Содержание флавоноидов в процессе роста и развития цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.

В нашем исследовании используется доступный и надежный колориметрический метод для количественного определения общего флавоноида, облегчающий анализ данных в фитохимических лабораториях и поддерживающий исследования соединений с терапевтическими свойствами.

Содержание флавоноидов в календуле изучается во время развития цветка для определения оптимального времени сбора урожая и максимизации его лекарственного и коммерческого потенциала.

Наш протокол представляет собой чувствительный и эффективный микрометод, который позволяет количественно определять флаваноиды с использованием небольших объемов образцов, оптимизируя использование растворителей, а анализ с растительным материалом ограничен.

[Инструктор] Для начала высушите растительный материал в духовке с принудительной подачей воздуха при температуре 40 градусов Цельсия в течение 48 часов. После высыхания достаньте его из духовки, переложите высушенный материал в бумажные конверты и храните их в темноте при комнатной температуре. Заморозьте растительный материал, используя жидкий азот для подготовки к измельчению. Затем измельчите замороженный материал в фарфоровой ступке до получения однородной консистенции. Подготовьте образцы, взвесив 25 миллиграммов измельченного материала из каждого образца. Добавьте к взвешенному материалу 500 микролитров 80% метанола. Чтобы извлечь флавоноиды, инкубируйте смесь при температуре 70 градусов Цельсия в течение одного часа. После инкубации центрифугируйте смесь при 731 г в течение 13 минут. Теперь приготовьте аликвоты, взяв 150 микролитров полученного экстракта, и добавив в него 37 микролитров 80% метанола. Возьмите 50 микролитров экстракта и добавьте 100 микролитров одного моляра ацетата калия, и 100 микролитров 10% хлорида алюминия. Завершите раствор, доведя общий объем смеси до пяти миллилитров с помощью дистиллированной воды. Установите длину волны поглощения спектрофотометра на 415 нанометров и измерьте поглощение раствора. Постройте калибровочную кривую, приготовив растворы кверцетина в диапазоне от 50, 100, 175 и 350 миллиграммов на миллилитр. Для приготовления калибровочных образцов пипетку пипеткой следует накачать 500 микролитров раствора кверцетина из последней точки калибровочной кривой, и добавить в раствор 100 микролитров 10% хлорида алюминия, и 100 микролитров одного молярного ацетата калия. Затем добавьте 1,5 миллилитра 80% метанола и 2,8 миллилитра дистиллированной воды. Дайте калибровочным растворам отдохнуть в течение 40 минут при комнатной температуре. Установите длину волны поглощения спектрофотометра равной 415 нанометрам и измерьте поглощение калибровочных образцов, чтобы построить калибровочную кривую. Наконец, рассчитайте концентрацию флавоноидов и содержание флавоноидов на грамм сухого материала. В этой таблице показано, как концентрация флавоноидов и производство флавоноидов на растение изменяются от начального формирования бутонов до полного цветения и развития плодов в цветочных головках календулы. Более высокие уровни концентрации общих флавоноидов наблюдались между 8 и 11 стадиями, что соответствует бутонам с отделенными чашелистиками до полностью раскрытых цветочных головок. На более ранних стадиях, таких как бутоны с объединенными чашелистиками, и на более поздних стадиях, таких как стареющие цветочные головки, концентрация флавоноидов была на 22-27% ниже по сравнению с полностью раскрытыми цветочными головками. На этом рисунке показано измерение общей концентрации флавоноидов в сухом веществе цветочных головок календулы, язычковых цветков и трубчатых цветков на разных стадиях развития цветка. Полученные результаты свидетельствуют о том, что понимание различий концентрации флавоноидов между различными структурами цветков и стадиями полезно для определения оптимального времени сбора урожая для максимального увеличения содержания флавоноидов в цветочных головках календулы.