В естественных условиях Конфокальная микроскопия: стандартная операционная процедура для обнаружения клещей демодекса на краю века
3 июля 2025 г.
Конфокальная микроскопия in vivo является перспективным методом визуализации с высоким разрешением. Мы представляем клиницистам следующую процедуру для обнаружения демодекса на краю века in vivo.
Мы разрабатываем стандартизированный протокол конфокальной микроскопии in vivo для обнаружения век клещей демодекс с целью расширения клинического внедрения. Мы корректируем более поздний из стандартизированных протоколов IVCM, который ограничивает обнаружение клещей демодекса in vivo в клинической практике. Он обеспечивает неинвазивное, безболезненное и быстрое обнаружение in vivo с легким последующим наблюдением, устраняя боль от апелласьона и легкие проблемы с остатками.
[Рассказчик] Для начала очистите объектив устройства с помощью салфеток для чистки объектива. Используйте смоченные спиртом ватные тампоны для тщательной дезинфекции подголовника и подбородка. Нажмите на два черных рычага вместе и потяните подбородок вперед до щелчка, чтобы убедиться, что он находится в правильном горизонтальном положении. Теперь поверните регулировочный винт, чтобы отодвинуть камеру от пациента перед исследованием. Нанесите примерно 0,02 миллилитра офтальмологического геля на основе карбомера на лицевую поверхность линзы микроскопа прибора. Далее снимите стерильный одноразовый полиметилметакрилатный колпачок с защитной крышки. Плотно прижмите боковые стороны колпачка к линзе микроскопа, не касаясь передней поверхности. Затем нанесите одну каплю гелевого заменителя слезы на лицевую поверхность колпачка. Создайте новую карту пациента в программном обеспечении. Теперь нанесите каплю пропаракаина гидрохлорида на край исследуемого века. Переместите камеру сканирования влево с точки зрения оператора. Затем поверните объектив ПЗС-камеры, чтобы отрегулировать управляющее изображение перпендикулярно оптической оси лазерной камеры сканера. Начните новое обследование с помощью программного обеспечения. На вкладке «Данные обследования» выберите «Heidelberg Retina Tomograph Cornea» в раскрывающемся списке «Устройство» и просмотрите диалоговое окно «Настройки модуля роговицы». Выберите FOV 400 в раскрывающемся списке Field Lens и нажмите OK для подтверждения. Затем дождитесь открытия окна сбора данных и проверьте отображение изображения сканирующей лазерной камеры в реальном времени и контрольного изображения. Далее задайте коэффициенты в окне захвата. Выберите 1x в раскрывающемся списке Коэффициент масштабирования ПЗС-матрицы, чтобы задать размер изображения для управления. Установите флажки «Автоматическая яркость» и «Авто», чтобы включить автоматическую регулировку яркости. Убедитесь, что выбран параметр Тип сканирования сечения. Чтобы получить эталонное изображение, отключите автоматическую регулировку яркости. Затем корректирующим штифтом корректируйте фокальную плоскость до тех пор, пока живое изображение не потемнеет, и впоследствии появится яркое отражение, обозначающее переднюю поверхность полиметилметакрилатного колпачка. Нажмите «Сброс» в разделе «Микрометр положения фокусировки» и подождите, пока значение достигнет 0. Затем установите флажок «Автоматическая яркость» и выключите функцию «Автоматический сброс». Теперь отрегулируйте высоту смотрового стола. Положите подбородок пациента на подбородок и прижмите лоб к упору для лба. Отрегулируйте подъем подбородка с помощью черного винта так, чтобы верхние веки пациента совпадали с красными отметками на столбике подголовника. Проинструктируйте пациента смотреть вниз в сторону неподвижного источника света и сохранять неподвижный взгляд. Ватным тампоном переверните верхнее веко и полностью обнажите корень ресницы и глазной край. Поверните регулировочный винт, чтобы выровнять отражение лазерного луча на уровне верхнего века. Затем перемещайте сканирующую лазерную камеру до тех пор, пока край верхнего века не будет мягко касаться центра полиметилметакрилатного колпачка. Внимательно просканируйте корень ресницы от височной до носовой стороны с помощью мельчайших горизонтальных движений глазного края. Поверните линзу микроскопа по часовой стрелке или против часовой стрелки, чтобы изменить фокус и наблюдать за целыми фолликулами и корнями. Записывайте все подозрительные изображения демодекса с помощью ножной педали. После завершения исследования выберите «Быстрая сортировка по времени получения» в диалоговом окне «Параметры», чтобы отобразить изображения от височной до носовой стороны. В 2024 году число субъектов, проходящих конфокальную микроскопию in vivo для обнаружения демодекса, значительно увеличилось во всех возрастных группах по сравнению с 2023 годом, причем наибольшее число наблюдалось в возрастной группе от 21 до 30 лет. Стандартная операционная процедура, введенная в 2024 году, позволила охватить субъектов в возрасте от четырех лет до старше 90 лет.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье представлен стандартизированный протокол конфокальной микроскопии in vivo для обнаружения клещей Demodex по краю век. Этот метод является неинвазивным и направлен на расширение его применения в клинической практике.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Офтальмология
- Методы визуализации
- Клинические протоколы
Теоретические основы
- Клещи Demodex являются распространенными паразитами, влияющими на здоровье век.
- Традиционные методы диагностики могут быть инвазивными и вызывать дискомфорт.
- Конфокальная микроскопия in vivo представляет собой альтернативу с возможностью получения изображений высокого разрешения.
- Целью данного исследования является повышение частоты выявления паразитов и улучшение комфорта пациентов.
Цель исследования
- Разработать стандартизированный протокол для детекции клещей Demodex in vivo.
- Способствовать более простому внедрению метода визуализации в клиническую практику.
- Предоставить неинвазивный и экспресс-метод детекции.
Используемые методы
- Очистка и дезинфекция микроскопического оборудования.
- Нанесение геля на основе карбомера для обеспечения оптимальной визуализации.
- Использование сканирующей лазерной камеры для получения изображений края века.
- Запись и сортировка изображений для последующего анализа.
Основные результаты
- Повышение выявляемости клещей Demodex в различных возрастных группах.
- Стандартизированный протокол позволил провести обследование субъектов в возрасте от 4 до более чем 90 лет.
- Значительный рост числа обследованных субъектов в 2024 году по сравнению с 2023 годом.
- Повышение комфорта пациентов и упрощение последующего наблюдения.
Выводы
- Стандартизированный протокол улучшает выявление клещей Demodex.
- Конфокальная микроскопия in vivo является подходящим вариантом для клинической практики.
- Будущие исследования могут расширить области применения данного протокола.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для индустрии
Стандартизированная konфокальная микроскопия in vivo (IVCM) для обнаружения клещей Demodex по краю века отвечает критической потребности в неинвазивной, воспроизводимой и количественной визуализации в исследованиях поверхности глаза. Данный протокол позволяет проводить быструю и безболезненную оценку в широком возрастном диапазоне, обеспечивая непрерывность трансляционных исследований и снижая процедурную вариабельность в процессах первичного поиска и клинической валидации. Внедрение IVCM повышает прогностическую достоверность моделей глазных заболеваний и способствует общеорганизационной стандартизации для обеспечения сопоставимости результатов различных исследований.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Первичное открытие и валидация мишени
- Обеспечивает прямую визуализацию клещей Demodex in vivo, что способствует снижению рисков при изучении механизмов моделей воспаления поверхности глаза.
- Предоставляет стандартизированный рабочий процесс визуализации для функциональной валидации мишеней в исследованиях по офтальмопаразитологии.
- Облегчает воспроизводимое обнаружение и количественную оценку, повышая прогностическую достоверность при проверке гипотез на ранних этапах.
Скрининг и разработка анализа
- Подготовка валидированных систем неинвазивной визуализации для последующего скрининга антипаразитарных или противовоспалительных соединений.
- Обеспечение стандартизации и воспроизводимости анализа за счет исключения вариативности, зависящей от оператора, которая характерна для методов на основе эпиляции.
- Обеспечение быстрого количественного получения изображений, подходящего для масштабируемого скрининга и лонгитюдных исследований.
Трансляционные и доклинические исследования
- Соответствует конечным точкам, значимым для заболевания, обеспечивая возможность детекции как у педиатрических, так и у гериатрических популяций.
- Поддерживает непрерывность процесса от этапа поиска до доклинической валидации, предоставляя неинвазивный и воспроизводимый результат визуализации.
- Снижает трансляционный риск за счет стандартизации детекции клещей в различных когортах субъектов.
Интеграция конвейера и рабочего процесса
IVCM интегрируется в континуум от этапа открытия до доклинических исследований, предоставляя стандартизированный количественный метод визуализации для исследования поверхности глаза и скрининга антипаразитарных препаратов.
- Поисковая биология: Обеспечивает проверку гипотез и уточнение механизмов воспаления, связанного с Demodex.
- Скрининг: Предоставляет воспроизводимые количественные результаты визуализации для оценки соединений.
- Аналитика: Позволяет объективно измерять и сравнивать количество клещей при различных экспериментальных условиях.
- Трансляционные исследования: Способствует согласованию биомаркеров и обеспечивает преемственность от этапа ранних открытий до доклинической валидации.
- Корпоративное повторное использование: Создает воспроизводимый протокол визуализации для внедрения в многоцентровых и многоэтапных исследованиях.
Влияние на операционную деятельность и предприятие
- Научная ценность: повышает прогностическую достоверность и снижает механистическую неопределенность в моделях поверхности глаза.
- Операционная ценность: стандартизирует процедуры визуализации, повышает воспроизводимость и обеспечивает масштабируемость.
- Стратегическая ценность: улучшает процесс принятия решений о целесообразности дальнейшей разработки (go/no-go) и снижает биологические риски на поздних этапах в портфелях исследований и разработок в области офтальмологии.
- Влияние на портфель: позволяет осуществлять приоритезацию и продвижение программ по изучению заболеваний глаз с учетом рисков.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы с конфокальной визуализацией и знание анатомии поверхности глаза.
- Необходим доступ к специализированному оборудованию IVCM и инфраструктуре для анализа изображений.
- Требуется межкомандная стандартизация для обеспечения согласованного сбора и интерпретации данных.
- Метод применим для широкого возрастного диапазона, однако могут потребоваться корректировки протокола для педиатрических или гериатрических групп пациентов.
- Результаты зависят от подготовки оператора для обеспечения воспроизводимости и минимизации технической вариабельности.
