Мышиная модель для оценки отдаленных структурных и функциональных исходов после отмены длительной односторонней обструкции мочеточника

Моя лаборатория работает над механизмами и терапией для улучшения долгосрочных результатов после повреждения почек, и конкретная цель этого протокола заключается в разработке инструмента для изучения долгосрочных результатов после устранения обструкции мочевыводящих путей. Мы разработали мышиную модель односторонней обратимой мочеточниковой обструкции, которая позволяет оценить долгосрочные функциональные и структурные результаты устранения мочеиспускательной обструкции в почке. Другие методы требуют нескольких операций или микрохирургической экспертизы, к которой большинство лабораторий не имеют доступа. Кроме того, поскольку речь идет об односторонней обструкции, большинство других методов не позволяют оценить восстановление без проведения тестов функции почек с расщеплением. На самом деле их всего два. Первый — это последовательное размещение сосудистого зажима в одном и том же положении на проксимальном отделе мочеточника в каждом эксперименте, а второй — удаление сосудистого зажима через несколько дней без повреждения мочеточника или почки.

[Рэйчел] Для начала подготовьте хирургическую сторону мыши, находящейся под наркозом, с помощью антисептиков. Сделайте продольный дорсальный разрез длиной 1,5 сантиметра по средней линии через кожу и подкожные слои с помощью ножниц и щипцов. Сделайте небольшой разрез через левую боковую мышцу и фасцию над почкой. Затем с помощью пары щипцов обработайте левую почку наружу. Использование тупых щипцов. Тщательно рассеките жир на нижнем полюсе и немного соединительной ткани возле мочеточника. Найдите область мочеточника. Затем отделите мочеточник вместе с его соединительной тканью от ножки почки, чтобы избежать включения зажимом почечной вены и артерии. С помощью зажимов откройте сосудистый зажим и расположите его непосредственно под почечной лоханкой на мочеточнике. Используйте маркировку на зажиме, чтобы обеспечить равномерное давление на всех мышей. Теперь с помощью стерильного ватного тампона, смоченного в физрастворе, аккуратно протолкните почку с зажимом обратно в забрюшинное пространство. Затем сшить мышечный слой с помощью рассасывающегося шва. С помощью зажимов для кожи закройте слой кожи. Чтобы снять мочеточниковый зажим, снимите раневые зажимы, затем очистите операционную область, не изменяя форму, используя оригинальные разрезы для доступа к зажиму. Вновь откройте мышечный слой и обнажите забрюшинное пространство. Используйте щипцы, чтобы аккуратно расположить зажим в забрюшинном пространстве, не выходя из почки наружу. С помощью зажимных аппликаторов осторожно откройте зажим, оттягивая окружающую ткань с помощью щипцов, чтобы безопасно удалить ее. Теперь выведите почку наружу, чтобы осмотреть почечную лоханку на предмет обструкции. Опухшая почечная лоханка подтверждает гидронефроз. Протолкните почку обратно в забрюшинное пространство с помощью стерильного ватного тампона, смоченного солевым раствором, и зашите разрез, как показано на рисунке. Чтобы выполнить контралатеральную нефрэктомию, повторно откройте дорсальный участок с помощью исходного разреза кожи. По размеру правая боковая мышца, а фасция над почкой. Затем выведите правую почку наружу с помощью щипцов. Удерживайте правую почку гладкими изогнутыми щипцами и рассеките верхний и нижний полюса, освободив их от окружающих тканей. Освободив почку, завяжите шелковый шов Foro вокруг почечных сосудов и мочеточника с помощью двойного хирургического узла. Подождите примерно 30 секунд, пока почка не потемнеет. Затем удерживайте его гладкими изогнутыми щипцами и извлеките, разрезав дистально до узла с помощью изогнутых ножниц. Аккуратно протолкните оставшуюся ножку почки обратно в забрюшинное пространство с помощью стерильного тампона, смоченного солевым раствором, затем закройте мышечные и кожные слои с помощью швов и зажимов. Типичные измерения выживаемости и функции почек проводились через 84 дня после обратимой односторонней обструкции мочеточника. В функциональных исследованиях сравнивали обратимую одностороннюю обструкцию мочеточника с нефрэктомией по азоту мочевины крови, скорости трансдермальной клубочковой фильтрации и осмолярности мочи после 18 часов лишения воды. Значения осмолярности мочи были заметно ниже, чем у контрольных мышей с нефрэктомией в те же моменты времени.