Животная модель инфекций, ассоциированных с имплантатами, у мышей

Создание стабильной модели на животных предоставляет нам надежные платформы для тестирования методов лечения инфекций, ассоциированных с имплантатами, при одновременном изучении патологической статистики и иммунного ответа в микроокружении инфекции. В борьбе с лечением ЗГУ новые технические технологии, такие как флуоресцентная визуализация, электронный микроскоп, транскриптомика, предлагают мощный выбор для исследования жизненных циклов и будущего бактерий при ЗГУ. Однако сначала нам нужно создать высококачественную и воспроизводимую животную модель PGI.

В настоящее время задача состоит в том, чтобы построить стабильную, воспроизводимую модель, которая имитирует сложное микроокружение in vivo, клиническую реальность для инфекций, ассоциированных с имплантатами. Превосходя модели подкожного абсцесса, модели инфекций, ассоциированных с имплантатами, обеспечивают повышенную клиническую значимость, поддерживают инфекции, улучшают воспроизводимость и большую биобезопасность. Этот метод моделирования отличается высокой безопасностью и надежностью, позволяет всесторонне исследовать патофизиологические механизмы и стимулирует разработку диагностических критериев с целевыми терапевтическими отрезками.

Для начала приобретите культуры золотистого стафилококка. Удалите полную петлю культуры с помощью петли для инокуляции, нанесите суспензию на тарелку с кровяным агаром и инкубируйте. Выберите одну, круглую и гладкую независимую колонию с золотисто-желтой пигментацией и четкой зоной гемолиза.

С помощью стерильной петли введите его в стерильную центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров, содержащую пять миллилитров стерильного триптического соевого бульона. Поместите пробирку в встряхивающий инкубатор, установленный на 37 градусов Цельсия, и встряхивайте со скоростью 200 оборотов в минуту в течение 12 часов. Разбавьте бактериальную суспензию триптическим соевым отваром в соотношении один к 50 и снова инкубируйте.

Затем с помощью спектрофотометра измерьте и запишите оптическую плотность на глубине 600 нанометров, чтобы подтвердить, что бактерии достигли логарифмической фазы роста. Далее пипеткой нанесите три миллилитра бактериальной суспензии в пробирку. Смешайте его с тремя миллилитрами холодного стерильного PBS.

Центрифугируйте смесь при 3000 G в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия. С помощью пипетки выбросьте надосадочную жидкость и аккуратно ресуспендируйте бактериальную гранулу в PBS. Повторно суспендируйте промытую бактериальную гранулу в PBS для дальнейших экспериментов.

Случайным образом разделите 20 мышей дикого типа C57BL bar 6J на две группы: группу инфекции, ассоциированной с имплантатами, и группу подкожного абсцесса. Наклейте отдельные ушные бирки на каждую мышь для индивидуальной идентификации. После обезболивания и подготовки кожи животных с помощью стерильных хирургических лезвий сделайте разрез в один сантиметр в тыльной области каждой мыши.

Затем вставьте стерильный титановый имплантат в подкожный карман, образовавшийся в результате разреза. Теперь с помощью стерильного одномиллилитрового шприца введите 100 микролитров бактериальной суспензии золотистого стафилококка непосредственно на титановую поверхность. Для подкожной группы абсцессов создать, продезинфицировать и зашить разрез непосредственно без установки имплантата.

Введите в место разреза 100 микролитров суспензии золотистого стафилококка с помощью стерильного одномиллилитрового шприца. Чтобы оценить инфекции в периферических тканях, поместите собранный образец ткани в стерильную пробирку. Добавьте в каждую пробирку одинаковую массу стерильного PBS и три стерильных стальных шлифовальных бусины.

Гомогенизируйте ткани в три цикла с частотой 70 Гц в течение 60 секунд каждый с 20-секундной паузой между циклами. После гомогенизации свергните образцы на вихрь в течение пяти минут. Теперь приготовьте серийные разведения гомогената ткани с PBS.

С помощью микропипетки капните по 15 микролитров каждого разведенного гомогената на определенные участки кровяных агаровых пластин. Затем инкубируйте кровяные агаровые пластины при температуре 37 градусов Цельсия без встряхивания в течение 24 часов. В группе инфекций, ассоциированных с имплантатами, к третьему дню развился видимый разрыв раны.

На 10-й день у обеих групп мышей наблюдались признаки заживления раны, причем в группе подкожного абсцесса наблюдалось более выраженное восстановление, чем в группе с инфекцией, ассоциированной с имплантатами, на 14-й день. Бактериальные культуры из инфицированных тканей показали устойчивый высокий рост бактерий в группе инфекций, ассоциированных с имплантатами, во все моменты времени, в то время как в группе подкожного абсцесса наблюдалось прогрессирующее сокращение колоний бактерий с третьего по 14-й день. Сканирующая электронная микроскопия показала все более плотное бактериальное покрытие на титановых листах в группе инфекций, ассоциированных с имплантатами, с третьего по 14-й день.

Окрашивание по методу Гимзы выявило заметное снижение количества бактерий в группе подкожного абсцесса к 14-му дню, в то время как в группе инфекций, ассоциированных с имплантатами, сохранялось высокое бактериальное присутствие на протяжении всего периода. Окрашивание гематоксилином и эозином показало, что воспалительная инфильтрация клеток в группе подкожного абсцесса значительно уменьшилась к 14-му дню, в то время как в группе инфекции, ассоциированной с имплантатами, наблюдалась устойчиво плотная клеточная инфильтрация. Гистологическое исследование тканей сердца, печени, селезенки, легких и почек не выявило видимых повреждений или аномалий в группе инфекции, связанной с имплантатами, по сравнению с контрольной группой.