Name: Получение первичных культур для визуализации живых клеток кератиноцитов (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Изучите метод культивирования первичных кератиноцитов нулевого пассажа для визуализации живых клеток. Этот протокол позволяет исследовать динамику клеточных процессов в реальном времени.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mateu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+differences+between+neonatal+and+adult+fibroblasts+and+keratinocytes%3A+Donor+age+affects+epithelial-mesenchymal+crosstalk+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Functional differences between neonatal and adult fibroblasts and keratinocytes: Donor age affects epithelial-mesenchymal crosstalk in vitro.</a> Int J Mol Med. 38 (4), 1063-1074 (2016).</li>
<li>Handl, J., Čapek, J., Majtnerová, P., Báčová, J., Roušar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+repeated+passaging+on+the+susceptibility+of+human+proximal+tubular+HK-2+cells+to+toxic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Phy+Res+Aca+Sci+Boh%22%5BJournal%5D)">The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds.</a> Phy Res Aca Sci Boh. 69 (4), 731-738 (2020).</li>
<li>Xiao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+cell+cycle+duration+is+a+phenotype+of+human+epidermal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+The%22%5BJournal%5D)">Short cell cycle duration is a phenotype of human epidermal stem cells.</a> Stem Cell Res The. 15 (1), 76(2024).</li>
<li>Noujarède, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphingolipid+paracrine+signaling+impairs+keratinocyte+adhesion+to+promote+melanoma+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Sphingolipid paracrine signaling impairs keratinocyte adhesion to promote melanoma invasion.</a> Cell Rep. 42 (12), 113586(2023).</li>
<li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image-based+dynamic+high-throughput+analysis+of+adherent+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-prol%22%5BJournal%5D)">An image-based dynamic high-throughput analysis of adherent cell migration.</a> Bio-prol. 11 (6), e3957(2021).</li>
<li>Chapman, S., McDermott, D. H., Shen, K., Jang, M. K., McBride, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+Rho+kinase+inhibition+on+long-term+keratinocyte+proliferation+is+rapid+and+conditional%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+The%22%5BJournal%5D)">The effect of Rho kinase inhibition on long-term keratinocyte proliferation is rapid and conditional.</a> Stem Cell Res The. 5 (2), 60(2014).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+microbiological+and+biomedical+laboratories%22">Biosafety in microbiological and biomedical laboratories</a>. , 6th edition, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health. USA. (2020).</li>
<li>Poumay, Y., Roland, I. H., Leclercq-Smekens, M., Leloup, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+detachment+of+the+epidermis+using+dispase%3A+tissue+spatial+organization+and+fate+of+integrin+alpha+6+beta+4+and+hemidesmosomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inv+Der%22%5BJournal%5D)">Basal detachment of the epidermis using dispase: tissue spatial organization and fate of integrin alpha 6 beta 4 and hemidesmosomes.</a> J Inv Der. 102 (1), 111-117 (1994).</li>
<li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22CellTra%22%5BJournal%5D)">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> CellTra. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li>
<li>Rheinwald, J. G., Green, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+cultivation+of+strains+of+human+epidermal+keratinocytes%3A+the+formation+of+keratinizing+colonies+from+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells.</a> Cell. 6 (3), 331-343 (1975).</li>
<li>Boisseau, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+epidermal+sheets+in+a+serum+free+culture+system%3A+a+further+appraisal+of+the+role+of+extracellular+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Der+Sci%22%5BJournal%5D)">Production of epidermal sheets in a serum free culture system: a further appraisal of the role of extracellular calcium.</a> J Der Sci. 3 (2), 111-120 (1992).</li>
<li>Roshan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+keratinocytes+have+two+interconvertible+modes+of+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">Human keratinocytes have two interconvertible modes of proliferation.</a> Nat Cell Bio. 18 (2), 145-156 (2016).</li>
<li>Nanba, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFR-mediated+epidermal+stem+cell+motility+drives+skin+regeneration+through+COL17A1+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">EGFR-mediated epidermal stem cell motility drives skin regeneration through COL17A1 proteolysis.</a> J Cell Bio. 220 (11), e202012073(2021).</li>
<li>Ścieżyńska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+primary+keratinocytes-a+methods+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Der%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human primary keratinocytes-a methods review.</a> Exp Der. 28 (2), 107-112 (2019).</li>
<li>Guo, A., Jahoda, C. A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+of+human+keratinocyte+culture+from+skin+explants%3A+cell+expansion+is+linked+to+markers+of+activated+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Derm%22%5BJournal%5D)">An improved method of human keratinocyte culture from skin explants: cell expansion is linked to markers of activated progenitor cells.</a> Exp Derm. 18 (8), 720-726 (2009).</li>
<li>Orazizadeh, M., Hashemitabar, M., Bahramzadeh, S., Dehbashi, F. N., Saremy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+enzymatic+and+explant+methods+for+the+culture+of+keratinocytes+isolated+from+human+foreskin%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of the enzymatic and explant methods for the culture of keratinocytes isolated from human foreskin.</a> Bio Rep. 3 (3), 304-308 (2015).</li>
<li>Usta, S. N., Scharer, C. D., Xu, J., Frey, T. K., Nash, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+defined+serum-free+and+xeno-free+media+for+multiple+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+of+tra+med%22%5BJournal%5D)">Chemically defined serum-free and xeno-free media for multiple cell lineages.</a> Ann of tra med. 2 (10), 97(2014).</li>
<li>Lenihan, C., Rogers, C., Metcalfe, A. D., Martin, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+isolation+and+culture+methods+on+epithelial+stem+cell+populations+and+their+progeny-toward+an+improved+cell+expansion+protocol+for+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Cyt%22%5BJournal%5D)">The effect of isolation and culture methods on epithelial stem cell populations and their progeny-toward an improved cell expansion protocol for clinical application.</a> Cyt. 16 (12), 1750-1759 (2014).</li>
<li>Bernstam, L. I., Vaughan, F. L., Bernstein, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keratinocytes+grown+at+the+air-liquid+interface%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Keratinocytes grown at the air-liquid interface.</a> In Vitro Cell Dev Biol. 22 (12), 695-705 (1986).</li>
<li>Ponce, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+primary+keratinocytes+from+piglet+skin+for+compartmentalized+co-culture+with+dorsal+root+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of primary keratinocytes from piglet skin for compartmentalized co-culture with dorsal root ganglion neurons.</a> J Cell Bio. 2 (2), 93-115 (2017).</li>
<li>Nygaard, U. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotics+in+cell+culture%3A+friend+or+foe%3F+Suppression+of+keratinocyte+growth+and+differentiation+in+monolayer+cultures+and+3D+skin+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Der%22%5BJournal%5D)">Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models.</a> Exp Der. 24 (12), 964-965 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,05% трипсин-ЭДТА (1X), 100 мл</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Фильтр на 100 мкм ячейки</td><td>Корнинг</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>15 куб.см Falcon</td><td>Корнинг</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Конический Falcon объёмом 50 куб. см</td><td>Корнинг</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Микропластина с 6 лунками</td><td>Корнинг</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>70% реактивного спирта, 4 литра</td><td>VWR Chemicals</td><td>BDH1164-4LP</td><td>Можешь или разбавить свои собственные</td></tr><tr><td>Амфотерицин B, 50 мл</td><td>Корнинг</td><td>30-003-CF</td><td>Разбавить до 5 раз (50 мкг/мл)</td></tr><tr><td>Дипаза, 100 мл</td><td>Корнинг</td><td>354235</td><td>Разведите 1:1 с помощью HBSS, добавьте 1x гентамицина, простерилизуйте фильтром</td></tr><tr><td>Epilife, 50 мл</td><td>Gibco</td><td>MEP1500CA</td><td>Добавьте HKGS, рассмотрите антибиотики</td></tr><tr><td>Ценность сыворотки плода крупного рогатого скота Инактивированное тепло FBS, 500 мл</td><td>Gibco</td><td>A52568-01</td><td>FBS</td></tr><tr><td>Щипцы</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Гентамицин, 10 мл</td><td>Gibco</td><td>15750-060</td><td>Разбавьте до 50 мкг/мл для 5 раз</td></tr><tr><td>Сбалансированный сольный раствор Хэнка (1X), 500 мл</td><td>Gibco</td><td>14170-112</td><td>(HBSS)</td></tr><tr><td>HBSS 5X PSAG</td><td></td><td></td><td>Это концентрация HBSS + 5X Pen/Strep/Ampho/Gent</td></tr><tr><td>Хибикленс, галлон</td><td>Molnlycke</td><td>57591</td><td>Разведите до 10% с помощью деионизированного H20</td></tr><tr><td>Сыворотка для роста кератиноцитов человека, 5 мл</td><td>Gibco</td><td>S-001-5</td><td>Добавлено в эпилайф</td></tr><tr><td>Пенициллин/стрептомицин, 100 мл</td><td>Корнинг</td><td>30-002-CL</td><td>Разбавьте до 5X (выпускается в 100x стандарте) для 5X PSA — 1X для смены медиа</td></tr><tr><td>Чашка Петри 100 мм x 15 мм</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>Скальпельное лезвие NO 23</td><td>VWR</td><td>76457-480</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE</td><td>Gibco</td><td>12604021</td><td>Менее едкая альтернатива обычному трипсину</td></tr><tr><td>Нейтрализующий раствор трипсина</td><td></td><td></td><td>(TNS), это HBSS с 10% FBS (некоторые используют меньше сыворотки, 5%)</td></tr></tbody></table>

Получение первичных культур для визуализации живых клеток кератиноцитов

Generating Primary Cultures for Keratinocyte Live Cell Imaging

Tracking stem cells and committed progenitor behavior at the single-cell level in human skin has been challenging both in vivo and in ...

generating-primary-cultures-for-keratinocyte-live-cell-imaging

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Биоинженерия

Генерация органотипической культур Плот из первичных кератиноцитов человека

В этом видео описывается выделение кератиноцитов — наиболее заметных клеток эпидермального слоя кожи человека, с помощью комбинации методов ферментативного переваривания и механического разрушения. Этот метод помогает в преимущественном росте кератиноцитов по сравнению с другими типами клеток кожи с использованием селективной питательной среды.

Выделение кератиноцитов кожи человека: метод культивирования первичных кератиноцитов из образцов кожи

В этом видео мы проводим клоногенный анализ кератиноцитов, собранных у взрослых мышей, чтобы определить способность отдельных клеток к пролиферации и образованию колоний. Этот метод забора кератиноцитов полезен для изучения других последующих аспектов кожного химического канцерогенеза и продвижения опухолей.

Анализ образования колоний кератиноцитов: анализ in vitro для оценки способности кератиноцитов расти в колонии

В этой рукописи представлена пошаговая процедура получения и поддержания кератиноцитов человека из выщипанных волос и последующего получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (ИПСК) без интеграции, с помощью эписомальных векторов.

Генерация Интеграция-свободный человек индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, используя волос производный Кератиноциты

Цель этой статьи - предоставить всеобъемлющий и подробный протокол о том, как создать генетически модифицированную органотипическую кожу человека из эпидермальных кератиноцитов и девитализированной дермы человека.

Генерация генетически модифицированных культур Органотипической кожи Использование нежизнеспособных Human дермы

Эпидермальные кератиноциты образуют функциональный кожный барьер и расположены на передней линии защиты хозяина от внешних экологических оскорблений. Здесь мы описываем методы выделения и первичной культуры эпидермальных кератиноцитов из кожи новорожденных и взрослых мышей, а также индукцию терминальной дифференцировки и вызванного УВБ воспалительного ответа от кератиноцитов.

Изоляция и культура кератиноцитов первичной мыши от кожи новорожденных и взрослых мышей

Человеческая кожа выступает в качестве первой линии обороны против внешней среды. Мы представляем метод для изоляции первичных человеческие кератиноциты от взрослых кожи. Эти изолированные кератиноцитов полезны в многочисленных экспериментальных установок и являются весьма подходящую модель для изучения молекулярных механизмов в биологии кожного в витро.

Поколение и культивирование первичных человеческие кератиноциты от взрослых кожи

Здесь мы представляем протокол эффективно изолировать первичной человеческие кератиноциты от взрослых кожных тканей. Этот метод упрощает обычные процедуры с использованием ингибитора Y-27632 рок в средне-прививка спонтанно отделить эпидермальных клеток от кожных клеток.

Упрощенная и эффективный метод для изоляции первичных человеческие кератиноциты от взрослых кожной ткани

Целью этого протокола является изоляция эпидермальных кератиноцитов из псовой кожи взрослых мышей для различных приложений вниз по течению, таких как молекулярная биология, биохимия, флуоресценция активированной сортировки клеток, и первичных в пробирке использует (например, клоногенные приложения кератиноциты).

Изоляция мыши Эпидермальных кератиноцитов и их в пробирке клоногенной культуры

Здесь мы описываем протокол систематического культивирования эпидермальных сфероидов в 3D суспензии культуры. Этот протокол имеет широкий спектр применений для использования в различных типах эпителиальных тканей и для моделирования нескольких заболеваний и состояний человека.

Создание высокопроизводительной системы эпидермальных сфероидных культур для моделирования пластичности стволовых клеток кератиноцитов

Здесь мы предлагаем метод визуализационного анализа живых клеток, который можно использовать для ручного отслеживания линий кератиноцитов пассажа 0 и который позволяет собирать метрики пролиферации, включая судьбу деления клеток и продолжительность клеточного цикла.

Визуализация живых клеток с помощью покадровой съемки для изучения кинетики пролиферации эпидермальных кератиноцитов

Изучите метод культивирования первичных кератиноцитов нулевого пассажа для визуализации живых клеток. Этот протокол позволяет исследовать динамику клеточных процессов в реальном времени.

Получение первичных культур для визуализации живых клеток кератиноцитов

Больше видео