Мышиный сбор жидкости для промывания носа без загрязнения крови

Наши исследования сосредоточены на разработке метода сбора жидкости для промывания носа у мышей в больших объемах, решая две основные проблемы: достижение высокой производительности и предотвращение загрязнения крови.

Существует два подхода к сбору жидкости для промывания носа: глоточный путь, который дает большие объемы, и трахейный путь, который снижает загрязнение крови.

Наш метод позволяет собрать большой объем жидкости для промывания носа из глотки, в то время как помещение ватных шариков в рот грызуна помогает свести к минимуму заражение крови. Подход является одновременно простым и экономически эффективным.

Чтобы обнаружить загрязнение крови в образце, мы используем метод судебной экспертизы, известный как люминольная реакция. Люминольная реакция проста и более чувствительна, чем другие методы.

Концентрация IgG в крови значительно выше, чем в жидкости для промывания носа. Наш метод, который позволяет избежать заражения крови, имеет решающее значение в иммунологических исследованиях. Он также подходит для анализа других молекул, таких как микробиом, где загрязнение крови может поставить под угрозу точность.

[Рассказчик] Для начала положите усыпленную мышь на спину на хирургическую пластину и зафиксируйте все четыре конечности с помощью штифтов. С помощью одномиллилитрового шприца соберите кровь из сердца. С помощью ножниц откройте брюшную полость, чтобы обнажить висцеральные органы и диафрагму. Надрежьте диафрагму и ребра, чтобы открыть правое предсердие. Затем проколите ножницами правое предсердие, чтобы слить оставшуюся кровь. Поместите три ватных шарика в рот животного, одновременно вытягивая язык вперед. Затем поднимите голову в положение носом вверх и с помощью ножниц отделите нижнюю челюсть, чтобы предотвратить загрязнение крови в жидкости для промывания носа. Замените ватные шарики на свежие, чтобы избежать заражения крови. После того, как кровотечение прекратится, введите 200 микролитров стерильного PBS в хоану и соберите жидкость для промывания носа, выброшенную из ноздрей, в 1,5-миллилитровую трубку. Чтобы приготовить стоковый раствор для обнаружения хемилюминесценции, растворите один миллиграмм люминола и пять миллиграммов перекиси натрия в одном миллилитре стерильной воды внутри 1,5-миллилитровой пробирки. Накройте тюбик алюминиевой фольгой и храните его при температуре четыре градуса Цельсия до использования. Далее приготовьте рабочий раствор, разбавив стоковый раствор в десять раз деионизированной водой. Пипеткой введите два микролитра образца жидкости для промывания носа в лунки 96-луночного планшета. Добавьте по 100 микролитров разбавленного раствора люминола в каждую лунку и кратковременно встряхните 96-луночную пластину, чтобы перемешать содержимое. Непосредственно наблюдайте за реакцией хемилюминесценции в темноте. На этом рисунке представлено сравнение концентраций иммуноглобулина А в различных типах образцов. В жидкости для промывания носа концентрация иммуноглобулина А ниже в образцах, собранных новым методом, по сравнению с обычным методом, в то время как образцы сыворотки и бронхоальвеолярной жидкости для лаважа не показывают существенных различий между двумя методами. Эти данные свидетельствуют о том, что новый метод снижает контаминацию в образцах носа, что приводит к более точным измерениям иммуноглобулина А. Аналогичная картина наблюдается и для иммуноглобулина G, со значительно более низкими концентрациями в жидкости для промывания носа, собранной с помощью нового метода, по сравнению с обычным методом. Напротив, образцы жидкости из сыворотки и бронхоальвеолярного лаважа снова не показывают значимых различий между двумя методами, что позволяет предположить, что новый подход последовательно снижает контаминацию в образцах носа и повышает надежность измерений иммуноглобулина G.