Подготовка и проведение эксперимента по биоисключающей изопозитивной клетке для трансплантации фекалий человека стерильным мышам

Мы изучили взаимодействие между бактериями и хозяином, и наш внутренний и внешний факторы изменили эти отношения, чтобы изменить здоровье. В частности, нас интересует понимание роли бактерий в развитии, прогрессировании и лечении рака. Мы и другие лаборатории микробиома используем систему клеток с положительным ISO для переноса фекального сообщества от человека к мышиному хозяину-реципиенту для создания стабильного и долгосрочного микробного сообщества.

Эта технология позволила нам сделать новое открытие о роли соответствующих клинических бактерий в здоровье и болезнях. Многие проспективные клинические исследования обнаружили связь между конкретными микробами и развитием, прогрессированием рака и ответом на лечение, но корреляция не подразумевает причинно-следственную связь. Гуманизация стерильных мышей образцами человеческих фекалий позволяет проверить причинно-следственную связь в соответствующих моделях рака.

Используя систему ISO-позитивных клеток, мы продемонстрировали, что специфические штаммы bacteroides от пациентов с немелкоклеточным раком легкого, отвечающих на иммунотерапию человека, вызывают реакцию у мышей с ортотопическими опухолями легких. Для начала поместите 10 салфеток в резервуар для закапывания стерилизатора диоксидом хлора и убедитесь, что они полностью намылены. Затем с помощью градуированного баллона наполните большой полиэтиленовый пакет не менее чем 100 миллилитрами стерилизатора диоксида хлора.

Встряхните пакет, чтобы убедиться, что все внутренние поверхности пропитались, и отложите его в сторону. Снимите одну клетку ISO со стойки и поместите ее в бак для стерилизации диоксидом хлора, обеспечив полный контакт с жидкостью. Используйте смоченные салфетки для очистки всех поверхностей клетки.

После замачивания клетки попросите помощника открыть размокший полиэтиленовый пакет. Поместите клетку внутрь и сразу же закройте проем. С помощью пульверизатора опрыскайте отверстие пакета стерилизатором диоксидом хлора.

После того, как все клетки и принадлежности будут упакованы, погрузите химически стойкие перчатки в стерилизатор диоксидом хлора. Тем временем переместите смоченные салфетки в шкаф биобезопасности и замочите все поверхности. Для незащищенных поверхностей выдавите салфетки на них, не касаясь их.

Через 20 минут, надев стерилизованные химически стойкие перчатки, переместите каждую клетку и бутылочку в стерилизованный шкаф биобезопасности. Чтобы открыть герметично закрытую клетку ISO, поднимите белые выступы на двух зажимах по бокам крышки и вытяните каждый зажим в сторону, чтобы разблокировать крышку. С помощью стерильных щипцов внутри клетки на верхней решетке извлеките пустую бутылку из-под воды и поместите ее на внутреннюю сторону крышки.

Снимите резиновый уплотнитель и налейте воду в бутылку, чтобы наполнить ее. С помощью стерильных щипцов поместите насадку на бутылку с водой и плотно прижмите, чтобы запечатать. Затем с помощью стерильных щипцов поднимите решетку и сдвиньте ее на несколько дюймов назад, чтобы создать отверстие в нижней части клетки.

Положите стерильные щипцы на решетку, следя за тем, чтобы ручки не соприкасались с поверхностями клетки. Получив диск для переноса, попросите помощника взять и частично развернуть пластиковую крышку, чтобы промокшая поверхность была обнажена, но не тронута. Надев химически стойкие перчатки, смоченные в стерилизаторе диоксидом хлора, снимите передаточный диск с пластиковой упаковки и положите его на плоскую поверхность внутри стерилизованного шкафа биобезопасности.

Чтобы открыть переводной диск, снимите ленту, уплотняющую окружность диска, а затем снимите крышку. Затем, используя стерильные щипцы, предварительно упертые в решетку, манипулируйте крышкой отсека, чтобы выровнять отверстие с мышью, которую нужно перенести. С помощью стерильных щипцов возьмитесь за основание хвоста мыши через отверстие в крышке передаточного диска, поднимите и перенесите мышь в клетку ISO через отверстие между решеткой и клеткой.

После того, как все мыши будут переведены, замените решетку стерильными щипцами. Поднимите крышку клетки и положите ее обратно на клетку. Поднимите каждый зажим крышки клетки вверх и осторожно опустите его по бокам клетки.

Нажмите на белые язычки, чтобы надежно закрыть крышку клетки. Теперь попросите помощника опрыскать каждую форсунку стыковочной площадки на стойке клетки стерилизатором диоксидом хлора. Выньте клетку из шкафа биобезопасности и пристыкуйте ее к стойке клетки.

Доун новый стерильный хирургический халат и стерильные хирургические перчатки вместо химически стойких перчаток. Чтобы подготовить иглы для зондажа, разверните каждый стерилизационный мешочек и используйте внутреннюю часть мешка в качестве сухой стерильной поверхности для отдыха. Подсоедините иглу для зонда к шприцу.

Откройте трубку для каловой суспензии и наберите по 200 микролитров суспензии в каждый шприц. С помощью щипцов возьмитесь за основание хвостика мыши и поместите его на решетку. Аккуратно ограничьте мышь, потерев дряблую кожу за шеей.

Удерживая мышь в вертикальном положении, вставьте иглу для зонда и осторожно введите каловую кашицу. Сразу после инъекции извлеките иглу. Поместите мышь прямо в одну из стерилизованных чашек для наблюдения.

После того, как все мыши получат зонд, с помощью щипцов переместите каждую мышь обратно в кровать клетки. Структура очеловеченного фекального сообщества мышей значительно различалась между фенотипами ответа во всех трех временных точках. У колонизированных мышей-фекалистов не было выявлено различий в структуре микробного сообщества между первой и второй неделями, а также второй и четвертой.

В то время как невосприимчивые фекалии колонизировали мышей, они показали различную структуру микробного сообщества между первой и второй неделями, но аналогичную структуру между второй и четвертой неделями. У донорских инокулятов человека наблюдалась повышенная представленность Blautia, Eubacterium, ruminococcus и streptococcus, в то время как у мышей-реципиентов наблюдалось повышенное относительное обилие bacteroides, Lachnoclostridium, Marvinbryantia и Parabecteroides.