Мышиная модель прогрессирующего периодонтита, индуцированного нейлоновой лигатурой во втором верхнем моляре

Сфера наших исследований заключается в изучении клеточных и молекулярных факторов, способствующих пародонтиту, для чего мы используем мышиную модель периодонтита, индуцированного лигатурой.

Недавние исследования установили важность воспаления. Дисбактериоз и системные заболевания являются определяющими факторами развития пародонтита.

Технология, которая в последнее время используется в пародонтологии, включает в себя модели на животных, некоторые из них ищут различные молекулы, протеомное секвенирование, проточную цитометрию и гистологию, среди прочего.

Современные экспериментальные задачи связаны с пониманием взаимодействия между системными заболеваниями и пародонтитом.

Мы используем мышиную модель лигатурного периодонтита, чтобы продемонстрировать, что провоспалительные цитокины А и S участвуют в развитии пародонтита во время беременности.

[Рассказчик] Для начала поместите мышь под наркозом на рабочий стол лицом вверх головой к оператору. Аккуратно потяните каждую ногу без напряжения и закрепите их микропористой лентой, чтобы предотвратить резкие непроизвольные движения. Накройте мышь одеялом или марлей, чтобы сохранить тепло ее тела. Поместите один конец ортодонтической резинки вокруг верхних резцов, а другой конец закрепите на верхнем держателе без натяжения. Затем поместите вторую ортодонтическую резинку вокруг нижних резцов и закрепите ее на нижнем держателе с помощью резиновой ленты. Теперь вставьте разделители щек и осторожно сдвиньте язычок в сторону для улучшения видимости. Расположите микроскоп так, чтобы визуализировать верхние моляры с помощью объектива наименьшего увеличения. После обнаружения увеличенное увеличение для оптимизации комфорта и концентрации внимания оператора. Когда изображение станет четким, определите самый большой и проксимальный моляр M1, следующий моляр M2 и самый маленький и дистальный моляр M3. Используйте нейлоновый шов 6-0 для наложения лигатуры, так как он наносит меньше механических повреждений по сравнению с более широкими швами. С помощью тканевых щипцов удерживайте дистальный кончик нейлонового шовного материала 6-0 и поместите его у основания сосочка с небной стороны в дистальном отделе M2. Надавите светом на основание межпроксимального небного пространства, чтобы продвинуть его к щечной поверхности. Когда шов пересечет, протяните его через межпроксимальное пространство к щечной стороне. Теперь поместите кончик шовной нити у основания межпроксимальной области на мезиальной поверхности M2 с буккальной стороны. Осторожно надавите на него, чтобы пересечь межпроксимальное пространство, и пропустите его обратно через щечное пространство к нёбу. Аккуратно потяните за нейлоновый шов 6-0. Удерживайте кончик тканевыми щипцами, отрегулированными вокруг M2, и закрепите шов с помощью трех простых узлов. Затем разрежьте шов тонкими ножницами. Чтобы освободить мышь, сначала снимите резинку вокруг нижних резцов, а затем разделители щек. Затем снимите резинку вокруг верхних резцов и микропористую ленту с ног. Теперь снимите мышь с рабочего стола и держите язычок набок, чтобы сохранить открытые дыхательные пути и предотвратить закупорку. Заверните мышь в марлю или ткань и положите ее лицевой стороной вверх. Держите животное в тепле, накрыв тканью или марлей, и под наблюдением до полного пробуждения. Нанесите по одной капле гипромеллозы на каждый глаз до тех пор, пока мышь не сможет нормально моргать. Затем верните его в обычную клетку. Чтобы проверить постоянство лигатуры, возьмите мышку. Крепко держите его голову и тело и используйте тканевые щипцы для открытия рта. При свете лампы обратите внимание на нейлоновый шов 6-0 вокруг M2. Для подтверждения образования биопленки с помощью гистологии собирают верхние челюсти у усыпленных животных через 30 дней. Промойте салфетки в 0,9% растворе хлорида натрия и поместите их в маркированные микроцентрифужные пробирки. Зафиксируйте образцы в 4% растворе параформальдегида в течение двух часов при перемешивании. Затем промыть зафиксированные образцы водой из-под крана в течение двух часов. Затем декальцифицируйте образцы в 20 объемах 4% ЭДТА при pH 7,3 в течение 20 дней, меняя ЭДТА каждые четыре дня. Затем погрузите образцы в парафин. Вырежьте из области М2 пять микрометров и прокрасьте их гематоксилином и эозином. Рассмотрите окрашенные срезы под оптическим микроскопом, чтобы описать изменения эпителия борозды, волокон десны и пародонта, высоты и целостности альвеолярного гребня. Измерьте потерю прикрепления, определив расстояние между цементоэмалевым соединением и самой высокой точкой костного гребня с помощью программы цифрового редактирования. После гистометрического анализа проанализируйте данные контрольной группы и группы пародонтологического лечения с помощью U-критерия Манна-Уитни. Пародонтит вызывает потерю тканей у мышей, воспаление, кровотечение и образование пародонтальных карманов на десновом крае к 30-му дню, в отличие от контрольной группы. Гистологический анализ подтвердил значительные структурные повреждения в группе ПТ с наличием пародонтальных карманов, отслойкой волокон и апикальной миграцией эпителия. Также наблюдалась потеря клеточных ядер в десне и кости щечной и нёбной сторон. Напротив, в группе CTL наблюдалась здоровая гистология. Количественный анализ показал значительно повышенную потерю прикрепления в группе ПТ с потерей щечной стороны примерно 209 микрометров и небной стороны примерно 254 микрометра.