метанола.

С помощью двухмиллилитрового шприца отфильтруйте образец через нейлоновый фильтр толщиной 0,22 микрометра в 1,5-миллилитровый янтарный хроматографический флакон. Для начала подготовьте образцы алкалоида спорыньи, или EA, и получите калибровочную кривую с матрицей с помощью жидкостной хроматографии. Откройте программное обеспечение для количественного анализа и перейдите на быструю вкладку задачи.

Нажмите на импорт пакета. После импорта партии нажмите на «Обработать партию» под «Импортировать партию». После завершения обработки данных перейдите к обзорному скринингу и проверьте наличие проблем, связанных с автоматической интеграцией, таких как слишком близкое расположение хроматографических пиков друг к другу.

Если это так, сузьте или увеличьте значения, относящиеся к допуску по времени хранения, допуску по значению CCS и/или массовой ошибке, первоначально установленной в файле количественного метода, и повторно обработайте данные. Если автоматическая интеграция пиков по-прежнему выбирает неправильные пики, вручную выберите область на хроматограмме, которая появится в окне просмотра скрининга. На вкладке Управление партиями перейдите в окно концентрации партии и укажите значение концентрации для каждого уровня, установленного ранее.

Как только закончите, нажмите «Сохранить концентрации». Нажмите «Количественная партия» и настройте параметры, такие как модель в соответствии с данными калибровки, ожидание и принудительное превышение модели до нуля. После завершения количественного определения алкалоидов спорыньи перейдите на вкладку количественного анализа, затем щелкните правой кнопкой мыши папку с пакетом в крайнем левом углу и выберите «Создать отчет».

Наконец, выберите количественное определение аналита и экспортируйте отчет в нужном формате. Хроматографическое разделение выявило четкие пики для каждой пары эпимеров EA, за исключением эрготамина и эрготамина, которые показали небольшое перекрытие из-за их близкого времени удержания. Спектрометрия ионной подвижности позволила провести базовое разделение эрготамина и эрготамина, обеспечив различимые значения CCS.

Анализ эффектов подавления или усиления сигнала показал минимальные матричные помехи с диапазоном от минус 32% до 18%, что позволило провести точную количественную оценку с использованием стандартной калибровочной кривой, за исключением эргаметранина, который требовался из калибровочной кривой, согласованной с матрицей. Точность метода была подтверждена коэффициентами восстановления для всех аналитов в пределах от 72 до 117%, за исключением эрготамина, который показал значения восстановления от 43 до 45%. Предел значений количественного определения варьировал от 0,65 до 2,6 нанограмм на миллилитр, подтверждая чувствительность метода.