Мышиная модель расслоения грудной аорты, индуцированного пероральной инфузией β-аминопропионитрила и подкожного ангиотензина II

В этом исследовании была создана мышиная модель расслоения грудного отдела аорты, ТАД, посредством индукции БАПН и ангиотензина II, что обеспечивает подробную процедуру, которая предлагает ценный инструмент для изучения патогенеза ТАД или терапевтических подходов. Комбинация BAPN и ангиотензина II обеспечивает метод создания мышиных моделей TAD, которые достигают высокой частоты TAD и воспроизводят патофизиологические характеристики, напоминающие те, которые наблюдаются при TAD у человека. В будущем наша исследовательская группа объединит клинические и фундаментальные исследования для иллюстрации сердечно-сосудистого патогенеза, уделяя приоритетное внимание открытию новых терапевтических стратегий с помощью механистических идей и трансляционных инноваций.

[Ведущий] Взвесьте каждую мышь и запишите максимальную массу тела, чтобы рассчитать необходимую для эксперимента массу ангиотензина II. Используйте шаблон расчета для определения массы ангиотензина II для каждой мыши на основе максимальной массы тела. Затем рассчитайте общую массу ангиотензина II, необходимую для приготовления 130 микролитров раствора ангиотензина II на одну мышь. С помощью предоставленного шаблона определите объем наполнения раствором ангиотензина II и физиологическим раствором, необходимым для проведения эксперимента. Взвесьте рассчитанное количество ангиотензина II в стерильной микропробирке с помощью аналитических весов. Добавьте в микропробирку рассчитанный объем нормального физиологического раствора. С помощью вихревого миксера тщательно растворите порошок до тех пор, пока не останутся видимые частицы. Взвесьте каждый осмотический насос, включая корпус насоса и замедлитель потока, с помощью аналитических весов. К только что открывшемуся стерильному шприцу объемом 1 миллилитр приложите пломбировочную трубку, и тщательно отасуньте приготовленный раствор ангиотензина II. Удерживайте заправочную трубку в вертикальном положении и удалите пузырьки воздуха из шприца. Аккуратно вставьте конец заправочной трубки в верхнее отверстие осмотического насоса до тех пор, пока трубка не сможет быть вставлена дальше. Держите насос в вертикальном положении и медленно нажимайте на поршень шприца, пока на выходе не появится раствор ангиотензина II. Затем остановитесь и осторожно снимите заливную трубку. Затем осторожно и медленно вставьте замедлитель потока в отверстие насоса, пока между замедлителем и верхней частью насоса не останется зазора. Взвесьте загруженный насос с помощью аналитических весов и запишите значение. Поместите наполненные насосы в стерильный физиологический раствор при температуре 37 градусов Цельсия головкой замедлителя вверх не менее чем за шесть часов до имплантации. Поместите мышь в положение лежа на операционную поверхность. С помощью скальпеля аккуратно сделайте поперечный надрез на коже толщиной 1 сантиметр. Используйте одну пару изогнутых щипцов, чтобы захватить режущий край, а другую пару щипцов — чтобы тупо рассечь подкожную клетчатку, создав карман для осмотического насоса. Вставьте наполненный насос в карман так, чтобы головка замедлителя потока была направлена к хвостовому концу мыши. Аккуратно выровняйте края резцов и закройте кожу, используя 6-0 нерассасывающихся швов. На этом рисунке показана частота расслоения и разрыва аорты во всех экспериментальных группах. Расслоение аорты произошло у 100% мышей в группе BAPN плюс ангиотензин II, при этом у 35% наблюдался разрыв, что превышает частоту в 55% или 60%, наблюдаемую в группе BAPN или BAPN плюс физиологический раствор, в то время как в контрольной группе не было расслоения или разрыва. Морфология общей аорты показала прогрессирующую деформацию в группах BAPN, BAPN плюс физиологический раствор и BAPN плюс ангиотензин II по сравнению с аортами в контрольной группе. Максимальный диаметр грудной аорты был значительно больше во всех группах, получавших БАТН, по сравнению с контрольной группой, без существенных различий между группами, получавшими лечение. Окрашивание гематоксилином и эозином выявило тонкие, однородные стенки аорты в контрольной группе, в то время как во всех группах, получавших BAPN, наблюдалось утолщение и воспалительная инфильтрация. Окрашивание по методу Эластина Ван Гисона показало наличие интактных эластичных волокон в контроле и прогрессирующую фрагментацию волокон с формированием ложного просвета во всех группах, обработанных БАТН.