Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Hsuan-Ti Wang; Cheng-Chang Chen

doi:10.3791/67519

Пластырь-зажим для анализа одиночных эндолизосомальных везикул

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Пластырь-зажим для анализа одиночных эндолизосомальных везикул

Full Text

1,205 Views

05:47 min

April 4, 2025

DOI: 10.3791/67519-v

Hsuan-Ti Wang¹, Cheng-Chang Chen^1,2

¹Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, ²Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

В этом протоколе подробно описан метод прямого измерения активности ионных каналов на внутриклеточных везикулах с использованием ручной эндолизосомальной системы патч-зажимов. Мы проиллюстрируем метод, который заключается в увеличении эндолизосом и ручном выделении этих везикул. Такой подход гарантирует, что исследователи могут точно воспроизвести и применить процедуру.

Эндолизосомальные компартменты — это самые маленькие органеллы в клетках. Традиционные электрофизиологические методы не могут напрямую измерять изменения напряжения и тока. Эндолизосомный метод патч-зажима позволяет проводить прямые записи, что позволяет нам предварительно проводить исследования в ионных каналах.

Основная экспериментальная проблема заключается в том, что не все соединения эффективно увеличивают лизосомы. Идентификация подходящих клеток затруднена, и даже при идеальных лизосомах успешная регистрация ионных каналов не гарантируется. Мы разработали технику зажима эндолизосомного пластыря для обеспечения прямой электрофизиологической записи с эндолизосомальных мембран.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos